冯燕
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人15-羟基前列腺素脱氢酶原核表达体系的构建
- 本文研究目的：检测15-羟基前列腺素脱氢酶(15-Hydroxyprostaglandin dehydrogenase，15-PGDH)在大肠癌组织中的表达情况，确定其与大肠癌发病的相关性;构建15-PGDH原核融合表达...
- 冯燕
- 关键词：大肠癌原核融合表达生物学功能
- 文献传递
- 大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达
- 2008年
- 目的构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白。方法以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,并经Ni2+-NTA亲和层析纯化,目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组质粒pBV220-PGDH-His6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确。经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。Western blot验证了表达蛋白的特异性。纯化后目的蛋白纯度大于95%。结论已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白。
- 李美宁冯燕常冰梅解军张悦红殷云勤程牛亮
- 关键词：大肠癌15-羟基前列腺素脱氢酶克隆原核表达
- 前列腺素脱氢酶对大肠癌SW480细胞恶性增殖的抑制作用被引量：6
- 2008年
- 目的研究15-羟基前列腺素脱氢酶(15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase,PGDH)对SW480大肠癌细胞恶性增殖的抑制作用及机制。方法构建PGDH真核表达质粒(pcDNA3.1-PG-DH),在大肠癌SW480细胞中转染并表达PGDH蛋白,采用MTT法、平板集落和软琼脂克隆形成实验,分析PGDH对SW480恶性增殖的影响。Westernblot检测p53、p21蛋白表达改变情况。结果转染表达PGDH后,细胞增殖受到抑制,实验组平板集落形成率为16%,而对照组为58%,两者间差异显著(P<0.05);肿瘤细胞的停泊-非依赖能力降低,实验组软琼脂克隆体积小且形成个数(7±1.68)明显少于对照组(16.3±3.63),差异显著(P<0.05)。Westernblot分析表明,转染表达PGDH后伴随着p53、p21蛋白表达升高。结论转染表达PGDH蛋白能够部分逆转大肠癌SW480细胞的恶性表型,其过程可能与p53、p21通路密切相关。
- 李美宁冯燕解军常冰梅张悦红殷云勤程牛亮
- 关键词：大肠癌细胞生长P53
