缪竞成
- 作品数：8 被引量：30H指数：4
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 再生丝素膜对Ad-VEGF_(165)转基因成纤维细胞基因表达的影响(英文)被引量：5
- 2008年
- 背景:前期实验已证实再生丝素膜可促进pcDNA3.0-VEGF165转染的L929细胞表达血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)。目的:进一步观察再生丝素膜对经腺病毒介导的人VEGF(Ad-VEGF165)转基因成纤维细胞基因转录表达的影响。设计、时间及地点:对比观察细胞基因工程实验,于2007-11/2008-04在苏州大学细胞与分子生物实验室完成。材料:再生丝素膜由苏州大学材料工程学院李明忠教授提供。方法:将Ad-VEGF165腺病毒感染培养在再生丝素膜、聚氯乙烯膜及聚乙烯膜上的QBI-293A人胚肾和WI-38人胚肺成纤维细胞,以空载体Ad-GFP腺病毒和未接种病毒的PBS组为对照。主要观察指标:通过实时定量RT-PCR法检测不同材料对成纤维细胞VEGF mRNA转录的影响;ELISA法检测其对VEGF、血管生成素1、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子表达的影响。结果:再生丝素膜组成纤维细胞VEGF mRNA呈高水平表达,但聚氯乙烯膜组转录水平明显下降(P<0.05)。再生丝素膜组Ad-VEGF165转基因293A细胞及WI-38细胞不仅目的基因VEGF细胞因子的分泌呈高水平表达,并可促使血管生成素1基因表达水平明显提高(P<0.05),而且再生丝素膜还可使成纤维细胞自身分泌的碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子呈现正常表达水平。结论:再生丝素膜不仅利于VEGF目的基因在成纤维细胞中呈现高效表达,并促进血管生成素1基因的表达,而且能维持成纤维细胞自身分泌的与组织损伤修复相关基因碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子的正常表达。
- 刘铁连谢宇锋盛伟华缪竞成单云波胡志清井莹莹贾红亮杨吉成
- 关键词：血管内皮生长因子腺病毒转基因生物材料
- 抗人血管内皮生长因子发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察抗人血管内皮生长因子(VEGF)发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304生物学特性的影响。方法将抗人VEGF发夹状核酶(RZ)基因构建的pcDNA3.1+/RZ转染ECV304细胞,经G418筛选后,用RT-PCR法鉴定RZ基因在ECV304细胞中的转录,用MTT法和流式细胞仪检测转染前后ECV304细胞增殖活力和细胞周期,ELISA法检测细胞上清VEGF的表达水平。结果RZ基因在ECV304细胞中获得转录,它不改变细胞增殖活力和细胞周期,但能明显下调VEGF的表达。结论抗人VEGF发夹状核酶能够显著抑制ECV304细胞VEGF的表达,为进一步开展核酶的肿瘤基因治疗提供了实验依据。
- 刘春宇谢宇锋盛伟华缪竞成杨吉成
- 关键词：血管内皮生长因子核酶ECV304
- Ang-1和VEGF165腺病毒的载体构建及其表达
- 目的:构建人血管生成素-1(Ang-1)和人血管内皮生长因子VEGF165(VEGF165)的腺病毒载体,为下一步用Ang-1和VEGF165转基因细胞修饰丝素材料进行动物创伤恢复实验研究奠定基础。
方法:通过...
- 刘铁连谢宇锋盛伟华缪竞成单云波胡志清井莹莹杨吉成
- 关键词：血管生成素-1腺病毒载体RT-PCR法血管形成
- 文献传递
- 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞遗传特性的影响被引量：10
- 2005年
- 目的 :研究再生丝素膜 (WL组 ,HY组 ,SD组 )对大鼠鼠胚成纤维细胞的遗传物质的影响。方法 :采用浸提液法在体外培养鼠胚成纤维细胞 ,计算细胞的微核率 (MNF)和染色体畸变率 (CAF) ,用单细胞电泳法 (SCGEassay)检测基因组DNA的损伤程度。结果 :WL组、SD组再生丝素膜和空白对照组的细胞微核率 (MNF)和染色体畸变率(CAF)无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,无明显彗星现象 ;而HY组再生丝素膜与阴性对照比较有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :WL组和SD组再生丝素膜对种子细胞的遗传学特性无明显影响 ,优于HY组。
- 龚爱华李明忠盛伟华谢宇锋缪竞成姜海燕吴徽宇杨吉成
- 关键词：微核染色体畸变率彗星试验
- 再生丝素膜对转基因角膜上皮细胞表达细胞因子的影响
- 2009年
- 目的探讨再生丝素膜对转基因人角膜上皮细胞表达细胞因子的影响，以及转基因细胞修饰的再生丝索膜构建生物材料复合体的可能性。方法实验研究。兔角膜缘注射重组腺病毒载体血管内皮生长因子165（Ad-VEGF165）诱导新生血管，测量角膜新生血管生长面积，分析角膜组织血管内皮细胞生长因子免疫组织化学结果。用再生丝素膜培养角膜上皮细胞，观察细胞形态、生长曲线、Ad—VEGF165感染效率。收集再生丝素膜Ad—VEGF165转基因角膜上皮细胞培养上清，酶联免疫吸附试验法检测上清中血管内皮生长因子、血管生成素1、表皮生长因子、转化生长因子等细胞因子浓度。采用双因素方差分析基因感染和再生丝素膜材料两因素对HCECs细胞因子表达水平的比较。结果（1）角膜缘注射Ad-VEGF165后第1周、第1个月角膜新生血管面积分别为（7．60±1．12）mm^2、（12．28±2．54）mm^2，注射后第3天、第1周、第1个月角膜基质内可见血管内皮生长因子阳性表达。（2）再生丝素膜及无再生丝素膜两种培养条件，角膜上皮细胞细胞形态、生长曲线、Ad-VEGF165感染效率均无明显差异。（3）再生丝素膜培养Ad-VEGF165转基因角膜上皮细胞上清中各细胞因子浓度分别为血管内皮生长因子（721．67±66．97）ng／L、表皮生长因子（1042．67±315．81）ng／L、血管生成素1（2421．00±0．00）ng／L、转化生长因子（313．33±34．06）ng／L。无再生丝素膜Ad-VEGF165转基因角膜上皮细胞培养上清各细胞因子浓度分别为血管内皮生长因子（721．67±66．97）ng／L、表皮生长因子（860．33±315．81）ng／L、血管生成素1（1960．33±797．90）ng／L、转化生长因子（278．00±53．11）ng／L。Ad—VEGF165感染角膜上皮细胞培养上清中各细胞因子浓度均显著高于对照组，分别为血管内皮生长因子（F=168．16，P〈0．0001）、
- 张晓峰刘铁连盛伟华杨吉成缪竞成
- 关键词：丝素蛋白上皮角膜腺病毒科血管内皮生长因子A
- 几种丝素材料细胞毒性的实验研究被引量：20
- 2005年
- 目的:研究不同交联方式的再生丝素膜(WL组,SD组,HY组)的细胞毒性及其影响细胞增殖的因素。方法:采用浸提液法,体外培养鼠胚真皮层纤维细胞,用MTT法检测细胞增殖活力和计算相对增殖率。结果:WL组,SD组再生丝素膜细胞毒性小于1级,有较强的增殖活力;HY组再生丝素细胞毒性0～2级;而用高浓度环氧交联剂交联的再生丝素膜对细胞生长有一定抑制作用;且随着环氧交联剂浓度的增加,细胞毒性增大。结论:WL组和SD组再生丝素膜无细胞毒性,HY组再生丝素膜无明显的细胞毒性,高浓度环氧剂交联的再生丝素膜对细胞有一定的毒性,有待于进一步改性。
- 盛伟华龚爱华李明忠谢宇锋缪竞成杨吉成姜海燕卢神州
- 关键词：再生丝素丝素膜细胞毒性
- Ad-VEGF165转基因成纤维细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及其分子机制研究
- 2011年
- 目的研究经腺病毒介导的人血管内皮生长因子165(VEGF165)转基因细胞修饰的再生丝素膜(SF)诱导血管形成活性及其分子机制。方法将WI-38人胚肺成纤维细胞分别培养在有(SFC组)或无(PBS组)再生丝素膜的24孔培养板上,24h后用带绿色荧光蛋白(GFP)基因的空载体腺病毒Ad-GFP(Ad-GFP组/SFCG组)或含有VEGF165目的基因的重组腺病毒Ad-VEGF165(Ad-VEGF165组/SFCV组)感染培养细胞。通过形态学观察和ELISA法检测各组细胞培养上清液中VEGF165目的基因表达及其对细胞自分泌的血管生成素-1(Ang-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、血小板衍化生长因子(PDGF)表达的影响,并用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)和在兔眼角膜上进行新生血管诱导实验。结果形态学观察发现WI-38细胞在再生丝素膜上不仅贴壁生长良好,而且易被Ad-GFP、Ad-VEGF165腺病毒感染,呈现强荧光。再生丝素膜利于Ad-VEGF165组中VEGF165目的基因在细胞中的高表达(P<0.05),而且还可使细胞自分泌的Ang-1表达水平明显升高(P<0.05),同时可维持细胞自分泌的FGF2及PDGF稳定表达。Ad-VEGF165组(SFCV组)具有促进CAM上血管生长活性和诱导兔眼角膜组织新生血管生成作用。结论 Ad-VEGF165感染WI-38成纤维细胞所修饰的再生丝素膜,具有诱导血管新生的功能。
- 钱丽娟刘铁连张晓峰谢宇锋盛伟华缪竞成韩亚丽杨吉成
- 关键词：血管内皮生长因子腺病毒转基因
- 人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达被引量：6
- 2008年
- 目的:拟构建人血管生成素1和血管内皮生长因子165腺病毒载体,观察靶细胞转染后目的基因的表达水平。方法:通过RT-PCR方法克隆人Ang-1全长编码基因,PCR法以pcDNA3.0-VEGF165质粒为模板扩增VEGF165基因,分别将目的基因酶切连接到带有GFP标记的pTrack-CMV质粒上,构建重组质粒pTrack-CMV-Ang-1和pTrack-CMV-VEGF165,经PCR、酶切和测序鉴定后将其PmeI线性化与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdeasy-1-pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165,经PacI线性化后转染QBI-293A包装细胞,收获重组腺病毒Ad-Ang-1及Ad-VEGF165。结果:PCR﹑双酶切和测序鉴定结果证实成功构建pTrack-CMV-Ang-1/VEGF165重组转移质粒,PmeI线性化后重组腺病毒载体获得成功包装。脂质体转染QBI-293A细胞后光镜下可见由腺病毒引起的细胞圆缩、聚集呈菌落状的典型细胞病理性改变;荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,且荧光强度随培养时间延长而逐渐增强;经多轮感染、扩增后,病毒效价可达(2.0～5.0)×1010pfu/mL。转染48h后,293A细胞中的血管生成素1与血管内皮生长因子含量均明显提高(F=427.93,17.93,P<0.05)。结论:成功构建并获得了Ad-Ang-1及Ad-VEGF165重组腺病毒,血管生成素1与血管内皮生长因子165均能在靶细胞中有效表达。
- 刘铁连谢宇锋盛伟华缪竞成单云波胡志清井莹莹杨吉成
- 关键词：血管生成素1血管内皮生长因子腺病毒载体
