谢华福
- 作品数：49 被引量：111H指数：5
- 供职机构：泸州医学院基础医学院医学分子生物学实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅自然科学科研项目四川省杰出青年科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Mcl-1和Puma在宫颈癌组织中表达的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨新的凋亡抑制基因Mcl-1在宫颈癌组织中的表达及其与Puma表达的相关性。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法,检测Mcl-1和Puma基因在10例正常宫颈组织及46例宫颈癌组织中的表达。结果 Mcl-1在10例正常宫颈组织中表达较低。46例宫颈癌组织中,40例Mcl-1表达强阳性,占80.7%。Puma的表达仅13例,占32.5%。基因表达阳性率与宫颈癌的病理分级和临床分期有关,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Puma和Mc-1参与了宫颈癌的发生、发展,并且两者在癌组织中的表达可能存在某些相关。
- 薛晓婕刘佳佳谢华福
- 关键词：基因表达调控宫颈肿瘤免疫组织化学
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：2
- 2008年
- 目的;获得JEVE蛋白基因,构建重组表达载体并在E.coli中高效表达。方法:参照GeneBank中的日本乙型脑炎病毒SA14-14株序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因全长,克隆至PUCm-T载体,经测序证实后克隆至原核表达载体pET32a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了JEVE蛋白基因全长1500bp,成功构建了重组质粒pET-32a/JEVE,SDS-PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌中获得表达,表达量占总菌体蛋白的35%。结论:在大肠杆菌中成功表达了JEVE蛋白,为ELISA早期诊断试剂盒的研制和E蛋白基因结构与功能的分析奠定了基础。
- 王丽李洪张志霞刘晓燕谢华福宋杰梅志强
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒基因克隆
- 重组V2毒素延长中性粒细胞的功能性生命期限
- 2001年
- 目的 :揭示V毒素在溶血性尿毒症 (HUS)和其他与多源性大肠杆菌 (VTEC)相关疾病中的病理性损伤作用。方法 :运用流式细胞技术 ,荧光标记探针———BCECF AM和细胞色素C还原法测定超氧离子 (O- 2 )技术。结果 :重组V2毒素 (rVT2 )对中性粒细胞自发性凋亡有着显著性的抑制作用。被rVT2 延迟了凋亡的中性粒细胞仍然保留多种生物学活性 ,如 :细胞表面粘附分子的表达 (CD6 2L减少和CD11b CD18增加 ) ,粘附人脐带静脉血管内皮细胞 (HUVEC)以及产生超氧离子 (O-2 )。结论 :V2毒素延长中性粒细胞的功能性生命期限 ,会加重炎症局部的炎症反应 ,这可能是HUS和VTEC相关疾病的发生过程中 ,中性粒细胞介导的组织损伤的一个重要因素。
- 刘佳佳曾付兰谢华福段承刚甘琳李娟宋杰赤星透近滕启文
- 关键词：中性粒细胞溶血性尿毒症
- 八肽胆囊收缩素对小鼠神经元蛋白质磷酸化的影响
- 2008年
- 目的:从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度,对小鼠神经元在八肽胆囊收缩素(CCK8)刺激下的信号转导通路进行初步研究。方法:将培养的小鼠神经元分为对照组(加入无磷培养基)、实验组(加入CCK8)、拮抗剂组(分别加入CCKA受体拮抗剂L-364718和(或)CCKB受体拮抗剂L-365260)。采用双向电泳法观察CCK8和受体拮抗剂作用下蛋白质磷酸化水平的改变。结果:CCK8作用不同时间后,神经元蛋白质磷酸化状态发生明显改变,涉及的信号转导相关磷酸化蛋白质包括多种蛋白激酶、胞内信号分子、激素受体、转录因子等;动力学分析结果显示,主要的信号转导相关蛋白的磷酸化时间动力学曲线多数呈峰型;应用CCK受体拮抗剂作用后的结果表明,在皮质神经元中同时存在CCK的2种类型受体,其中B型受体介导的信号转导途径更复杂。结论:CCKA型、B型受体均可介导CCK8在神经元的信号转导,其中B型受体介导的信号途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径和JNK途径等。
- 王丽何涛李娟刘晓燕段承刚谢华福宋杰
- 关键词：胆囊收缩素神经元信号转导拮抗剂小鼠
- 家兔缺血再灌注肾组织胰岛素受体的分析
- 2004年
- 目的 :观察家兔急性缺血再灌注 (IR)后不同时相 ,肾组织胰岛素受体及血清胰岛素水平的变化。方法 :采用钳夹肾动脉的方法建造急性缺血再灌注肾损伤模型。实验动物分为对照组、缺血再灌注 (IR)组 ,测定两组动物的肾组织胰岛素受体、血糖和血清胰岛素水平。结果 :IR 2h时 ,对照组、IR组血清胰岛素水平均较术前显著升高 (P <0 0 5 ) ,但IR组胰岛素升高更为显著 (P <0 0 5vscontrol) ,4 8h时对照组胰岛素水平接近正常水平 ,IR组也明显低于 2h时 (P <0 0 5 ) ,但仍高于对照组 (P <0 0 5 )。IR 2h时 ,两组动物血糖均较术前增高 ,但以IR组增高更为显著 (P <0 0 5vscontrol)。放射性配基结合分析法中 ,Scatchard作图得到一下凹曲线。IR 2h ,IR组胰岛素高、低亲和力受体最大受体结合容量Bmax1和Bmax2 ,高、低亲和力常数Kd1和Kd2 均显著低于对照组 (P <0 0 5 )。 4 8h时 ,二组动物Kd1、Bmax1和Bmax2 无明显差异 ,但IR组Kd2 高于对照组 (P <0 0 5 )。结论 :实验结果显示 ,在肾IR过程中 ,内源性胰岛素的作用减弱 ,胰岛素受体数目的减少或与配体亲和力减弱。
- 何涛谢华福段承刚李蓉晖冯志强
- 关键词：受体胰岛素再灌注
- 神经元胰岛素信号转导磷酸化蛋白质组的初步分析
- 2006年
- 目的:采用同位素标记、双向电泳、放射自显影结合生物信息学技术对胰岛素(insulin,Ins)在神经元中信号转导的磷酸化蛋白质组进行分析,从蛋白质磷酸化修饰的角度深入探讨Ins在神经元中的信号转导。方法:取新生乳小鼠脑组织,进行神经元原代培养7天,用32P-NaH2PO4标记,分别加入胰岛素和培养基,分别作用0、5、20、60、120min后提取神经元蛋白。进行双向电泳,放射自显影。通过采用PDQuest2D分析软件进行图象分析,并在Swiss-Prot蛋白质数据库和PPDB磷蛋白数据库中查询,对小鼠神经元Ins信号转导磷酸化蛋白质组进行初步分析。结果:①放射双向电泳自显影图谱显示:刺激后60min、120min蛋白质磷酸化状态发生明显改变。②采用PDQuest2D分析软件对图谱差异分析及SWISSPROT蛋白质数据库和PPDB磷蛋白数据库进行查询,提示Ins在神经元的信号传递涉及到多种不同的信号途径和效应分子。结论:采用同位素标记、双向电泳、放射自显影结合生物信息技术可对Ins刺激神经元中的蛋白质可逆磷酸化修饰进行较为全面、动态的分析,寻找出相应的差异蛋白,并可进行初步的定性分析。
- 宋杰段承刚甘淋李娟谢华福刘晓燕何涛李洪刘佳佳
- 关键词：胰岛素磷酸化修饰蛋白质组双向电泳放射自显影细胞信号转导
- 肝细胞简易分离、培养和鉴定方法初探
- 2004年
- 长期以来,Guguen等[1]的两步胶原酶灌注法分离获得肝细胞的方法,几乎成了肝细胞分离的经典方法;在此基础上又发展了多种不同的培养方法,如在培养瓶内加纤连蛋白(febronectin)以促进肝细胞附壁[2],添加生长因子于培养基促其生长等.但上述方法步骤繁琐,成本较高,且两步胶原酶灌注法主用于大鼠肝细胞的分离,不适于新生鼠肝细胞的分离,甚至分离成年小鼠肝细胞,都因为血管的纤细,在实际应用中也很困难.
- 谢华福刘晓燕何涛余鸿刘广益
- 关键词：肝细胞细胞分离细胞培养细胞鉴定胶原酶
- 应用蛋白质组分析法初步探讨胆囊收缩素在皮质神经元中的信号转导途径
- 2006年
- 目的:通过应用蛋白质组学的方法与技术,对八肽胆囊收缩素(octapeptitecholecystokinin,CCK8)作用于乳小鼠皮质神经元后蛋白质磷酸化状态进行分析,为初步探讨胆囊收缩素在皮质神经元中的信号转导途径提供依据。方法:培养乳小鼠皮质神经元,掺入32P-NaH2PO4(2.03×105Bq/ml)2h,实验组及对照组分别加入CCK8和无磷培养基进行培养,收集细胞,提取蛋白,蛋白含量测定。双向电泳分离蛋白,放射自显影获得磷酸化蛋白质的电泳图谱。结果:①对蛋白质组分析法中各个环节实行了筛选及优化,得到比较清晰的放射自显影图谱。②由放射自显影图谱可见,与CCK8信号转导相关的磷酸化蛋白质大约有46个,包括了多种蛋白激酶、细胞膜受体、胞内信号分子、转录因子等。结论:蛋白质组学的方法与技术可以行之有效的应用于信号转导途径中蛋白质磷酸化状态的分析。根据神经元蛋白质磷酸化状态分析的结果,可推测CCK8在皮质神经元的信号转导途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径等。
- 李娟王丽甘淋刘晓燕谢华福何涛
- 关键词：胆囊收缩素信号转导磷酸化蛋白质
- 无钙及不同钙浓度对培养大鼠心肌细胞膜钙通道活动的影响
- 1997年
- 无钙及不同钙浓度对培养大鼠心肌细胞膜钙通道活动的影响郭勇吴绍华胡礼振谢华福张玉曾晓荣余华刘智飞（泸州医学院组胚教研室）作者应用膜片钳技术对无钙和不同钙浓度孵育的培养乳大鼠心肌细胞膜Ｌ型钙通道活动进行了研究。选用胰酶分离５天的心肌细胞进行实验。研究发现...
- 郭勇吴绍华胡礼振谢华福张玉曾晓荣余华刘智飞
- 关键词：钙通道心肌细胞膜钙浓度培养大鼠细胞外液关闭时间
- ONO-AE-248诱发中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的生化信号转导初探被引量：2
- 2007年
- 目的:研究ONO-AE-248诱发中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡过程中,细胞死亡相关的蛋白分子caspase-3、caspase-8、p-38MAPK和PKC的作用,探讨这种细胞死亡的分子机制。方法:运用光镜和DNA电泳对PMN形态学变化和生化特征进行观察和评估;通过Western blot显示PMN中caspase-3、caspase-8活性改变和p-38MAPK磷酸化改变;运用MTS法检测PKC抑制剂对PMN活性的影响。结果:PMN经ONO-AE-248刺激,绝大多数分叶核融合成单叶核(12小时),DNA琼脂糖电泳结果显示缺乏梯状条带(24小时),而且ONO-AE-248对caspase-3、caspase-8活性和p-38MAPK磷酸化水平无明显影响。然而,PKC抑制剂STS和H-7能显著抑制ONO-AE-248对PMN的促死亡效应。结论:ONO-AE-248所诱导的PMN死亡可能是一种非凋亡性的主动性细胞死亡,即非凋亡性程序化细胞死亡。该死亡过程不依赖caspase-3、caspase-8的活化和p-38MAPK的磷酸化,但是PKC可能发挥正向的调控作用。
- 何浩刘佳佳张姿李昕段承刚谢华福刘晓燕何涛何延政
- 关键词：ONO-AE-248中性粒细胞CASPASEPKC
