姚娟
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肾母细胞瘤过表达基因对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和迁移的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨肾母细胞瘤过表达(nephroblastoma overexpressed,NOV)基因对人骨肉瘤细胞143B增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制。方法:分别采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法筛选NOV低表达的骨肉瘤细胞株。将重组腺病毒Ad NOV和Ad GFP(空载体阴性对照组)分别感染骨肉瘤143B细胞,培养24 h后,在荧光显微镜下观察重组腺病毒Ad NOV和Ad GFP在143B细胞中的感染效率,并通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测NOV m RNA和蛋白在143B细胞中的表达情况。分别采用MTT法、FCM法和Transwell小室法检测NOV过表达对143B细胞增殖、凋亡及迁移的影响;半定量RT-PCR法及蛋白质印迹法检测NOV过表达的143B细胞中NOV、抗凋亡因子B细胞淋巴瘤基因-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)表达水平的变化以及磷酸化p38(phospho-p38,p-p38)、总p38、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)和总JNK表达水平的变化。结果:NOV在骨肉瘤细胞143B中的表达水平最低(P<0.05)。荧光显微镜下观察发现,重组腺病毒Ad NOV在143B细胞中的感染效率约为60%;NOV在143B细胞中成功过表达(P<0.05)。NOV过表达可抑制143B细胞的增殖(P<0.05),将细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),促进了143B细胞的凋亡(P<0.001);并可提高143B细胞的迁移能力(P<0.001)。NOV过表达后,143B细胞中促凋亡因子Bax表达上调(P<0.001),抑制凋亡因子Bcl-2表达下降(P<0.05);同时,p-p38与p-JNK表达水平均显著上调(P<0.001)。结论:腺病毒介导的NOV过表达抑制了骨肉瘤143B细胞的增殖,促进了其凋亡和迁移,其作用机制可能与p38/丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)和JNK/MAPK信号通路的激活有关。
- 姚娟翁亚光严树涓侯梦一施琼左国伟
- 关键词：骨肉瘤肾母细胞瘤细胞增殖细胞凋亡肿瘤转移
- SAHA与顺铂联合用药对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响被引量：3
- 2016年
- 该文研究了组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合顺铂(cisplatin,DDP)对骨肉瘤细胞的作用。骨肉瘤143B细胞分别经不同浓度的SAHA、DDP、SAHA+DDP作用48 h。利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;分别采用MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验、克隆形成实验检测SAHA、DDP及二者联用对143B细胞活力、细胞凋亡、细胞迁移和集落形成能力的影响。利用Western blot检测143B细胞中cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果显示,SAHA+DDP组143B细胞大量坏死,抑制细胞增殖的现象明显高于单药组;中低剂量SAHA与DDP联用表现为协同作用,而较高剂量的联用表现为单纯相加作用;SAHA+DDP组较单药组细胞早期凋亡率增加、迁移率明显降低,且SAHA+DDP组的细胞集落形成能力明显降低;SAHA+DDP组能够促进cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP的蛋白表达。以上结果表明,SAHA联合顺铂对骨肉瘤细胞143B细胞有协同增敏作用,能够明显抑制其增殖和迁移并促进其凋亡。
- 侯梦一姚娟王豪张章严树涓左国伟
- 关键词：SAHA顺铂骨肉瘤联合用药
- SAHA对骨肉瘤143B细胞的抑制作用及机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对骨肉瘤细胞143B增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:以2~32μmol/L的SAHA作用于体外培养的143B细胞,采用MTT法检测SAHA对细胞活力的影响;选用SAHA作用的最适浓度和时间点进行后续的研究,并以加入最大剂量为1 ml/L的DMSO处理组作为空白对照。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平变化;real-time PCR检测细胞周期和凋亡相关基因Cyclin D1、Bax、Bcl-2以及组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)的基因表达;化学比色法检测143B细胞中HDACs活性的变化;荧光素酶报告基因筛选SAHA处理后细胞内可能激活的信号通路;Western blot检测143B细胞中Cyclin D1、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP及AP1蛋白的表达水平。结果:SAHA在2~32μmol/L浓度范围内可以抑制143B细胞的增殖,并且呈时间和剂量依赖性,48 h引起143B细胞半数抑制的浓度约为8μmol/L。SAHA可将143B细胞周期阻滞在G0/G1期,并且可以引起细胞的早期凋亡及Cyclin D1、Bcl-2、HDAC1、HDAC3的m RNA表达量下调,Bax的m RNA表达量上调;SAHA处理143B细胞后可以降低细胞内HDACs的活性,促进细胞中转录因子AP1的表达,并且能够下调细胞中Cyclin D1、Bcl-2的蛋白表达,促进Bax、cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP及AP1的蛋白表达。结论:SAHA可以通过抑制HDACs的活性,激活AP1信号通路从而诱导143B细胞的凋亡及周期阻滞。
- 姚娟翁亚光严树涓侯梦一靳雅倩王豪左国伟
- 关键词：骨肉瘤细胞周期凋亡组蛋白去乙酰化酶
- 结缔组织生长因子对体外模拟微环境中人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 :采用体外共培养技术模拟骨肉瘤微环境,研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人骨肉瘤143B细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子作用机制。方法 :将重组腺病毒Ad CTGF导入骨肉瘤143B细胞,然后与骨髓基质细胞HS-5建立间接共培养体系。共培养3 d后,采用MTT法检测143B细胞的增殖能力变化,划痕愈合实验和Transwell小室法检测143B细胞的迁移能力变化,RT-PCR法及蛋白质印迹法检测CTGF和β-连环素(β-catenin)的表达水平变化,蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β)的表达水平变化。结果 :重组腺病毒Ad CTGF感染后,共培养体系中骨肉瘤143B细胞的CTGF过表达。在体外模拟的骨肉瘤微环境中,过表达CTGF能有效促进骨肉瘤143B细胞的增殖(P<0.01),且明显提高细胞划痕愈合率和穿膜细胞数(P<0.01)。过表达CTGF后,143B细胞中β-catenin、p-Akt和p-GSK3β表达水平均显著上调(P均<0.05)。结论 :在模拟骨肉瘤微环境中过表达CTGF可促进骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt和Wnt/β-catenin信号通路有关。
- 严树涓姚娟侯梦一翁亚光施琼左国伟
- 关键词：骨肉瘤糖原合成酶激酶3Β-连环素细胞增殖结缔组织生长因子
- 曲古抑菌素A(TSA)对骨肉瘤细胞株143B增殖和凋亡的作用及其机制被引量：1
- 2014年
- 观察曲古抑菌素A(TSA)对骨肉瘤细胞株143B增殖及凋亡的作用,并探讨其机制。TSA与p38抑制剂(SB203580,3μmol/L)及JNK抑制剂(SP600125,0.5μmol/L)单独或同时处理143B细胞,分别以MTT、台盼蓝染色、流式细胞术和JC-1(测定线粒体跨膜电位)法检测TSA对143B细胞的增殖、存活、周期以及凋亡的影响。应用RT-PCR、Western blot检测Bax、Bcl-2、p38/JNK表达。结果显示,TSA能够以时间和剂量依赖方式抑制143B细胞增殖,使细胞周期阻滞于G0/G1与G2/M期,并能诱导143B细胞凋亡,引起线粒体膜电位降低,促凋亡蛋白Bax表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调,同时使p38/JNK活化增加。p38/JNK抑制剂则能逆转TSA对Bax/Bcl-2的上调及抑制作用。研究结果揭示,TSA可以时间剂量依赖方式抑制143B细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机制可能与活化MAPK通路中p38和JNK的活性从而激发线粒体凋亡通路有关。
- 杨阳严树涓夏菁石庆强姚娟幸艺芳翁亚光左国伟
- 关键词：曲古抑菌素A骨肉瘤增殖凋亡
