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用8质粒病毒拯救系统产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒的研究: 2008年; 目的利用流感病毒8质粒病毒拯救系统，产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒，建立以冷适应流感病毒株为拯救骨架的反向遗传学技术平台。方法以冷适应、温度敏感、减毒的A／Ann Arbor／6／60（H2N2）流感病毒株作为拯救病毒的骨架，人工合成了该病毒株的6个内部基因片段，即PB2、PB1、PA、NP、M和NS，同时引入5个氨基酸突变作为标签。6个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接，构建6个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒：pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS。结果6质粒与PR8的表面基因HA和NA进行“6＋2”组合的病毒拯救，8个重组质粒共转染COS-1细胞，成功拯救出了具有血凝活性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒，命名为rMDV-A。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝（HA）效价为1：2^9～1：2^10。结论构建的A／Ann Arbor／6／60的6个内部基因的病毒骨架拯救系统，为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发提供了试验材料。; 杨鹏辉石辛甫颜艳罗德炎张钰邢丽龙进学刘秀梵王希良; 关键词：流感病毒反向遗传学

苹果SERRATE基因在干旱胁迫下的功能分析: 苹果(Malus×domestica)是世界四大水果之一。西北黄土高原是苹果的优质产区,但是降水量较少且季节分配不均匀,对苹果产业的发展产生了不利影响。因此,从苹果中鉴定响应干旱的基因并对其功能进行深入研究,对培育品质优...; 颜艳; 关键词：苹果 SERRATE 干旱胁迫转基因; 文献传递

口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究被引量：3: 2007年; 目的构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础。方法将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达。以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平。结果构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生。结论构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础。; 郭习勤焦新安王栋董梅邢丽颜艳何维明王希良; 关键词：鼠疫耶尔森菌鼠疫 DNA疫苗伤寒沙门菌

用反向遗传8质粒系统构建流感H1N1重组病毒: 2007年; 为了建立用于流感病毒拯救的反向遗传操作系统,用RT-PCR方法扩增得到A型流感病毒流行株A/shanghai/7/99的HA和NA基因,将其克隆到pGEM-T载体上并测序,挑选阳性克隆分别用BsmBⅠ、BsaⅠ酶切,连接到以BsmBⅠ酶切的双向转录/表达载体pAD3000上,获得重组质粒pAD-HA和pAD-NA,分别与含A/PR/8/34流感病毒7个基因的阳性质粒共转染COS-1细胞,拯救了重组病毒R-HA-PR8和R-NA-PR8,说明构建的重组质粒pAD-HA和pAD-NA是正确的,将pAD-HA和pAD-NA与含A/PR/8/34流感病毒6个基因的阳性质粒共转染COS-1细胞,培养48 h后吸取上清液及COS-1细胞,接种10日龄SPF鸡胚,孵育96 h后,收获鸡胚尿囊液进行血凝和血凝抑制试验。结果显示,鸡胚尿囊液中重组病毒H1N1的血凝效价和血凝抑制效价均为29,鸡胚半数感染剂量为10-8.5~10-9。病毒的成功拯救为进一步深入研究流感病毒的基因功能以及流感新型疫苗的研发奠定了基础。; 颜艳杨鹏辉罗德炎崔萍王希良何维明; 关键词：流感病毒反向遗传学重组病毒

用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究被引量：3: 2007年; 目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变。PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体。该重组质粒与PR8进行“7+1”组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞。结果经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒。结论利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础。; 杨鹏辉颜艳罗德炎邢丽刘秀梵王希良; 关键词：流感病毒反向遗传技术 CDNA 重组病毒

以人乳头瘤病毒16 L1为载体的流感通用疫苗初步研究: 2008年; 目的构建以人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16 L1为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区（M2e）通用疫苗杆粒，利用昆虫细胞杆状病毒表达系统，进行初步的蛋白表达。方法利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HPV16 L1相连。经酶切、酶联将融合基因插入pFastBac HTA载体，在DH10Bac细胞中进行同源重组，经测序鉴定后构建M2e-HPV16 L1杆粒，脂质体转染sf9昆虫细胞，收获并扩增含有M2e-HPV16 L1的杆状病毒，经扩增后获得高效价的重组杆状病毒，用SDS-PAGE、免疫荧光法和电镜检测目的蛋白的表达。结果构建了以HPV16 L1为载体的M2e通用疫苗杆粒，通过转染sf9昆虫细胞得到初步M2e-HPV16 L1融合蛋白表达。结论成功构建了HPV16 L1与甲型流感病毒M2e融合蛋白的病毒样颗粒，为流感通用疫苗的研制奠定了基础。; 刘蕊李志奎王希良罗德炎颜艳陈中伟花艳红; 关键词：病毒样颗粒

2006～2007年流行流感病毒减毒疫苗株的构建(英文)被引量：3: 2008年; 选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株作为骨架病毒,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入5个氨基酸突变(PB1-391E,581G,661T,PB2-265S,NP-34G).HA和NA来源于2006～2007当年流行株A/New Caledonia/20/99(H1N1).8个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接,构建8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒:pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS、pMDV-A-HA、pMDV-A-NA.6质粒与当年流行株的表面基因HA和NA进行"6+2"组合的病毒拯救,8个重组质粒共转染COS-1细胞,成功拯救出了具有血凝性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒.鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价为1∶29～1∶210.构建的A/AA/6/606个内部基因的病毒骨架拯救系统,为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.; 杨鹏辉叶艺石辛甫罗德炎张钰颜艳张鹏飞段跃强邢丽刘秀梵王希良; 关键词：流感病毒反向遗传学

以霍乱毒素重组B亚单位为佐剂的流感抗原滴鼻免疫效果研究被引量：4: 2007年; 研究霍乱毒素重组B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,rCTB)为佐剂的流感抗原滴鼻免疫小鼠后,小鼠的体液免疫和局部黏膜免疫反应。三价流感病毒灭活抗原及裂解抗原按比例与rCTB配伍,滴鼻免疫小鼠,分析血清中IgG和IgM的动态变化,二免三周后,分析血清中HAI的变化,收集鼻、肺冲洗液,分析IgG和sIgA的变化。结果表明:全病毒组及rCTB+裂解抗原组各项指标变化较明显,小鼠血清IgG和IgM在二免三周后仍维持在较高的水平,而其他两组均呈下降趋势;全病毒组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度均高于rCTB+全病毒组(P<0.01),而rCTB+裂解抗原组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度明显高于裂解抗原组(P<0.01)。研究表明:以全病毒抗原及rCTB+裂解抗原滴鼻免疫小鼠,均可诱导小鼠产生较强的系统免疫反应和局部黏膜免疫反应。rCTB与流感裂解抗原配伍滴鼻,可提高抗原的免疫原性,增强机体的黏膜免疫应答反应。; 刘吏婷江海燕颜艳崔平王希良王建华; 关键词：流感免疫效果

A型流感病毒冷适应减毒株拯救体系的建立: 本文对A型流感病毒冷适应减毒株拯救体系的建立进行了研究。文章选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)(MDV-A)流感病毒株作为骨架病毒，运用8质粒系统拯救出冷适应减毒的A型人流感病毒，建...; 颜艳; 关键词：冷适应减毒株温度敏感病毒株分株; 文献传递

挤乳过程和盛乳桶对关中奶山羊生鲜乳中细菌污染的影响: 为了解挤乳过程和盛乳桶对关中奶山羊生鲜乳细菌污染的情况,对83份关中奶山羊生鲜乳进行了菌落总数和大肠菌群的检测.结果表明,直接从乳房挤出的样品,菌落总数大都在500个/mL～5000个/mL之间,92.77％的样品大肠菌...; 张彦明郭抗抗王英颜艳; 关键词：关中奶山羊菌落总数大肠菌群细菌污染; 文献传递

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颜艳

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