王丽颖
- 作品数：136 被引量：295H指数：8
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- Prohibitin 2调节肌细胞增强因子2转录因子活性的分子机制被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨Prohibitin 2(PHB2)抑制肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor,MEF2)转录因子活性的分子机制,为进一步研究PHB2在其他MEF2阳性表达细胞中的调控作用提供依据。方法:利用脂质体转染方法将表达PHB2和MEF2的真核表达载体与荧光素酶报告基因载体共转染入体外培养的Hela细胞中,转染36 h后,裂解细胞获取细胞裂解上清,Western blotting检测上清中重组蛋白的表达及利用发光检测仪检测上清中荧光素酶的生物发光活性。结果:转染PHB2细胞组与未转染PHB2细胞组中,MEF2调控的荧光素酶生物发光活性比分别为0.28±0.02和1.00±0.02,两组比较差异具有显著性(P<0.01),且降低程度与PHB2的表达量呈正比;在未转染PHB2细胞组,MEF2转录激活区调控的荧光素酶生物发光活性比为9.53±1.06,而在转染PHB2细胞组其为2.24±0.21,两组比较差异具有显著性(P<0.01);组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂TSA处理组与未处理组,共转染PHB2细胞中MEF2调控的荧光素酶生物发光活性比分别为0.98±0.12和0.38±0.04,两组比较差异具有显著性(P<0.01),提示TSA解除了PHB2对MEF2的抑制作用。结论:PHB2抑制MEF2转录活性的分子机制是通过作用于MEF2的转录激活区由HDAC介导完成的,该抑制作用非依赖于成肌调节因子MyoD,且与MEF2的DNA结合功能无关。
- 孙陆果马克威黄红兰卫红飞王丽颖
- 关键词：转录抑制组蛋白去乙酰化酶
- 用聚合酶链反应检测呼吸道感染的肠道病毒
- 1993年
- 本文用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测了儿童肺炎鼻咽分泌液和细胞培养液中的肠道病毒RNA。在30例鼻咽分泌物中有15例病毒分离阴性;15例分离出病毒,11例为肠道病毒,其中有5例为柯萨奇B组病毒。在用RT—PCR检测这30例鼻咽分泌物时,仅有4例阳性,且其病毒分离也阳性。提示:RT—PCR在检测鼻咽分泌物中肠道病毒RNA时敏感性较低,需在方法上进行改进,但本方法比较适用于鉴定细胞培养中的肠道病毒。
- 郑永晨王丽颖傅文永
- 关键词：聚合酶链反应肠道病毒呼吸道感染
- 抗BCG Hsp65单克隆抗体的鉴定及应用研究
- 2008年
- 目的:对制备的5株抗BCG Hsp65单克隆抗体(Hsp65 mAb)做进一步鉴定和应用。方法:采用ELISA方法对mAb的效价、亚类和结合抗原表位特性进行鉴定,应用mAb对Hsp65融合蛋白进行了Western blot和免疫荧光检测。结果:5株mAb的类型均为IgG,其中ⅠC1和ⅡC3株mAb为IgG1亚类,ⅠA5、ⅠC3和ⅠD6株mAb为IgG2a亚类。抗原表位竞争结合分析显示,在配对的不同亚类mAb中,存在着结合Hsp65表面不同抗原表位的mAb。通过Western blot检测证实,Hsp65 mAb对Hsp65-MUC1检测结果,与MUC1 mAb的一致。细胞免疫荧光检测显示,制备的mAb能够识别通过蛋白装载进入树突状细胞内的Hsp65-PSA。结论:获得的Hsp65 mAb可做为检测工具,用于研究BCG Hsp65及其融合蛋白的功能和表达。
- 尹晓光吴秀丽万敏张培因王艳媚王丽颖于永利
- 关键词：BCG热休克蛋白单克隆抗体
- 利用小鼠脾细胞上清抗病毒活性建立新型抑制性ODN的体外筛选方法
- 2009年
- 目的：通过检测小鼠脾细胞上清抗病毒活性,建立一种体外筛选小鼠敏感的新型抑制性寡聚脱氧核苷酸（ODN）的方法,为后续小鼠体内实验提供抑制性ODN的体外筛选方法。方法：将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组,收集不同浓度（0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00及32.00 mg.L-1）的CpG 2216刺激上清及CpG 2216作用小鼠脾细胞不同时间（3、6、12、24、48、72及96 h）的刺激上清,通过VSV病毒保护实验检测的A578评价各组上清的抗病毒活性,确定CpG 2216的最佳作用浓度、作用时间及刺激上清稀释度;再将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组、CpG 2216＋抑制性ODN（A151）组,同上确定A151的最佳作用浓度;将小鼠脾细胞分为对照组、CpG 2216刺激组、CpG 2216＋抑制性ODN（MAT0106）组,应用上述优化的实验条件如各ODN剂量、作用时间等处理细胞后,收集刺激上清,采用VSV病毒保护实验,观察各抑制性ODN的抑制作用,以初步判定此方法的可行性。结果：筛选方法确定为：浓度为5×10^6·mL^-1的小鼠脾细胞铺于96孔圆底细胞培养板,加入CpG 2216至终浓度2 mg·L^-1和/或抑制性ODN至终浓度16 mg·L^-1,孵箱中培养24 h后收集上清,1∶4稀释上清后加入已贴壁的L929细胞板内,共孵育18 h后弃上清,加入VSV病毒液继续培养48 h。弃净上清后结晶紫染色、脱色并检测A578。此种筛选方法可以区别本室自行设计的抑制性ODN之间的抑制活性。结论：成功建立了抑制性ODN抑制小鼠脾细胞抗病毒活性的筛选方法,抑制性ODN的小鼠体外筛选方法的建立,为后续抑制性ODN在小鼠体内的生物学活性观察提供了体外筛选平台。
- 杨光孙然孙陆果万敏王莉吴秀丽胡大利王丽颖于永利
- 关键词：CPGODN小鼠近交BALBC脾细胞抗病毒活性
- 乳鼠及人肺原代成纤维细胞的分离培养
- 2010年
- 目的建立体外原代培养乳鼠及人肺成纤维细胞的方法。方法采用非胰酶消化组织块法培养乳鼠及人肺成纤维细胞,细胞长出组织块后经形态学检测确定是否为成纤维细胞。结果乳鼠肺成纤维细胞需3～5d可增殖形成单层,并进行第1次传代;人肺成纤维细胞30～35d左右增殖形成单层,并进行第1次传代。结论非胰酶消化组织块法是一种可行的成纤维细胞培养方法。
- 李丽娜王华张永胜王丽颖于永利孙陆果
- 关键词：成纤维细胞原代培养
- 金属鳌合亲和层析填料的制备及其在重组六聚组氨酸融合蛋白中的应用被引量：3
- 2008年
- 目的:制备Ni2+螯合金属层析填料,分离HSP65-MUC1-histag基因工程蛋白质。方法:应用Sepharose4B作为载体,亚氨基二乙酸(IDA)为起始材料合成金属鳌合层析填料,同时应用5-Br-PADAP一阶导数光度法对Ni2+的吸收峰进行鉴定和定量。最后应用制备的Ni2+-Sepharose4B纯化HSP65-MUC1-histag。结果:Ni2+最佳吸收峰为574nm,凝胶中螯合的Ni2+为5.2mg.g-1,Ni2+-Sepharose4B金属螯合亲和层析纯化重组蛋白纯度≥98%,回收率≥90%。结论:制备了能应用于蛋白质亲和层析的高效金属鳌合层析填料。
- 张培因王燕媚卫红飞王爱丽于永利王丽颖
- 关键词：纯化
- 卡介苗HSP70的表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2009年
- 目的:在大肠杆菌中表达并纯化出具有良好生物学活性的卡介苗HSP70(BCG HSP70)蛋白。方法:利用PCR技术扩增出BCG HSP70的编码基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序分析。再将该目的基因亚克隆至pET28a表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后,用IPTG诱导表达。纯化表达产物,SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白,并通过脾增生实验检测其生物学活性。结果:扩增的BCG HSP70基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr)约70000处有表达条带。Western blot结果证实纯化产物在Mr约70000处可见特异性条带。蛋白纯度约96.5%。脾细胞增生试验显示,该蛋白能够明显刺激鼠脾细胞增殖。结论:成功表达并纯化了具有良好生物学活性的BCG HSP70,为进一步研究BCG HSP70及BCG的功能奠定了基础。
- 李贺曹昭张培因卫红飞王华孙陆果王丽颖于永利
- 关键词：卡介苗HSP70
- 口蹄疫病毒特异性抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2006年
- 以Chap10-VP1融合蛋白为包被抗原,建立了检测口蹄疫病毒特异性抗体的间接ELISA方法。抗原包被浓度为50μg/L时,血清最佳稀释度为1∶400,病毒与阳性血清的反应可被Chap10-VP1蛋白阻断,检测的灵敏度为1∶1600。
- 孙琳张培因庄乾宇李心宇王宏杨世杰于永力王丽颖
- 关键词：间接ELISA
- 利用CFSE标记检测CD8^+淋巴细胞增殖被引量：4
- 2004年
- [目的 ]介绍一种新的检测淋巴细胞增殖的方法。 [方法 ]用本室构建的重组蛋白疫苗hsp6 5-CAP3对C5 7小鼠进行 3次免疫后 ,分离小鼠的脾细胞 ,以照射灭活的CAP3转基因细胞为刺激细胞 ,在体外刺激淋巴细胞的增殖反应。淋巴细胞在与刺激细胞共培养之前用绿色荧光染料羧乙基锗倍半氧化物 (CFSE)进行标记。在共培养 72h后 ,用PE标记的抗鼠CD8分子的单抗标记淋巴细胞。收集细胞进行FACS检测 ,出现在二维点图左上象限的细胞代表CFSE含量减少的CD8+淋巴细胞 (CD8+CFSElow)即增殖的CD8+淋巴细胞 ,利用流式细胞仪记数左上象限CD8+CFSElow细胞的比例。 [结果 ]经体外刺激的脾淋巴细胞中 ,实验组CD8+CFSElow的平均百分比值为 (16 .4 7± 2 .10 ) % ,对照组CD8+CFSElow 的平均百分比值为 (7.6 9± 1.6 5 ) % (P <0 .0 5 )。 [结论 ]通过FACS结果判定CD8+淋巴细胞发生了特异性的增殖。CFSE标记是一种有效的检测淋巴细胞增殖的方法。
- 王玲王宏刘越坚吴泰华王丽颖于永利
- 关键词：CFSEFACS
- 重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选被引量：5
- 2013年
- 目的:通过重组小鼠干扰素β(IFN-β)原核表达载体的构建及对包涵体溶解条件的筛选,建立IFN-β原核表达模型,为筛选适合的包涵体溶解条件提供实验依据。方法:小鼠新鲜肝组织中提取DNA,传统方法构建小鼠IFN-β原核表达载体并命名为IFN-β′。SDS-PAGE检测以传统方法、pH环境、溶解液成分、干菌与溶解液比例、溶解温度和溶解时间的改变对包涵体溶解效果的影响。结果:IFN-β′成熟蛋白鉴定结果与预测结果吻合,诱导表达正常。改变pH值、在溶解液中加入DTT对包涵体溶解效果无影响,包涵体经洗涤液洗涤后亦不能被溶解液所溶解,温度对包涵体溶解几乎无影响,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加为1g菌∶20mL溶解液时能溶解部分IFN-β′蛋白包涵体。结论:成功构建重组小鼠IFN-β原核表达载体,其蛋白以包涵体形式存在,且不易被溶解,在筛选的包涵体溶解条件中仅溶解液比例为影响包涵体蛋白溶解条件。
- 苏雅拉图张永胜陈宇杰胡小平王丽颖万敏吴柒柱
- 关键词：干扰素Β原核表达包涵体
