目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。
目的克隆粉尘螨变应原Der f Mal f 6(简称Mal f 6)编码基因并构建其原核表达体系。方法提取粉尘螨总RNA,根据GenBank中的(AY283280.1)序列设计并合成引物,RT-PCR扩增Der f Mal f 6全长基因,克隆至pColdTF DNA载体,转化至E.coli JM109,取阳性克隆测序;将pCold TF-Mal f 6质粒转化至BL21,IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE验证表达产物,采用生物信息学软件预测Mal f 6的理化特性、结构和功能。结果 RT-PCR获得全长为495bp的Mal f 6基因。原核表达后经SDS-PAGE电泳显示其全细胞、上清及沉淀物均有蛋白表达,以上清表达量较高。生物信息学分析该蛋白由164个氨基酸组成,分子质量单位为17.7ku,二级结构由α螺旋(4.88%)、延伸主链(37.8%)和无规则卷曲(57.32%)组成,是亲水性细胞质蛋白,具有肽酰-脯氨酰反式异构酶活性。结论粉尘螨变应原Mal f 6原核表达获得成功,为该变应原的进一步研究及规模生产和应用奠定了基础。
目的探讨基于问题学习(problem based learning,PBL)教学模式在护理实用人体学实验教学中的效果。方法随机选择2011级的护理专业2个班级作为研究对象,其中,2011级护理8班作为实验组,采用PBL教学模式;2011级护理13班作为对照组,采用授课为基础学习(lecture-based learning,LBL)教学模式。比较实验组和对照组的实验报告评分、学期末实验考核评价、学生的问卷调查结果。结果实验组实验报告评分为"优"占38.89%,对照组为13.46%,两组实验报告评分差异有统计学意义(χ2=13.84,P<0.05);实验组期末实验考核评分高于对照组,并且差异有统计学意义(t=4.88,P<0.05);实验组在学习兴趣、文献查阅能力、分析问题解决问题能力、学习态度和独立思考能力5个方面均好于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论在护理实用人体学实验课程教学中引入PBL教学模式,能够有效地提高实验课程的教学质量,提高学生学习积极性。
