慕国辉
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 1种高效纳米抗体生产方法的建立
- 2013年
- 为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
- 贺生芳付向晶刘阳坤慕国辉刘海金王兴龙杜恩岐杨增岐
- 关键词：融合标签表达纯化
- 规模化猪场仔猪猪瘟免疫主要相关因素的研究
- 猪瘟(Classicalswinefever,CSF)是危害我国养猪业的最主要传染病之一，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。目前对于猪瘟的防制，以疫苗免疫预防为主。规模化猪场中，由于猪瘟母源抗体及前期其它疫苗免疫的影响，...
- 慕国辉
- 关键词：猪瘟超前免疫母源抗体
- 文献传递
- 1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析被引量：6
- 2012年
- 为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。
- 付向晶王丹阳王兴龙张渭东宋祥军刘阳坤唐文雅慕国辉刘海金贺生芳杜恩岐杨增岐
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因
