高洲
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- HGF基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用
- 2013年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用及其机制。方法:采用HGF基因重组质粒pVITRO2-HGF转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小;8周后获取瘤组织,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组化检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度(MVD),并进行相关分析。结果:造模成功率为96.7%。HGF转染组的瘤体积明显大于HGF转染+VP-16组(P<0.01)、未转染组与空载体组(P<0.01),HGF转染+VP-16组也大于对照组(P<0.01),未转染组与空载体组间无显著差异(P>0.05)。pVITRO2-HGF转染组凋亡指数显著低于对照组(P<0.01),经VP-16诱导后凋亡增加(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。pVITRO2-HGF转染组的MVD显著高于对照组(P<0.01),但经VP-16诱导后血管增生降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05),对照组间无显著差异(P>0.05)。结论:HGF基因转染可显著促进裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,明显抑制凋亡的发生,这一效应可能与其促进肿瘤血管新生和抑制肿瘤细胞凋亡有关。
- 赵行郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：基因转染淋巴瘤裸鼠异种移植物
- NK4拮抗HGF作用及其促细胞凋亡效应的研究
- 目的:NK4拮抗肝细胞生长因子(HGF)作用及其促细胞凋亡效应诱导五种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系 Raji、宫颈癌细胞系He La、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549...
- 郑筱娇沈蓉蓉高洲岑东罗建平吕建新裴仁治
- NK4拮抗HGF促进肿瘤细胞凋亡的生物学效应被引量：3
- 2013年
- 观察NK4通过拮抗肝细胞生长因子(HGF)诱导不同肿瘤细胞凋亡,研究其生物学作用及分子机制.以足叶乙甙(VP-16)诱导凋亡,分别或经HGF蛋白、NK4蛋白处理5种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549),采用流式细胞术(FCM)、吖啶橙(AO)染色法、苏木素-伊红(HE)染色法定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析.FCM发现,经VP-16处理5种肿瘤细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.001),而HGF+VP-16组凋亡率明显下降(P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.05).AO染色和HE染色结果也证实,5种肿瘤细胞经VP-16处理后凋亡率均显著增高(P<0.001,P<0.001),而HGF+VP-16组细胞凋亡率均明显低于VP-16组(P<0.001,P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.001,P<0.05).此外,发现NK4+VP-16组、HGF+NK4+VP-16组、VP-16组等3组间凋亡率无统计学差异(P>0.05).以上结果提示,HGF蛋白可抵抗凋亡诱导剂VP16的作用,明显降低细胞凋亡;NK4通过竞争性抑制HGF从而促进肿瘤细胞的凋亡,具有潜在的肿瘤治疗价值.
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：肝细胞生长因子凋亡拮抗
- 肝细胞生长因子的表达、纯化和基本活性研究被引量：1
- 2012年
- 目的通过构建肝细胞生长因子（HGF）基因的重组原核表达载体，转化大肠杆菌，制备HGF重组蛋白并初步证实其活性。方法克隆HGF基因插入载体pET-26b（＋），构建重组原核表达载体pET-26b（＋）-HGF，转化E-coliRosseta（DE3）。IPTG诱导转化菌表达重组蛋白，采用Ni—NTA树脂亲和层析法进行纯化，复性后冷冻干燥。结果HGF基因重组原核表达载体pET．26b（＋）．HGF构建成功。转化pET-26b（＋）-HGF的EcoliRosseta（DE3）以包涵体形式大量表达目的蛋白，占菌体总蛋白的38％，并经Westernblot证实。经Ni—NTA树脂亲和层析法纯化后HGF蛋白纯度约为95％，作用于人非小细胞肺癌细胞系A549细胞发现可促进其增殖、迁徙并抑制凋亡。结论成功构建了HGF基因重组原核表达载体pET-26b（＋）-HGF，转化E-coliRosseta（DE3）后成功表达，纯化复性回复重组HGF蛋白结构，经体外实验证实具有生物学活性。
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- 关键词：肝细胞生长因子蛋白纯化活性
- 肝细胞生长因子诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞抗凋亡效应研究被引量：3
- 2017年
- 目的观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对经凋亡诱导剂足叶乙苷(etoposide,VP-16)诱导后慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞凋亡的抑制作用,并分析其分子机制。方法采用苏木素-伊红(HE)染色、吖啶橙染色(AO)染色对凋亡细胞形态特征变化进行定性/半定量分析;采用Annexin V-FITC/PI双染、JC-1染色检测细胞膜表面的PS外翻和完整性及线粒体膜电位分析凋亡细胞生化特征变化;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9等凋亡相关基因mRNA表达的变化,综合评价HGF抗凋亡效应,并阐述其分子机制。结果 HE法、AO法发现HGF+VP-16组凋亡率明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.05),提示HGF可显著抑制凋亡的发生;Annexin V-FITC/PI双染法、JC-1染色法发现HGF+VP-16组早期凋亡细胞明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.001),提示HGF具有抗K562细胞早期凋亡效应;凋亡相关基因mRNA表达检测结果发现,HGF+VP-16组的Bcl-2 mRNA表达量明显高于VP-16组(P<0.001),而Bax mRNA、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA表达量明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.001、P<0.001),证实HGF抑制凋亡基因表达,同时促进抗凋亡基因的表达,提示HGF具抗凋亡效应。结论 HGF显著抑制经VP-16诱导的CML K562细胞的凋亡,该抗凋亡效应可能通过HGF/c-Met途径调控PI3K/AKT通路而实现。
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- 关键词：肝细胞生长因子慢性髓细胞性白血病K562细胞凋亡
- NK4竞争性阻断肝细胞生长因子／Met途径抑制人Raji淋巴瘤移植瘤的增殖效应被引量：1
- 2014年
- 目的观察NK4对裸鼠人Raji淋巴瘤移植瘤增殖的抑制作用，探讨其分子机制。方法构建肝细胞生长因子（HGF）基因转染的裸鼠人Raji淋巴瘤移植瘤模型。成瘤后经尾静脉连续4周注射NK4蛋白（每只50μg／a），动态监测裸鼠体质量和瘤体生长。8周后取瘤组织，采用即时荧光定量PCR检测移植瘤HGFmRNA、c—MetmRNA的表达，分别采用末端转移酶标记技术（TUNEL法）和免疫组织化学检测移植瘤组织的凋亡系数（AI）和微血管密度（MVD），进行综合分析。结果成功构建裸鼠移植瘤模型。各组裸鼠体质量均下降，以NK4蛋白组最大，但组间差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF基因转染组瘤体积大于对照组（P＜0．01），对照组间差异无统计学意义（P＞0．05），注射NK4蛋白后瘤体积均明显减小（P〈0．01）。注射NK4蛋白后，HGF基因转染组HGFmRNA、c-MetmRNA表达增强（P＜0．01）。HGF基因转染组AI（33．5％±12．3％）显著低于对照组（89．1％±22．3％，81．9％±27．O％，P＜0．05），但NK4蛋白注射后增加明显（119．1％±18．9％，P＜0．01）。HGF基因转染组MVD（28．5±2．0）较对照组（12．2±1．4，13．84-1．3，P＜0．01）为高，但NK4蛋白注射后MVD降低（15．54±2．5，P＜0．01）。结论NK4可显著抑制HGF基因转染的裸鼠人Raji淋巴瘤移植瘤的生长，其可能经竞争性阻断HGF／Met信号转导途径而促进肿瘤细胞凋亡并抑制瘤内血管新生而发挥其效应。
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- 关键词：肝细胞生长因子淋巴瘤
