朱俊华
- 作品数：5 被引量：88H指数：3
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草被引量：23
- 2005年
- RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。
- 白庆荣朱俊华刘晓玲朱常香宋云枝温孚江
- 关键词：马铃薯X病毒嵌合基因转基因烟草
- 正向和反向重复RNA介导的抗马铃薯Y病毒基因工程比较研究被引量：51
- 2004年
- RNA介导的病毒抗性与RNA沉默现象密切相关。反向重复cDNA序列(IR)的转录产物往往形成双链RNA结构,而双链RNA是诱发RNA沉默的有效因子。据此,本研究通过体外合成马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)5'端反向重复cDNA序列和正向重复cDNA序列(DR),分别构建植物表达载体pROK-IR和pROK-DR,利用农杆菌介导方法转化烟草NC89,比较这2种转基因烟草在RNA介导抗病性方面的差异。抗病性检测表明,转化IR和DR的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,但转化IR序列可大大提高抗病植株在转基因植株中的比例。分析结果表明所获得的抗病性为RNA介导的抗病性,是RNA沉默的结果。这一研究结果为利用IR策略进行抗病毒遗传育种提供了理论依据,并为讲一步开展RNA介导抗病性的机制研究奠宗了基础。
- 朱俊华朱常香温孚江宋云枝
- 关键词：RNA介导基因工程
- 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度和结构对RNA介导抗病性的影响
- 该研究是在已证明转化全长马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVY<'N>-CP)可获得高抗PVY的转基因植株、且证明这种抗性为RNA介导抗病性基础上,进一步研究转基因片段的长度和结构对RNA介导抗病性的影响.即转化马铃薯...
- 朱俊华
- 关键词：马铃薯Y病毒转基因烟草RNA沉默
- 文献传递
- 嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定蛋白酶的纯化及特性被引量：3
- 2002年
- 嗜热真菌Thermomyceslanuginosus在液体培养基中于 5 0℃振荡培养 1周后 ,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenythl-Sepharose疏水层析 ,得到了凝胶电泳均一的蛋白酶。用SDS -PAGE测定分子量为 5 5kD ,该酶的最适反应温度为 70℃ ,最适作用pH值为 6 .0。该酶具有很好的耐热性 ,在pH值 6 .0 5 0℃条件下酶是稳定的 ;6 0℃保温 1h ,仍保留 92 %的原酶活性 ;90℃时酶活半衰期为 6min。抑制剂试验证明 。
- 朱俊华李多川陈静
- 关键词：嗜热真菌THERMOMYCESLANUGINOSUS蛋白酶热稳定
- 马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片段长度对RNA介导抗病性的影响被引量：25
- 2004年
- 在已证明转化马铃薯Y病毒(PVY)全长衣壳蛋白基因可获得高度抗病的转基因烟草、且这种抗病性为RNA介导抗病性的基础上,克隆了马铃薯Y病毒坏死株系衣壳蛋白基因(PVYN-CP)3'端202(1/4 CP),417(1/2 CP)和603 bp(3/4 CP)的部分基因片段(CP202,CP417和CP603),并分别构建植物表达载体pROKⅡ-CP202,pROKⅡ-CP417和pROKⅡ-CP603.利用农杆菌介导方法转化烟草NC89.抗病性鉴定表明,转化1/2 CP和3/4 CP基因片段的转基因烟草均可获得抗病程度达到免疫的植株,而转化1/4CP的基因片段没有获得抗病植株.分子分析结果表明这种抗病性为RNA介导的抗病性,是转录后基因沉默的结果.研究表明,能够诱发RNA介导抗病性所需的PVY-CP基因的最短有效片段长度可能介于202和417 bp之间.这一研究结果对改进利用转录后基因沉默策略来防治植物病毒病害以及研究转录后基因沉默机制具有意义.
- 朱俊华竺晓平温孚江白庆荣朱常香宋云枝
- 关键词：马铃薯Y病毒转基因烟草基因沉默
