费俭
- 作品数：148 被引量：420H指数：9
- 供职机构：同济大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 科研型技术人员参与本科实验教学的探索与实践被引量：2
- 2016年
- 科研实验室内的研究型实验技术人员参与到本科实验课程的实验教学准备与实验指导工作,是科研与实验教学相结合的实践内容之一。这类技术人员有扎实的实验技术能力与学习能力,充实和完善了实验教学师资队伍。实践表明,这类技术人员能快速投入到实验教学中去,对于实验课程的技术支持、教学支持是多方面的,对课程起到了积极的促进作用,也取得了良好的实验教学效果。
- 盛哲津石嘉豪钱洁费俭
- 关键词：实验教学教学模式师资队伍
- 青霉素G酰化酶α亚基Ser177的突变对酶活性的影响被引量：2
- 1991年
- 用盒式突变和定点突变对大肠杆菌青霉素G酰化酶α亚基177位ser进行了突变研究,结果发现所挑选的突变体均无酶的活力,这一结果可能可以用来解释Ser 177附近肽段和一些青霉素结合蛋白青霉素结合区在一级结构上保持同源性的原因。
- 王敏费俭郭礼和张其玖
- 关键词：青霉素酰化酶Α亚基点突变
- 利用CRISPR/Cas9技术构建CreERT2定点敲入Isl1基因小鼠模型及分析被引量：1
- 2015年
- 心肌祖细胞增殖和分化是心脏损伤后修复再生的基础,而Isl1被认为是心肌祖细胞的特异性标志。为了研究以及示踪Isl1+心肌祖细胞及其分化后代,该文尝试利用成簇规律间隔短回文重复序列CRISPR/Cas9系统,将Cre ERT2定点插入到小鼠Isl1内源基因启动子之后,建立了Cre ERT2基因敲入小鼠模型。通过与Rosa26-lox P-neo-lox P-lac Z小鼠(Rosa26-lac Z+)交配,获得Isl1-Cre ERT(KI)/Rosa26-lac Z+双杂合小鼠。经过基因型鉴定、组织表达谱测定和X-gal染色、冰冻切片和石蜡切片等方法,确认基因敲入小鼠的Cre ERT2表达在成年小鼠心脏窦房结、心脏神经节、主动脉弓和肺动脉根部,与文献报道的Isl1表达部位相同。该研究建立的模型可为研究心肌祖细胞的增殖和谱系示踪提供重要的模型。
- 周云鹤顾晓雯杨桦黄丹丹费俭
- 关键词：小鼠模型
- 去甲肾上腺素运载蛋白的克隆筛选与分析
- 去甲肾上腺素(NE)是单胺类递质的一种,它的作用随受体而定,可以是兴奋性的, 还可以是抑制性的。去甲肾上腺素转运蛋白 (NET)当偶联了Na+、Cl-的主动运输可逆浓
- 郭礼和朱丽华黄芳张孝勇费俭
- 文献传递
- 小鼠成釉蛋白基因cDNA全序列的克隆
- 2002年
- 目的 筛选与小鼠牙胚发育相关的特异基因。方法 利用随机引物、反转录酶合成特异和非特异探针 ,采用差异显示方法筛选小鼠牙胚cDNA文库 ,挑选阳性克隆并测序。结果 得到 6个阳性克隆 ,经测序证实其中 1个克隆序列与大鼠成釉蛋白序列高度同源 :其中用pTriplEX 3′引物测得的 5 2 6个碱基序列与大鼠成釉蛋白基因 5′端的 32 5 80序列有 4 97个碱基一致 ,5′引物测得的 5 6 7个碱基序列与大鼠成釉蛋白基因 3′端的 12 85 185 4序列有 5 33个碱基一致。结论 筛选到小鼠釉基质特异蛋白———成釉蛋白基因的cDNA全序列。
- 顾淑萍史俊南刘晗郝建军汪平费俭
- 关键词：小鼠CDNA全序列克隆
- PD-L1基因敲除小鼠构建及初步表型验证被引量：2
- 2019年
- 目的:程序性死亡配体-1(PD-L1)是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一。利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经过鉴定获得F0代阳性小鼠。F0代小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配获得F1代杂合子小鼠,再通过F1代小鼠自交获得F2代纯合子小鼠品系。随后通过Real-Time PCR和流式实验分别检测PD-L1基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。结果:Real-Time PCR和流式实验检测结果显示与野生型C57小鼠相比,PD-L1纯合子小鼠的PD-L1 mRNA相对表达水平和细胞上的蛋白质表达均有显著性下降,仅测定到本底的信号,证实已成功构建PD-L1基因敲除小鼠品系,为PD-L1体内基因功能研究提供了新的小鼠模型。
- 万颖寒慈磊王珏龚慧李俊董茹孙瑞林费俭沈如凌
- 关键词：PD-L1PD-1基因敲除
- 小鼠骨髓造血干细胞、外周血组成随年龄的变化趋势及其相关性分析被引量：1
- 2011年
- 造血干细胞是具有自我更新能力并能分化为血液中各种血细胞组分的多能干细胞。近来研究显示,不同造血干细胞表面标志物标记的造血干细胞具有分化为不同血细胞的趋势,但是这种分化的内在关系仍不清楚。对小鼠CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细胞、外周血组成随小鼠年龄增长的变化情况进行了分析,结果显示:随着年龄的增长,骨髓中的CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细胞比率显著增加;而外周血各组分则随年龄变化呈现不同的趋势。对不同年龄段小鼠的骨髓造血干细胞及其他组分与外周血组分的同步分析发现,外周血中血小板密度变化趋势与CD34^-/Sca-1^+骨髓造血干细胞变化情况相关系数为0.804 8;外周血中淋巴细胞密度变化趋势与CD34^+/Sca-1^-骨髓细胞的变化情况相关系数为0.947 97;外周血中白细胞密度变化趋势与CD34^+/Sca-1^+骨髓细胞变化情况相关系数为0.763 1(大于0.9为极度相关,0.7到0.9为高度相关)。
- 赵凯杨星宇万颖寒孙瑞林费俭
- 关键词：骨髓造血干细胞外周血
- SPR技术与功能基因组和蛋白质组研究被引量：2
- 2003年
- 表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)依据光学-介质相互作用原理建立,属于实时和非标记的测试方法。SPR方法在研究分子间相互作用方面具有其独特的优势,其非标记和实时检测以及可以进行动力学分析的特点,给研究生物大分子的相互作用提供了诱人的解决方案。近来,随着SPR成像技术和SPR芯片制备技术的进展,将为功能基因组学和蛋白质组学研究提供重要的新的技术平台。
- 费俭陈义
- 关键词：表面等离子体共振功能基因组学蛋白质组学
- 逆转录病毒载体介导MGMT和MDR1基因增强人脐血CD34+细胞对联合化疗抗性的研究被引量：1
- 2001年
- 为探讨转染六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT)和多药耐药基因(MDR1)的人脐血CD34^+细胞能否同时增强对卡氮芥(BCNU)和MDR1基因靶药的抗性,应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)cDNA,构建双顺反子逆转录病毒载体G1Na-MGMT-IRES-MDR1,以电穿孔介导的基因转移法导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,采用含BCNU和长春新碱(VCR)的培养基克隆选择后收集重组病毒上清于单向型GP+E86与双嗜型PA317包装细胞行乒乓交互感染,将含MGMT和MDR1双耐药基因重组病毒的上清在细胞生长因子刺激下重复感染经免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人脐血CD34^+细胞,用PCR,RT-PCR,Southern blot,Northern blot,FACS和MTT等方法检测外源MGMT与MDR1基因在CD34^+细胞中的转移和表达。结果显示,DNA测序及酶切鉴定证实MGMTcDNA克隆和双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性,MACS分离纯化后的人脐血CD34^+细胞纯度平均达92%,回收率为75%,含双耐药基因重组病毒的上清最高滴度为5.8×10~5cfu/ml,逆转录病毒载体介导的双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组并获得有效表达,同时传递不同的耐药表型,应用集落计数、PCR方法测定基因转导效率分别为18%和20%,巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在,经双耐药基因修饰的脐血CD34^+细胞对BCNU的IC_(50)较对照组提高4.5倍,对VCR,柔红霉素(DNR)和秋水仙碱(COL)的IC_(50)较未转染细胞分别高7.8,6.6和5.5倍。本研究对降低联合化疗骨髓毒性作用的肿瘤临床研究奠定了实验基础。
- 王季石孙等军林果为费俭
- 关键词：逆转录病毒载体MGMTMDR1基因CD34+细胞
- Ser^(354)和Ser^(357)参与去甲肾上腺素转运蛋白的底物转运
- 1998年
- 对去甲肾上腺素转动蛋白 (NET)第 7跨膜区的Ser3 5 4和Ser3 75 进行了突变研究 .结果表明 ,上述 2个位点双突变后 ,NET的底物转运活力下降到本底水平 .考虑到这 2个氨基酸残基在同一转运蛋白家族中的保守性以及和β 肾上腺素受体中的相似性 。
- 黄芳刘艳红费俭郭礼和WolfgangSchwarz
- 关键词：突变体神经递质NET
