李树香
- 作品数：21 被引量：28H指数：3
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 呼吸道合胞病毒培养及其病毒滴度检测方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的确定呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）培养条件,筛选病毒保护剂配方,并建立检测病毒滴度的微量细胞病变方法。方法分别将Hep2、Vero和293R细胞以0.01 MOI接种RSV,选择病毒培养细胞基质;将RSV分别以0.005和0.02 MOI接种Hep2细胞,在4～9 d收获病毒液,检测病毒滴度,确定最佳MOI及病毒收获时间;将6种配方病毒保护剂分别加至病毒液中,反复冻融7次,检测病毒滴度,筛选最佳配方;将病毒分别在33和37℃条件下滴定,第7、9天判定结果,确定微量细胞病变方法的培养温度和判定时间。结果确定病毒培养细胞基质为Hep2细胞,以0.02 MOI RSV接种后,37℃培养7～9 d收获病毒液;配方1（0.1%人血白蛋白）为最佳病毒保护剂配方;微量细胞病变法的实验条件为37℃滴定,7 d判定结果。结论建立了稳定可靠的呼吸道合胞病毒培养及病毒滴度检测方法。
- 王欣怡李树香刘敬崔文禹徐静
- 关键词：呼吸道合胞病毒病毒滴度
- 脑心肌炎病毒实验性疫苗免疫原性初步研究被引量：1
- 2013年
- 目的：制备脑心肌炎病毒（ EMCV）实验性疫苗并对其免疫原性进行初步研究。方法采用Vero细胞培养EMCV病毒，微量细胞病变法检测病毒滴度；经过浓缩、过滤、超速离心等方法初步纯化EMCV；摸索病毒灭活方法；确定病毒半数致死量（ LD50）；通过肌肉注射途径免疫小鼠，微量中和试验测定血清中和抗体效价；免疫后小鼠分别以100LD50、50LD50和25LD50进行腹腔攻毒试验。结果以1∶4000β-丙内酯4℃放置12 h作为病毒灭活条件，病毒半数致死量17 CCID50/ml；免疫小鼠能检测到中和抗体并对病毒攻击具有抵抗力。结论 EMCV实验性疫苗能诱导小鼠产生保护性抗体。
- 徐静李树香刘敬王欣怡岳野凌媛
- 关键词：脑心肌炎病毒免疫原性半数致死量
- 脊髓灰质炎灭活疫苗抗原含量检测方法的研究进展被引量：2
- 2010年
- 脊髓灰质炎灭活疫苗（inactived poliovirus vaccine, IPV）的问世使全球范围内消灭脊髓灰质炎成为可能，而且IPV在全球致力于消灭脊髓灰质炎中的作用日益增强。通过IPVD抗原检测可以检测IPV效力，因此IPVD抗原的快速定量检测成为亟待解决的关键问题。目前，最常用的体外检测法是ELISA法，然而，尚无国际公认的标准IPV效力检测法。此文就IPV抗原含量检测方法的研究进展加以综述。
- 李树香沈心亮石男
- 关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗酶联免疫吸附测定单克隆D抗原
- 脑心肌炎病毒鉴定方法的初步研究被引量：1
- 2013年
- 目的摸索建立脑心肌炎病毒（EMCV）鉴定方法。方法根据GenBank中EMCVVR．129B序列设计引物，提取病毒RNA，进行RT．PCR，琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。将DNA测序结果与GenBank中相同毒株EMCV序列进行比对。以RK细胞培养的全病毒作为免疫原制备抗血清，用于建立间接免疫荧光试验（IIFA）及中和试验方法，并验证方法精密性和特异性。制备抗GST—VPl和抗GST．VP2多克隆抗体，与EMCV浓缩液进行免疫印迹反应。结果获得的DNA片段与GenBank中上传的相同毒株EMCV序列进行比对，相似性为98％-100％。采用20100901批抗血清160倍稀释作为一抗，建立IIFA方法，特异性好。检测20100901批抗血清中和效价1：30211，建立的固定病毒．稀释血清中和试验方法特异性、精密性好。抗GST—VPl和GST—VP2抗体与EMCV浓缩液于相对分子质量为33x103左右分别出现清晰单一条带，与理论值相符。结论初步建立了用于EMCV毒株鉴定的RT-PCR、间接免疫荧光、中和试验及免疫印迹方法。
- 徐静李树香岳野王欣怡刘敬凌媛许丽锋
- 关键词：脑心肌炎病毒间接免疫荧光
- 肠道病毒71型抗原含量检测方法的建立及初步验证被引量：1
- 2009年
- 目的建立肠道病毒71型（EV71）抗原含量检测方法并进行初步验证，用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的检测。方法以抗EV71单克隆抗体为包被抗体，酶标抗EV71多克隆抗体为检测抗体，建立双抗体夹心ELISA方法，以本室自制EV71抗原参考品为定量标准，建立抗原标准曲线，确定定量限度及最佳定量范围，并对该方法的准确度、精密度和特异性进行初步验证。结果建立了双抗体夹心检测EV71抗原含量的ELISA方法，定量限度为0．23μg／ml，最佳定量范围为7．32～0．23μg／ml，相关系数为R^2=0．9976；准确性较好，回收率在90％～110％之间；精密性较好，变异系数小于10％；除与EV71样品有特异性反应外，与其他样品无交叉反应。结论建立了检测EV71抗原含量的双抗体夹心ELISA方法并进行了初步验证，为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了简便、快捷的检测手段。
- 徐静崔文禹李树香刘敬王欣怡陈蕾沈心亮
- 关键词：肠道病毒属酶联免疫吸附测定
- HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性被引量：3
- 2013年
- 目的 原核表达、纯化HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白,并分析其免疫原性。方法 生物信息学方法预测鼠血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的B细胞抗原表位,采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）法将VEGF抗原表位基因插入到HBcAg基因的免疫优势区内,合成HBcAg-VEGF基因序列,克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-HBcAg-VEGF,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经羟基磷灰石CHT层析、Sephacryl S-400HR凝胶过滤层析纯化后,与Al（OH）3佐剂混合,分别于第0、7、14、21天经肌肉免疫BALB/c小鼠1次,第28天采血,ELISA法检测血清中抗VEGF抗原表位抗体,VEGF受体结合抑制试验筛选具有良好免疫原性的VEGF优势抗原表位。对筛选出的优势抗原表位融合蛋白进行表达及纯化条件的优化。结果 生物信息学软件预测了6个VEGF的B细胞抗原表位;6个重组表达质粒经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白相对分子质量为14400～20100,纯度均在85%以上,除HBcAg-VEGF3以单体形式存在、不形成颗粒外,其他融合蛋白均能形成VLP;各组HBcAg-VEGF融合蛋白免疫小鼠后,均刺激机体产生了针对VEGF抗原表位肽的特异性抗体,其中HBcAg-VEGF1组抗体水平最高,且抑制VEGF与VEGFR结合的能力最强;采用优化的条件表达、纯化的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白纯度达95%以上。结论 筛选得到的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白显示出较好的免疫原性,为进一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础。
- 张占东徐静李计来李树香周亚王欣怡刘敬张云涛
- 关键词：乙型肝炎核心抗原抗原表位融合蛋白原核细胞免疫原性
- 抗肠道病毒71型单克隆抗体的研制及鉴定
- 目的：制备肠道病毒71型(EV71)单克隆抗体，并进行初步鉴定。
方法：将RD细胞和Vero细胞培养的EV71病毒原液通过氯化铯超速离心纯化，分别作为免疫抗原和检测抗原，进行单克隆抗体的研制。通过免疫印迹分析、...
- 李树香刘敬徐静崔文禹王欣怡赵玉秀陈蕾沈心亮
- 关键词：肠道病毒单克隆抗体抗原测定
- 文献传递
- 抗Ⅰ型脊髓灰质炎病毒单克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 目的制备抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体,为ELISA检测方法的建立奠定基础。方法将Ⅰ型脊髓灰质炎减毒疫苗原液和灭活疫苗原液经超滤、超离纯化,以纯化的减毒脊髓灰质炎病毒D抗原免疫BALB/c小鼠,得到的脾细胞与SP2/0-A14小鼠骨髓瘤细胞融合,以纯化的灭活脊髓灰质炎病毒D抗原建立间接ELISA法,筛选分泌特异性单抗的阳性细胞株,诱生小鼠腹水,通过正辛酸-硫酸铵法纯化抗体,并进行各项鉴定。结果获得两株稳定分泌抗脊髓灰质炎病毒单抗的细胞株7G5及5E4。纯化的7G5和5E4株单抗分别可与脊髓灰质炎病毒D抗原的VP2、VP3衣壳蛋白结合;在不同温度下放置均比较稳定;pH4不利于7G5株单抗的保存;5E4株单抗的相对亲和力大于7G5株;7G5株单抗的亚类为IgM,5E4株单抗的亚类为IgG2a;两株单抗可识别相似表位;7G5株和5E4株单抗的中和效价分别为1:64和1:128。结论已成功制备了两株分泌抗脊髓灰质炎病毒的单抗。
- 李树香沈心亮石男刘敬
- 关键词：脊髓灰质炎病毒抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 血管内皮生长因子定量检测试剂盒的研制
- 2011年
- 目的 研制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）检测试剂盒（酶标法）.方法 以一株特异性抗VEGF单克隆抗体作为捕获抗体,另一株单克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘滴定法确定两抗体的最佳浓度组合.制备冻干VEGF165参考品,并对样本稀释液、封闭液等实验条件进行优化.检测自制试剂盒的特异性并对其进行初步应用.结果 棋盘滴定法确定捕获抗体的质量浓度为10μg/ml,检测抗体的稀释倍数为1：20 000.冻干VEGF165的质量浓度为720～880 pg/ml,样本间变异系数〈10%.以5%牛血清白蛋白作为封闭液和样本稀释液最为合适.自制试剂盒与10种细胞因子均无交叉反应,具有较高的特异性和灵敏度.结论 成功研制出VEGF检测试剂盒.
- 李树香王欣怡刘敬周亚徐静邹检平
- 关键词：血管内皮生长因子类试剂盒
- 脑心肌炎病毒蚀斑纯化及滴度测定方法的建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)蚀斑纯化及滴度测定方法。方法将EMCV系列稀释后接种至单层Vero细胞,覆盖甲基纤维素,出斑后挑取蚀斑进行扩增,收获病毒液。选取5个EMCV原液样品感染Vero细胞进行蚀斑滴度测定,经结晶紫染色计数蚀斑,计算病毒滴度。重复测定5次,验证蚀斑法的精密性,并与微量细胞病变法进行比较。结果 EMCV感染Vero细胞后,约48 h出现边缘整齐直径为0.5～1.5 mm的蚀斑,经结晶紫染色后,可见清晰透明空斑,边缘清晰。5个EMCV原液样品经蚀斑法测得的病毒滴度在3.16×106～1×107PFU/ml之间,变异系数为0.88%～2.07%;经微量细胞病变法测得的病毒滴度均大于3.16×107PFU/ml,变异系数为1.63%～2.90%,表明蚀斑法精密性更好;两种方法经直线回归分析,具有线性相关性(r=0.810,P=0.097)。结论建立了简便直观的EMCV蚀斑纯化方法及精密性良好的蚀斑滴度测定方法,为EMCV的生物学特性及疫苗研究奠定了基础。
- 岳野李树香刘敬王欣怡徐静许丽锋
- 关键词：脑心肌炎病毒
