张晓容
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 树突状表皮T淋巴细胞在小鼠皮肤移植免疫排斥反应中的作用及机制
- 2015年
- 目的探讨树突状表皮T淋巴细胞（DETC）在小鼠皮肤移植免疫排斥反应中的作用及其相天机制。方法（1）取1只野生型C57BL／6雄性小鼠背部全层皮肤，分离表皮细胞，流式细胞仪检测DETC表达情况及细胞表型。另取1只野生型C57BL／6雄性小鼠背部全层皮肤，分离表皮，免疫荧光技术观察DETC形态学特征。（2）分别取4只绿色荧光蛋白（GFP）标记C57BL／6雄性小鼠、7只野生型C57BL／6雌性小鼠（野生型组）以及7只γδ8T淋巴细胞6基因敲除C57BL／6雌性小鼠（基因敲除组）。剪去野生型组与基因敲除组小鼠背部1．4cm×1．4cm大小全层皮肤，移植GFP标记C57BL／6雄悱小鼠背部1．2cm×1．2cm大小全层皮肤，通过小动物活体成像仪及肉眼观察，判定并记录移植皮片存活时间。（3）取2只野生型C57BL／6雄性小鼠，分离表皮细胞，加入48孔板，按随机数字表法分为激活组和对照组，每组4孔。激活组加入2g／mL刀豆蛋白A10μL，对照组加入等量PBS，处理24h后用流式细胞仪枪测DETC表达γ干扰素情况。（4）取4只GFP标记C57BL／6雄性小鼠（供体）；取14只野生型C57BL／6雌性小鼠（受体），按随机数字表法分为γ干扰素中和组和对照组，每组7只。按（2）中方法构建皮肤移植模型，术前和术后72h，γ干扰素中和组小鼠腹腔注射1mg／mLγ干扰素中和抗体200μL，对照组注射等量生理盐水，同（2）中方法观察并记录移植皮片存活时间，并将γ干扰素中和组与（2）中基因敲除组移植皮片存活时间进行比较。对皮片生存曲线进行Log-rank（Mantel-Cox）检验。结果（1）小鼠皮肤表皮细胞内DETC阳性表达率为7．27％，且DETC均为CD3^＋表型细胞。DETC呈树突状散在分布于小鼠皮肤表皮中。（2）基因敲除组小鼠移植皮片存活时间为22～35d，较野生型组的12～16d明显延长（χ^2=14．10，P〈0．001），（3）激活组DE
- 黄华燕荣帅刘美希周俊峄谭江琳张晓容胡晓红黄勇贺伟峰吴军罗高兴
- 关键词：干扰素Γ移植免疫学
- Jurkat T细胞质膜蛋白组学研究初探被引量：1
- 2009年
- 目的:分析Jurkat T细胞质膜蛋白质组成,并对这些质膜蛋白的生理学过程和功能进行初步分析,为进一步研究Jurkat T细胞膜蛋白功能奠定基础。方法:首先采用差异密度梯度离心法提取Jurkat T细胞膜蛋白,然后将提取出的膜蛋白根据分子量大小通过SDS-PAGE进行初步分离,再进一步将分离出的蛋白条带切下进行胶内酶解,酶解后的肽段通过液相-芯片-离子阱质谱技术进行鉴定和生物信息学分析,建立Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,并进一步通过GO(Gene Ontology)对这些质膜蛋白进行功能分析。结果:成功提取了Jurkat T细胞的膜总蛋白,并建立了Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,共鉴定出618个质膜蛋白,经GO注释分析,其中与结合功能相关的质膜蛋白有493个,与信号转导活性相关的有186个,具有酶催化活性的有166个,具有转运活性的有137个,有些还具有酶调节活性、结构分子活性或者运动活性等,功能尚不清楚的有49个。结论:通过差异密度梯度离心,结合一维SDS-PAGE和HPLC-CHIP-MS/MS,成功建立了Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,并通过GO注释,初步分析了这些蛋白的功能和生理学过程,为进一步研究Jurkat T细胞质膜蛋白的功能奠定了基础。
- 甘成军谭江琳胡婕王晓娟张翠华张晓容罗高兴贺伟峰吴军
- 关键词：JURKATT细胞
- 重组AdPD-L1腺病毒的构建表达及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 构建程序性死亡配体 1(PD L1)重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法 酶切含有小鼠全长PD L1cDNA的pcDNA3 .1 PD L1质粒,亚克隆到穿梭质粒pAdtrack CMV上,在BJ5 183细胞内和AdEasy 1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染2 93细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测,氯化铯密度梯度离心纯化病毒。PCR、Westernblot鉴定AdPD L1感染2 93细胞后PD L1的表达,同时进行野生型腺病毒的检测和PD L1在混合淋巴细胞反应中的作用。结果 测序、酶切证实PD L1基因重组腺病毒载体构建成功。RT PCR、Westernblot检测AdPD L1感染的2 93细胞,均有PD L1的表达。无野生型腺病毒的产生,PD L1能显著抑制小鼠混合淋巴增殖反应。结论 成功构建了含小鼠PD L1基因的重组腺病毒载体,这种膜结合性的PD L1与其相应受体结合后,对T细胞可起到负性调控的作用,为下一步体内基因治疗实验奠定了基础。
- 丁涵露吴雄飞高闻达贺伟峰张晓容吴军
- 关键词：PD-L1腺病毒基因治疗
