刘惠萍
- 作品数：18 被引量：114H指数：7
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- 滋养层细胞原代体外培养体系的建立被引量：7
- 2006年
- 目的 改善体外分离、培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞（cytotrophoblast CTB）的方法，并对其进行鉴定，探讨CTB的一些生物学特性。方法 取人工流产6～8周妊娠绒毛，机械法分离，复合酶消化，差速贴壁法纯化细胞后继续培养。倒置显微镜观察其大体形态及体外转化，HE染色观察其胞核情况，免疫细胞化学观察细胞的细胞角蛋白18（cytokeratin CK18）、波形蛋白（vimentin Vim）和人胎盘催乳素（human placental lactogenh PL）的表达。流式细胞仪测定其细胞周期。结果分离培养的CTB呈不规则多角形片状，单层铺展生长。所有的细胞都表达CK18，Vim只在部分细胞表达，hPL免疫反应阳性物质在胞浆表达。细胞周期显示约有58％的细胞处于G0／G1期。结论 成功分离培养了人早孕绒毛CTB，方法简便易行，获得的细胞形态单一、生长稳定，为进一步研究CTB在妊娠生理和妊娠免疫耐受中的作用提供了实验基础。
- 刘惠萍王若光李春梅李宾玲曾润清秦明春易鹏飞
- 关键词：滋养层细胞免疫细胞化学细胞培养生物学特性
- 基于激光解析/离子化-飞行时间质谱技术的中药阿胶蛋白质组分析被引量：28
- 2007年
- 目的:应用激光解析/离子化-飞行时间质谱技术对传统中药阿胶蛋白/肽成分进行蛋白质组初步分析,建立阿胶蛋白质质量指纹图。方法:实验于2004-06/2005-03在湖南中医药大学蛋白质组学实验室完成。采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得阿胶水溶性蛋白/肽,采用Ciphergen BiosystemsInc.ProteinChipRBiology System(美国PBSⅡ+)及配套的NP10芯片、激光解析/离子化-飞行时间质谱技术,分析阿胶Mr1500～13000区间蛋白质、肽分布及其相对分子质量。结果:Mr2000～4000区间显示4个相对分子质量峰,可能是2种肽;Mr4000～5000区间显示8个相对分子质量峰,可能为2种肽;Mr5000～5500区间显示16个相对分子质量峰,约为3种肽;Mr5500￣6200区间无峰;Mr8100～8200区间显示5个相对分子质量峰,可能为1种肽;Mr11200～11400区间显示5个相对分子质量峰,可能为1种蛋白质。不同质量浓度稳定获得的有意义蛋白/肽共计9个。不同相对分子质量肽之间差分别提示可能为丙氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸残基相对分子质量。结论:通过分析,可以形成阿胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为阿胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证阿胶功能相关活性蛋白质/肽组分提供可靠信息。
- 王若光尤昭玲刘小丽刘惠萍秦明春李春梅胡维新
- 关键词：阿胶蛋白质蛋白质组
- 兔子宫平滑肌细胞的原代培养与鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的研究子宫平滑肌细胞(MSMC)的培养方法及一些生物学特性。方法运用酶消化后组织贴块法及胶原酶Ⅰ消化法进行兔子宫平滑肌细胞的培养,并用倒置生物显微镜、HE染色进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。结果运用此两种方法成功培养了兔子宫平滑肌细胞,培养的细胞呈典型“峰-谷”样生长,HE染色观察细胞呈梭形,胞浆丰富,核大圆形或椭圆形。免疫组化S-P法检测a-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(a-SMActin)表达强阳性。经传代纯化,纯度达99%以上,细胞生长特性未见异常改变。结论酶消化后组织贴块法及胶原酶Ⅰ消化法培养的兔子宫平滑肌细胞生长稳定性好,培养与纯化能同步进行,方法简便,经济。
- 曾润清刘庚贵刘惠萍李冰凌王若光
- 关键词：子宫平滑肌细胞细胞培养原代培养传代培养
- 人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定被引量：18
- 2007年
- 目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4～5 h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。
- 秦明春王若光秦莉花刘小丽李春梅刘惠萍叶赞
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞培养流式细胞术细胞周期
- 黄芪丹参复方成分对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘滋养细胞单核细胞趋化蛋白mRNA表达的影响被引量：10
- 2005年
- 目的研究黄芪丹参复方成分提高胎盘血供的分子机制,为临床有效防治胎盘血供不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离黄芪丹参复方有效成分,运用一氧化氮合酶(NO S)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAM E)制备一氧化氮合成阻滞大鼠模型,核酸原位杂交法检测胎盘局部滋养细胞单核细胞趋化蛋白-1(M CP-1)mRNA表达的变化。结果一氧化氮合成阻滞模型组滋养细胞M CP-1 mRNA表达染色明显增强,空白组、黄芪丹参复方成分治疗组及硝酸甘油对照组均能减弱M CP-1 mRNA的表达,与模型组比较差异显著(P<0.01)。结论黄芪丹参复方成分降低母胎界面妊娠免疫反应,阻抑胎盘免疫病理损伤,可能与抑制M CP-1 mRNA表达及母胎界面炎性细胞游走、浸润有关,是其能够提高胎盘血液供应的机制之一。
- 王若光尤昭玲陈学东李春梅贺福元刘小丽刘惠萍
- 关键词：一氧化氮滋养细胞丹参胎盘
- 肿瘤坏死因子α诱导蜕膜细胞凋亡模型建立及黄芩苷对蜕膜细胞凋亡的影响被引量：6
- 2007年
- 目的:探索建立肿瘤坏死因子诱导蜕膜细胞凋亡模型,观察黄芩苷对早孕蜕膜细胞凋亡的影响,初步分析黄芩清热安胎作用机制。方法:实验于2006-04/09在湖南中医药大学国家重点二级实验室病理生理实验室完成。取湖南中医药大学第一附属医院门诊人流手术室正常妊娠40d健康孕妇人流组织,患者知情同意。体外常规进行蜕膜细胞培养,选取经鉴定的4、5代细胞蜕膜细胞,用不同浓度(0.5,2.0,10.0,50.0μg/L,共设4组,并设空白对照组)的肿瘤坏死因子α作用于蜕膜细胞,四甲基偶氮唑盐比色实验分析肿瘤坏死因子α对蜕膜细胞活力的影响,荧光细胞染色观察确定蜕膜细胞凋亡模型的建立。选取适宜浓度的黄芩苷作用于正常蜕膜细胞及肿瘤坏死因子α诱导的凋亡蜕膜细胞(设肿瘤坏死因子α模型组,黄芩苷组,肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,并设空白对照组),培养24h后,四甲基偶氮唑盐比色实验分析黄芩苷对蜕膜细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:实验成功获取足够量的细胞,经泌乳素免疫组化鉴定为较高纯度的蜕膜细胞。①肿瘤坏死因子α作用后的蜕膜细胞活性均低于空白对照组,并且随着肿瘤坏死因子α浓度越大,活力越小。10.0,50.0μg/L肿瘤坏死因子α作用后蜕膜细胞活性与空白对照组比较,差异有显著性意义[(0.196±0.040),(0.106±0.020),(0.317±0.020),P<0.05]。但50.0μg/L时经形态学观察有部分细胞漂浮、死亡。②肿瘤坏死因子α模型组蜕膜细胞活性低于黄芩苷组和肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,差异具有显著性意义[(0.27±0.03),(0.49±0.01),(0.38±0.02),P<0.05]。③流式细胞术示空白对照组蜕膜细胞凋亡率低于其他各组,差异均有显著性意义[(1.48±0.45)%,(16.40±0.82)%,(9.78±0.26)%,(10.96±0.92)%,P<0.05]。在荧光显微镜下,肿瘤坏死因子α作用后凋亡的蜕膜细胞细胞核变小皱缩,可见致密强荧光。�
- 秦明春王若光李春梅刘小丽秦莉花刘惠萍
- 关键词：黄芩苷细胞凋亡蜕膜细胞流式细胞术
- 基于激光解析/离子化飞行时间质谱技术的中药龟甲胶蛋白质组分析被引量：15
- 2007年
- 目的对传统中药龟甲胶蛋白质、肽成分进行组蛋白质组分析。方法采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐法获得龟甲胶蛋白质成分,美国Ciphergen Biosystems Inc.ProteinChip Biology System(PBSⅡ+)及配套的NP10芯片、激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS,Surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flightmass spectro metry)技术,分析了龟甲胶1 500～13 000 Da区间蛋白质、肽分布及其分子量。结果龟甲胶蛋白质/肽质量1 500～3 000区间显示1个分子量峰;4 800～5 400显示3个分子量峰,其中相对分子量分别相差410.8、151.7;8 000～8 600区间显示1个分子量峰;10 000～13 000区间显示1个分子量峰。共获得6个肽分子量峰。结论通过分析,可以形成龟甲胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为龟甲胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证龟甲胶功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础。
- 李春梅王若光王陆颖刘小丽刘惠萍尤昭玲胡维新
- 关键词：蛋白质蛋白质组
- 黄芪丹参复方成分提高胎盘血供分子机理研究
- 王若光尤昭玲李春梅杨正望陈学东陈喜容李杰贺林谢辉刘小丽刘惠萍秦明春
- 本成果由国家自然科学基金资助项目（C30000225）黄芪、丹参复方有效成分提高胎盘血供分子机理研究和国家中医药管理局项目（2000-J-T-17）子宫－胎盘－胎儿血供不足类疾病气虚血瘀证实质研究资助；湖南省教育厅青年项...
- 关键词：
- 关键词：胎盘黄芪丹参妊娠
- 正常妊娠与反复自然流产小鼠母胎界面SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA表达的差异被引量：5
- 2008年
- 目的:检测细胞因子信号抑制因子SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA在正常妊娠与反复自然流产小鼠模型的不同表达。方法:建立反复自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2及正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c,取孕14天的蜕膜和胎盘组织,提取RNA,应用RT-PCR方法检测SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA的表达。结果:SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA在反复自然流产小鼠模型及正常妊娠小鼠模型蜕膜和胎盘组织均有表达,但与正常妊娠组比较,SOCS1mRNA在反复自然流产组表达升高(P<0.05),而SOCS3mRNA表达降低(P<0.05),SOCS2mRNA表达无明显差异(P>0.05)。结论:SOCS1、SOCS3可能在妊娠的维持中发挥主要作用。
- 尤昭玲赖毛华何冬梅刘惠萍雷磊卢芳国尹胜马本玲
- 关键词：细胞因子信号转导抑制因子3
- 寿胎丸对反复自然流产小鼠SOCS1基因表达和妊娠结局的影响被引量：12
- 2008年
- 目的:探讨寿胎丸对反复自然流产小鼠母胎界面组织SOCS1mRNA表达和妊娠预后的影响。方法:采用CBA/J×BALB/c建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立反复自然流产模型,将反复自然流产模型随机分为4组,分别为模型组,寿胎丸低、中、高剂量组,灌胃给药14天后处死小鼠,计算胚胎吸收率,应用半定量RT-PCR法检测小鼠蜕膜与胎盘组织SOCS1mRNA的表达。结果:模型组和寿胎丸低剂量组的胚胎吸收率高于正常组(P<0.05),寿胎丸中、高剂量组胚胎吸收率低于模型组和寿胎丸低剂量组(P<0.05),与正常妊娠组没有明显差异(P>0.05)。SOCS1mRNA在各组均有表达,模型组SOCS1mRNA比正常妊娠组明显升高(P<0.05),寿胎丸各剂量组SOCS1mRNA表达明显低于模型组(P<0.05),与正常妊娠组无明显差异(P>0.05)。结论:寿胎丸可能通过提高反复自然流产小鼠SOCS1mRNA的表达水平,以调控Th向Th分化,改善妊娠预后。
- 尤昭玲赖毛华何冬梅刘惠萍雷磊卢芳国尹胜马本玲
- 关键词：基因表达
