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用表达人溶菌酶基因的重组质粒防治干乳期奶牛乳腺炎被引量：3: 2007年; 将人溶菌酶(human lysozyme,hLYZ)cDNA插入由pcDNA3改造而成的pcDNAK表达载体,用获得的重组载体pcDNAKLYZ转染COS-1细胞,经免疫荧光试验证明能进行正确表达。将重组载体注射于哺乳母鼠,取其乳汁进行溶菌酶活性测定,结果显示,分泌在乳汁中的重组hLYZ高达139mg/L。根据乳汁体细胞检测结果,选择健康奶牛和乳腺炎阳性奶牛,分别在干奶时和产犊前2周2次注射重组质粒pcDNAKLYZ,注射途径为乳腺基部穿刺,注射剂量为300μg/乳区,于产犊后1个月采集奶样进行体细胞检测,结果显示,对前一泌乳期发生的奶牛乳腺炎的治愈率为91.5%,对下一泌乳期奶牛乳腺炎的预防有效率至少为96.97%。由此认为,构建的表达hLYZ基因的重组表达质粒,可以替代抗菌素类油乳剂用于干乳期乳腺炎的防治。; 薛方明孙怀昌钱科仇华磊吴春华尹召华; 关键词：人溶菌酶乳腺炎干乳期奶牛

致奶牛乳房炎链球菌快速鉴别及耐药试验用选择培养液的培养特性研究被引量：4: 2008年; 钱科仇华磊孙怀昌; 关键词：奶牛乳房炎生化试验链球菌耐药培养液细菌学鉴定

奶牛大肠杆菌乳房炎快速鉴别及药敏试验用选择培养液的培养特性研究: 2006年; 由于抗生素的长期和盲目使用,奶牛乳房炎病原菌耐药性问题日益严重。我们以麦康凯培养基为基础,研制出奶牛大肠杆菌乳房炎快速鉴别及药敏试验用MQQ选择培养液。本研究结果显示,在此选择培养液中,除大肠杆菌生长良好外,葡萄球菌、粪链球菌、枯草杆菌等革兰氏阳性菌和沙门氏菌、变形杆菌、多杀性巴氏杆菌、绿脓杆菌、痢疾志贺氏菌等革兰氏阴性菌均不生长;只要接种10μL奶样并于37℃培养24h,即可根据培养液是否浑浊和颜色变化判断奶样中有无大肠杆菌,检测灵敏度为50个细菌;经与标准纸片扩散法药敏试验对比证明,MQQ选择培养液对部分用于奶牛乳房炎治疗的5类8种抗生素的抑菌活性有不同程度的影响,通过调整抗生素使用量可获得与标准方法一致的结果,只要向含适当浓度抗生素的选择培养液中接种10μL奶样并于35℃培养24h,即能根据培养液是否浑浊和颜色变化判断奶样中大肠杆菌对所试抗生素的敏感性,具有简单、快速、价廉和不需专门设备等优点,特别适合我国中、小型奶牛场和基层兽医站使用。; 钱科仇华磊孙怀昌; 关键词：奶牛乳房炎大肠杆菌快速药敏试验

重组人溶菌酶理化及生物学特性的鉴定被引量：4: 2005年; 为了研究转基因小鼠乳腺表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化特性及抑菌活性,将适当稀释的含rhLYZ的母鼠乳汁置于60,72,85,100℃的水浴中,每隔0,1,3,5,10,15,20,30min取样,用微球菌溶解法测定rhLYZ的热稳定性;将稀释乳样的pH值调节为2.0,4.0,5.0,7.4,9.0和10.0,37℃作用30min后检测乳样中rhLYZ的活性;将不同的金属离子加入乳样中,使其终浓度为10mmol/L,然后测定金属离子对rhLYZ活性的影响;用培养的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌涂布琼脂平板,以平板扩散法检测乳样中rhLYZ抑菌谱,在此基础上挑选敏感菌株进行定量抑菌试验。结果表明,转基因小鼠乳腺表达的rhLYZ与人乳中天然hLYZ都具有很强的热稳定性、相似的pH值活性范围和金属离子敏感性,对多种革兰阳性及阴性细菌具有不同程度的抑菌作用。; 李国才孙怀昌钱科居杏珠陈瑾张泉朱秋菊; 关键词：转基因小鼠稳定性抑菌活性

致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌快速鉴别及药敏试验选择培养液的培养特性被引量：4: 2008年; 本研究在Baird-parker培养基基础上,研制出致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌(SA)快速鉴别培养及药敏试验用选择mBP培养液。在此培养液中,除SA生长良好外,链球菌等4种革兰氏阳性菌和大肠杆菌等6种革兰氏阴性菌均不生长;将10μL奶样接种入mBP培养液,37℃培养24h后即可根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中有无SA,检测灵敏度为60个细菌:经与标准纸片法药敏试验对比证明,mBP培养液对常用于奶牛乳腺炎治疗的7类8种抗生素的抑菌活性无明显影响:将10μL奶样或选择培养物接种入含标准抑菌浓度抗生素的mBP培养液中,35℃培养24h后即能根据培养液是否浑浊和产生黑色产物判断奶样中SA对所试抗生素的敏感性。以mBP培养液为基础建立的致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌快速鉴别及药敏试验方法具有简单、快速、价廉和不需专门设备等优点,特别适合我国中、小型奶牛场和基层兽医站使用。; 仇华磊钱科孙怀昌; 关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌快速药敏试验

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