王艺萌
- 作品数：6 被引量：14H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目黑龙江省科技攻关计划黑龙江省留学归国人员基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 内含肽介导的重组鹅IFN-α在大肠杆菌中的可溶性表达及其抗病毒活性鉴定
- 干扰素(Interferon,IFN)是由特定细胞产生的一类具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性的分泌型塘蛋白。是机体防御系统的重要组成部分。近年来,由于干扰素具有无药物残留,无毒副作用的特点,使其在防治畜...
- 王艺萌
- 关键词：内含肽大肠杆菌可溶性表达
- 重组鹅IFN-α蛋白在内含肽-冷激诱导表达系统中的表达被引量：2
- 2011年
- 为了在大肠杆菌系统中高效表达具有抗病毒活性的重组鹅IFN-α(GoIFN-α)蛋白,在GoIFN-α基因上游融合内含肽Ssp Dnabmini-intein(SDI)序列,然后克隆至pET-43.1a(+)载体中,再将获得的pET-43.1a(+)-SDI-GoIFN-α重组载体和pColdⅢ载体分别进行双酶切,构建内含肽-冷激表达载体pColdⅢ-Nu-sA-SDI-GoIFN-α,将重组载体转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞,IPTG低温诱导表达。结果表明,融合基因获得高效表达,表达的融合蛋白主要以可溶形式存在。表达产物经Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经CGBQ-GPMV系统检测,证实表达的融合蛋白具有生物学活性,为后续的纯化工作和研究具有天然活性的重组鹅IFN-α奠定了基础。
- 王艺萌崔子寅高明春马波王君伟
- 关键词：内含肽可溶性表达
- 黑龙江省部分地区鹅致病性大肠杆菌血清型鉴定及药敏试验被引量：3
- 2011年
- 收集来自黑龙江省部分地区的疑似鹅大肠杆菌致死鹅的肝脏、心脏、肺脏、肾脏等组织样本,用于进行大肠杆菌分离培养。经形态观察,生化试验,共鉴定出61株大肠杆菌。经血清型鉴定,表明O9、O18、O64、O93这4种血清型在黑龙江省内分布广泛,为优势血清型。药敏试验表明,分离菌株呈现出不同程度的耐药性,临床常用的庆大霉素、氨苄青霉素、氟哌酸抑菌作用很弱,而妥布霉素,四环素,阿米卡星类对分离菌株几乎无抑制作用。耐药率低于33%的仅有3种,分别是先锋噻肟,复达欣,菌必治,以上3种药物可以作为临床用药的候选药物。
- 赵阳王艺萌张文龙马波王君伟
- 关键词：禽致病性大肠杆菌血清型鉴定药敏试验
- 在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的可溶性犬α7干扰素被引量：5
- 2013年
- 为了在大肠杆菌表达系统中高效表达具有抗病毒活性的犬α干扰素(CaIFN-α),本研究从犬肝脏中PCR获得CaIFN-α第7亚型(CaIFN-α7)基因,通过重叠延伸PCR方法在CaIFN-α7的N端融合连接内含肽SspDnaB intein(SDI)基因,并将该融合基因连接至pMAL-c2X载体中,构建含有内含肽和麦芽糖结合蛋白基因的CaIFN-α重组质粒。重组质粒在大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导高效表达可溶性CaIFN-α蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析纯化后可以得到纯度较高的目的蛋白。重组蛋白经MDCK-CDV检测系统证明具有生物学活性,为该干扰素的大量生产及临床应用奠定了基础。
- 唐博崔子寅王艺萌魏双施高明春王君伟
- 关键词：内含肽麦芽糖结合蛋白可溶性表达抗病毒活性
- 内含肽和麦芽糖结合蛋白介导具有抗病毒活性牛α干扰素的表达被引量：1
- 2012年
- 为了在大肠杆菌表达系统中高效表达具有抗病毒活性的重组牛α干扰素(BoIFN-α)蛋白,在BoIFN-α基因的上游无缝连接内含肽Ssp DnaB intein(SDI)序列,然后克隆至pMAL-c2X载体中,构建含有内含肽和麦芽糖结合蛋白基因的表达载体pMAL-SDI-BoIFN-α,将重组载体转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达。结果表明,融合基因获得高效表达,且产物主要以可溶形式存在。经直链淀粉树脂纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经MDBK-BVDV(牛病毒性腹泻病毒)干扰素活性系统检测,证实干扰素融合蛋白具有抗病毒活性。
- 崔子寅王艺萌唐博孙旭燕高明春王君伟
- 关键词：内含肽麦芽糖结合蛋白可溶性表达抗病毒活性
- 重组鸡IFN-α的高效表达与一步复性和纯化被引量：3
- 2010年
- 通过在线网站以及生物学软件分析,将天然鸡IFN-α基因中的稀有密码子同义替换为大肠杆菌偏好的密码子。优化后的基因经人工合成后与温控型表达载体pWL连接并转入大肠杆菌中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达产物的分子质量约为19 ku,表达量占总蛋白的28.3%。表达产物主要以包涵体形式存在,用高浓度变性剂溶解后,采用Sephadex G50凝胶过滤一步复性并纯化重组鸡IFN-α,纯度可达98%以上。每1 L培养基可以得到47.1 mg的重组鸡IFN-α,产出率达34.14%。表达的重组鸡IFN-α在CEF/NDV检测系统上的比活性为1.12×108U/mg。
- 魏双施王艺萌王巍孙仰峰王君伟
- 关键词：Α-干扰素一步法
