王玉龙
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：福建医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：福建省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因修饰骨髓干细胞治疗下肢缺血的研究进展被引量：1
- 2009年
- 随着基因技术的发展，基因修饰干细胞用于下肢缺血疾病的治疗逐渐成为可能。基因修饰能使干细胞更好应用于下肢缺血的治疗。在细胞移植前，进行细胞基因修饰，提高了细胞的存活，尤其是干细胞，且可增强细胞治疗效果，但该治疗方法目前仅限于实验阶段。本文就基因修饰骨髓间充质干细胞目前在下肢缺血疾病治疗应用方面做一综述。
- 王玉龙张金池
- 关键词：基因治疗干细胞下肢缺血
- 慢病毒介导的人碱性纤维生长因子基因的构建及在鼠骨髓间充质干细胞中表达的实验研究
- 目的：探讨构建携带人碱性成纤维生长因子(bFGF)的重组慢病毒载体方法并观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞后bFGF目的基因的表达情况。
方法：采用RT-PCR扩增的方法获取人源性的bFGF与F...
- 王玉龙
- 关键词：下肢缺血干细胞移植细胞生长基因表达
- 文献传递
- 人碱性成纤维细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的研究被引量：6
- 2010年
- 目的 观察人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因体外转染对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）bFGF表达的影响.方法 密度梯度离心、贴壁法培养分离SD雄性大鼠MSCs,体外扩增,流式细胞仪检测MSCs表面抗原表达.利用慢病毒载体系统介导将具有人源性bFGF基因转染至第2代MSCs,在倒置荧光显微镜下观察转染后细胞形态和生长的变化,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法鉴定bFGF在MSCs中的表达.结果 密度梯度离心、贴壁法培养分离可获得MSCs,P3代大鼠细胞利用流式细胞仪检测CD11b/c阳性细胞表达率为（13.2±0.6）%,CD34阳性细胞表达率为（1.2±0.5）%,CD44阳性细胞表达率（97.8±0.9）%,CD90阳性细胞表达率（96.8±1.4）%.MSCs转染48 h后,绿色荧光蛋白的表达明显增强.RT-PCR证实转基因MSCs表达bFGF mRNA明显增强,Western blot检测证实转基因MSCs在49 KDr出现特异性条带,而空白和空载组的MSCs则未见阳性条带.结论 采用慢病毒介导的基因转染技术可以将bFGF基因转染至MSCs中,并有外源性bFGFmRNA和蛋白的有效表达,MSCs可作为bFGF基因治疗的载体.
- 张金池吴明祥王玉龙郭平凡刘学强
- 关键词：成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞转染
- 人碱性成纤维生长因子基因重组慢病毒载体的构建被引量：5
- 2010年
- 目的构建携带人碱性成纤维生长因子（bFGF）基因的重组慢病毒表达载体。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法钓取人源性的bFGF和FGF4两个目的基因片段，将该基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含绿色荧光蛋白（GFP）]中，得到pGCFU-FGF4-bFGF，通过PCR、酶切、测序和对比验证bFGF后，通过Lipofectamine2000的介导把pGCFU-FGF4-bFGF质粒和包装质粒pHelper1．0、pHelper2．0共转染至包装细胞293T，经同源重组产生重组慢病毒pGCFU-FGF4-bFGF，pGCFU-FGF4-bFGF在293T细胞内大量扩增，应用实时定量PCR法鉴定和测定滴度。结果克隆得到500bp目的bFGF全长基因，经过PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实，bFGF基因成功克隆到慢病毒载体中，可实现bFGF基因的表达，且病毒滴度为2．0×10^9TU／ml。结论成功构建表达人bFGF基因的慢病毒载体并能在293T细胞中扩增获得足够高的病毒滴度，可作为后续基因治疗研究工作的基因转染工具。
- 张金池王玉龙吴明祥郭平凡
- 关键词：碱性成纤维生长因子慢病毒载体基因转染
