徐翠香
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金广州市白云区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SA-hTNF-α双功能融合蛋白的制备及其功能研究
- 研究背景 恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一,目前对于恶性肿瘤的治疗多采用手术、放疗、化疗。这些治疗方法的共同缺陷是缺乏肿瘤特异性,对正常组织细胞损伤大,毒副作用大,不但治疗效果差,而且医疗费用昂贵。因此,寻找高效...
- 徐翠香
- 关键词：人肿瘤坏死因子Α链亲和素融合蛋白复性
- 文献传递
- GFP-SA融合蛋白的表达纯化及其锚定修饰肿瘤细胞的研究被引量：1
- 2008年
- GFP(绿色荧光蛋白)-SA(链亲和素)双功能融合蛋白的制备及其鉴定研究,以展示所建立的技术平台,即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞表面进行高效的锚定修饰。构建原核表达载体pET24d/GFP-SA转化大肠杆菌BL21(DE3)。用IPTG诱导重组蛋白的表达,用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化。用制备的GFP-SA双功能融合蛋白,对B16肿瘤细胞已生物素化的细胞表面进行修饰,经荧光显微镜和流式细胞仪进行修饰效率分析。此外,用MTT法检测细胞表面修饰对肿瘤细胞活力及其生长情况的影响。GFP-SA重组融合蛋白在大肠杆菌实现了高效表达(约占细菌总蛋白的20%),通过纯化和复性制备的GFP-SA双功能融合蛋白具有双重活性,即:链亲和素介导的、对生物素高效特异的结合活性,和GFP发射绿色荧光的活性,并能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞。此外,GFP-SA双功能融合蛋白的细胞表面修饰对细胞的活力及其生长无显著影响。GFP-SA融合蛋白能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞,可用作肿瘤疫苗研究的示踪蛋白及实验对照体系。
- 周明乾林来兴妹胡志明苏华徐翠香高基民
- 关键词：绿色荧光蛋白链亲和素融合蛋白肿瘤细胞
- SA/TNFα双功能融合蛋白的克隆、表达及活性研究
- 2010年
- 目的:制备链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白,并对其活性进行研究。方法:构建原核表达质粒pET24a-SA-TNFα和pET21a-TNFα-SA;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲合层析纯化后进行透析复性;流式细胞仪检测融合蛋白对生物素化MB49细胞的锚定活性,L929细胞杀伤实验检测融合蛋白的TNFα活性。结果:成功制备了两种链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白SA-TNFα和TNFα-SA;其表达量分别约占总蛋白的30%和23%,纯化效率均达90%以上;两种融合蛋白均能有效地锚定于生物素化的MB49细胞表面,其锚定效率分别为95%和92%;L929细胞杀伤实验显示SA-TNFα具备TNFα活性,但TNFα-SA不具备TNFα活性。结论:成功制备了具备双功能活性的链亲合素标记的TNFα融合蛋白,TNFα在该融合蛋白中的位置与其活性有重要的关系。
- 李金龙徐翠香胡志明高基民
- 关键词：人肿瘤坏死因子Α链亲和素融合蛋白
- SA-hTNF-α膜锚定修饰治疗表浅膀胱癌的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨一种新型蛋白质锚定技术与人肿瘤坏死因子α(hTNF-α)相结合在小鼠表浅膀胱癌治疗中的作用。方法将120只雌性C57BL/6j小鼠分为5组:正常未处理组(空白对照组)、PBS对照组、可溶hTNF-α治疗组、SA-GFP锚定组、SA-hTNF-α锚定治疗组,每组22只小鼠。建立小鼠正位表浅膀胱癌模型,24h后,将小鼠膀胱内膜生物素化,继而将hTNF-α融合蛋白灌注入小鼠膀胱中。每4d重复膀胱灌注锚定治疗1次,共6次。免疫组化检测SA-hTNF-α融合蛋白在生物素化的小鼠膀胱黏膜的存留时间及膀胱黏膜和肿瘤组织中CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞的分布,观察肿瘤生长情况及小鼠的生存期。检测肿瘤特异性淋巴细胞的杀伤活性。用MB49细胞再次攻击对SA-hTNF-α融合蛋白治疗有效的小鼠,观察肿瘤生长情况及小鼠的存活期。结果免疫组化显示:SA-hTNF-α融合蛋白可以在膀胱黏膜表面上稳定存留7d;MB49肿瘤细胞膀胱内种植后第60天,SA-hTNF-α锚定治疗组有18只小鼠存活(18/22),其中9只小鼠体外无触及肿瘤;PBS组全部死亡。对9只无瘤存活的小鼠再次用MB49细胞皮下攻击,60d后5只小鼠仍存活(5/9),与对照组有显著性差异(P<0.05)。膀胱癌病灶中CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞,SA-hTNF-α锚定治疗组较PBS对照组明显增多(P<0.05)。SA-hTNF-α锚定治疗组小鼠的杀伤效应明显强于正常组小鼠(P<0.05)。结论 SA-hTNF-α稳定的原位锚定于小鼠膀胱黏膜表面,可有效抑制小鼠表浅膀胱癌进展,显著延长荷瘤小鼠的生存时间,有效抵抗同源肿瘤细胞的再次攻击。
- 陈忠谭万龙黄鑫梁中锟徐翠香高基民
- 关键词：肿瘤坏死因子Α链亲和素生物免疫治疗膀胱癌
- SA-TNF-α融合蛋白高效表达、纯化及复性研究被引量：10
- 2009年
- 目的研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法,并研究其生物学功能。方法在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍体系中复性,Western blot对其进行鉴定。MTT法检测SA-TNF-α融合蛋白对L929细胞的杀伤活性,流式细胞仪分析SA-TNF-α融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰率。结果SA-TNF-α融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的目标蛋白占菌体蛋白30%以上,镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱纯化的SA-TNF-α融合蛋白纯度达到95.7%,经过两种体系复性形成的SA-TNF-α融合蛋白的二聚体和多聚体均具有双功能活性:既对L929细胞有杀伤活性又能锚定修饰生物素化的MB49细胞,锚定修饰率大于90%。结论初步建立了SA-TNF-α融合蛋白制备工艺,SA-TNF-α二聚体和多聚体均具有双功能活性,SA-TNF-α融合蛋白的研制有望为肿瘤的治疗提供新的治疗方法及新型药物。
- 徐翠香胡志明李金龙高基民
- 关键词：人肿瘤坏死因子Α链亲和素融合蛋白蛋白纯化蛋白复性
