李君良
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 细粒棘球蚴重组HSP70蛋白免疫保护力研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨细粒棘球蚴重组HSP70蛋白(rEgHSP70)免疫小鼠对原头蚴攻击感染的保护性效果。方法选取雌性6周龄ICR小鼠随机分为两组:实验组和对照组(每组10只),实验组接种rEgHSP70 3次,每次间隔两周,对照组注射等量的PBS。两组小鼠在末次免疫后2周用1500只活细粒棘球蚴进行腹腔攻击感染,攻击感染30周后剖杀小鼠,无菌取脾组织,并记录每只小鼠腹腔内包囊数量和直径,评价免疫保护力。用流式细胞仪检测脾组织中CD4+T细胞和CD8+T细胞,计算两者比值。结果细粒棘球蚴重组HSP70蛋白接种对原头蚴攻击感染的免疫保护力为44.20%,rEgHSP70免疫组小鼠脾CD4+T亚群(0.52±0.082)高于对照组小鼠(0.44±0.07),P<0.05,rEgHSP70免疫组小鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+T亚群比值(3.35±0.02)高于对照组(2.00±0.77),P<0.05。结论细粒棘球蚴重组HSP70可诱导小鼠产生44.20%免疫保护力,具有一定的疫苗潜力。
- 巨艳马斯明朱明星王娅娜王娅娜李君良
- 关键词：细粒棘球蚴保护力
- 一种缺氧试验操作箱
- 本实用型设备属于实验操作箱技术领域，为一种缺氧试验操作箱，该仪器的主要构造为主操作仓一侧固定连接副操作仓，主操作仓与副操作仓中间活动连接有连接门，副操作仓顶端固定连接氮气进气口，氮气进气口上连接氮气瓶，氮气进气口上固定连...
- 牛楠赵巍李卉李君良杜先才王婵朱亚洲
- 文献传递
- 细粒棘球蚴原头节3种重组抗原的双向电泳定位分析被引量：1
- 2013年
- 目的利用已有的细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)原头节3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29获得特异性抗体,以识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点。方法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分离细粒棘球蚴原头节蛋白,预判断蛋白分布情况。应用双向电泳技术分离原头节蛋白,PDquest软件分析原头节的蛋白质数量、相对分子质量(Mr)和等电点(IP)。用原头节的3种重组蛋白rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29分别免疫新西兰家兔,制备血清,纯化抗体。蛋白质印迹(Western blotting)鉴定特异性抗体对原头节双向电泳图谱中相应蛋白的识别。结果SDS-PAGE结果显示,细粒棘球蚴原头节蛋白主要分布于Mr18 000～90 000区域。双向电泳分离出240个蛋白位点,为Mr15 790～117 050,IP为4.0～9.5,其中85.8%(206/240)蛋白等电点为5～9。Western blotting结果显示,rEg14-3-3特异性抗体可识别细粒棘球蚴原头节双向电泳图谱中约为Mr33 000、IP为4.86的14-3-3蛋白位点,rEgZW-5特异性抗体可识别约为Mr23 000、IP为4.98的ZW-5蛋白位点,rEgP-29特异性抗体可识别约为Mr29 000、IP为5.65的P-29蛋白位点。结论细粒棘球蚴原头节的3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29的抗体可识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点。
- 朱明星李君良巨艳高鹏赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴原头节重组抗原双向电泳
- 细粒棘球绦虫原头蚴蛋白质组学研究及生物信息学分析
- 目的：在前期研究的基础上,通过双向电泳条件的优化,对细粒棘球绦虫原头蚴进行蛋白质组学和生物信息学分析,进一步研究原头蚴蛋白质的基础构成和功能情况,寻找具有特异性的靶标蛋白,为包虫病的早期诊断、新药开发、疫苗筛选,提供理论...
- 李君良
- 关键词：细粒棘球绦虫原头蚴蛋白组学生物信息学双向电泳图谱
- 细粒棘球绦虫原头蚴mRNA测序及表达谱分析被引量：4
- 2015年
- 目的通过对细粒棘球绦虫原头蚴的mRNA的测序及表达谱分析,初步建立起细粒棘球绦虫原头蚴的表达谱数据库,了解细粒棘球绦虫原头蚴基因表达及蛋白构成情况,为全面了解细粒棘球绦虫原头蚴生物学特征及寄生虫与宿主之间的关系奠定基础并为新的诊断方法、筛选新的药物靶点和疫苗候选分子选择提供理论依据。方法用TRIZOL法提取人源细粒棘球绦虫原头蚴的总RNA,构建细粒棘球蚴的转录组测序文库,Illumina的solexa测序平台对RNA进行测序并进行生物信息学分析。结果测序结果去杂后得到2G数据,通过从头拼接我们得到18 569个contig,这些contig的总长度为71 329bp,contig平均长度为384bp,最小的contig长度为201bp,最大contig长度为4 618bp,N50(覆盖50%所有核苷酸的最大序列重叠群的长度)为384bp。预测得到unigene为9 029条,将这9 029条基因与NCBI的nr数据库做blast比对,最终有7 441条unigene具有同源比对信息。结论根据GO分析可以发现,共有10 550条unigene与数据库中的基因有较高同源性,且较多的unigene可以与多条基因相对应,一共建立了10 550条对应关系。通过与KEGG数据库进行比对分析,细粒棘球绦虫原头蚴的转录组中有4 731条unigene得到注释,这4 731个得到注释的基因位于241条代谢通路中,这些代谢通路分别与代谢过程,基因信息过程,环境相关过程,细胞过程及与人类疾病相关。
- 巨艳李子华王娅娜赵嘉庆朱明星李君良赵巍
- 关键词：原头蚴转录组学生物信息分析表达谱
- NRF-1基因真核慢病毒表达载体的构建及表达被引量：3
- 2014年
- 目的:构建核呼吸因子-1(NRF-1)基因慢病毒表达载体并包装成重组慢病毒颗粒,感染大鼠心肌细胞H9c2(2-1)后,筛选出稳定上调表达NRF-1的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)。方法:利用lipofectAMINE 2000试剂将pLenti6.3-NRF1-IRES2-EGFP质粒与两种包装质粒在293T细胞中包装成重组慢病毒,收集病毒并测定滴度。用重组慢病毒感染大鼠心肌细胞H9c2(2-1),然后用杀稻瘟素(blasticidin)筛选转染阳性细胞。用PCR法鉴定靶细胞基因组中NRF-1基因序列,用QPCR测定转染阳性靶细胞中NRF-1基因表达量。结果:收集的重组慢病毒滴度为5.5×107TU/ml。转染阳性靶细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光。PCR结果显示,慢病毒携带NRF-1基因序列已插入靶细胞基因组。QPCR结果显示,转染阳性靶细胞中NRF-1基因的表达量是对照组的2.25倍。结论:本研究成功地构建NRF-1基因重组慢病毒表达载体,并在大鼠心肌细胞H9c2(2-1)中表达,为进一步上调NRF-1基因表达后心肌细胞能量代谢的研究提供了实验支持,并为心力衰竭能量代谢的基因治疗奠定了基础。
- 宋熔王程铖王强王玉姣李君良赵巍
- 关键词：慢病毒表达载体心力衰竭
