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SLE患者自身抗体单链噬菌体抗体库构建及抗体活性检测被引量：5: 1999年; 本文用ＳＬＥ病人外周血淋巴细胞抽提ＲＮＡ，采用ＲＴＰＣＲ反应以人的特异性ＨｕＶＨＢＡＣＫ、ＨｕＪＨＦＯＲ和ＨｕＶＬＢＡＣＫ、ＨｕＶＬＦＯＲ引物扩增人抗体的ＶＨ和ＶＬ基因片段，并将其与ｌｉｎｋｅｒ拼接成ＳｃＦｖ片段克隆于大肠杆菌，使其与噬菌体基因Ⅲ的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达，从而构建了ＳＬＥ病人的单链噬菌体抗体库，ＥＬＩＳＡ检测证明ＳｃＦｖ基因产物具有抗体活性。ＳＬＥ噬菌体抗体库的构建为ＳＬＥ发病机理、诊断和治疗研究打下了良好的基础。; 康向东陈顺乐鲍春德鲍春德沈南顾越英俞憧昭; 关键词：SCFV 系统性红斑狼疮

三色法流式细胞术检测胞内细胞因子的建立被引量：21: 1999年; 运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗及抗细胞因子单抗，结合固定、破膜处理技术，建立了三荧光染色法流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法，探讨了不同刺激剂及细胞培养时间的选择，并对５例正常人产生ＩＦＮγ、ＩＬ４的ＣＤ４及ＣＤ８细胞进行测定。结果表明：产生ＩＦＮγ的ＣＤ４及ＣＤ８细胞明显多于产生ＩＬ４的细胞，并且产生ＩＦＮγ的ＣＤ８细胞百分数比较ＣＤ４细胞相对增多；同时产生ＩＦＮγ／ＩＬ４的ＣＤ４、ＣＤ８细胞较少。此方法可从单个细胞水平直接用于Ｔ细胞亚群及其细胞因子的检测。; 胡大伟陈顺乐沈南薛峰裴军顾越英鲍春德石学耕史桂英; 关键词：流式细胞术细胞因子

Ro60/SSA基因转染HEp-2细胞作为间接免疫荧光检测底物及其应用被引量：1: 2006年; 本研究拟改造间接免疫荧光技术(IIF)抗核抗体(ANA)检测法的底物HEp-2细胞,建立抗60kDRo60/SSA抗体免疫荧光检测法。采用PCR扩增人源Ro60 cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-C1,并转染HEp-2细胞。通过荧光显微镜、免疫印迹法(IBT)及IIF鉴定转染细胞(HEp-Ro60)中Ro60-绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达和抗原性。分别以HEp-Ro60以及HEp-2为底物的IIF检测10份抗Ro/SSA对流免疫电泳(CIE)检测阳性、其他抗体阴性血清以及对照血清。获得的转染细胞传十几代后仍具有较强的Ro60-GFP表达,融合蛋白保持Ro60的抗原性。IIF检测中HEp-Ro60的滴度比HEp-2增加了6.7倍(P<0.01),而且2例HEp-2细胞上IIF检测为阴性的血清在HEp-Ro60上为阳性。10例阳性血清中有8例出现了特征性荧光模式。结论是HEp-Ro60可用于IIF检测抗Ro抗体,并增加了ANA检出的敏感性。; 吕良敬陈顺乐顾越英沈南鲍春德王元薛峰叶萍俞翀曌; 关键词：自身抗原基因转染 HEP-2细胞免疫荧光技术

自身核抗原U1SnRNP70kD多肽分子中U1RNA结合功能区的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1: 1995年; 本研究采用逆转录－ＰＣＲ技术克隆自身核抗原Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ多肽分子中Ｕ１ＲＮＡ结合功能区（Ｕ１ＲＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ，Ｕ１ＢＤ）的ｃＤＮＡ，经ＤＮＡ测序证实以后定向插入原核表达载体ＰＧＥＸ－２Ｔ，进而导入大肠杆菌中表达重组蛋白。免疫印迹法研究表明：９６％（４８／５０）的抗Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ抗体阳性血清能够识别该重组蛋白，证实Ｕ１ＢＤ重组蛋白具有Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ抗原性，而且Ｕ１ＢＤ是Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ多肽上主要抗原表位区域，能够被大多数抗Ｕ１ＳｎＲＮＰ７０ｋＤ抗体阳性血清识别。这为今后对Ｕ１ＢＤ抗原表位精确定位，分析特定抗原表位与疾病的相关性以及制备重组抗原用于临床检测等研究奠定基础。; 陆瑜沈南薛峰陈顺乐; 关键词：重组抗原

重组自身抗原U1RNP多肽的制备及在风湿病诊断中的意义被引量：2: 1997年; 制备重组核抗原Ｕ１ＲＮＰ多肽，为探讨自身免疫性疾病的机理及提高临床自身抗体检测敏感特异性奠定基础。方法对１２０例经对流免疫电泳证实的ＲＮＰ抗体阳性血清，以重组抗原为基质进行了印迹法测定。结果重组抗原具有分子量７００００多肽抗原性，１１５例抗ＲＮＰ７００００抗体阳性血清中有１１２例可识别重组抗原，分子量为７００００（ｒ７００００），阳性率为９７．４％，而５例ＲＮＰ阴性血清及５例正常人血清均不识别ｒ７００００。结论ｒ７００００具有良好的核抗原ＲＮＰ７００００多肽的特异性，可进一步作为抗原表位研究的手段。; 薛峰沈南陆瑜陈顺乐; 关键词：多肽风湿病

磷脂抗体阳性红斑狼疮患者周围血T细胞受体基因表达初探被引量：2: 1999年; 目的：初步探讨ＳＬＥ患者周围血Ｔ细胞受体Ｖβ基因是否存在偏移。方法：应用荧光ＰＣＲ定量方法对ＨＬＡＤＲＢ１＊０８０３／ＤＱＡ１＊０１０３的抗磷脂抗体阳性ＳＬＥ患者４例，病人对照干燥综合征（ＳＳ）１例，正常对照３例进行周围血ＴＣＲＶβ的分析。结果：健康者和病人对照的ＴＣＲ仅少数Ｖβ（＜５个Ｖβ基因）有轻微增高表达。１例非活动性ＳＬＥ患者与对照组相仿，但３例活动性ＳＬＥ的ＴＣＲＶβ基因谱呈多克隆激活，其中２例有１５～１７个Ｖβ基因呈中度以至高度表达，甚至Ｖβ／Ｃα高达１００５％（Ｖβ４／Ｃα）和２０８８％（Ｖβ２／Ｃα）。３例活动性ＳＬＥ的Ｖβ７、Ｖβ１２、Ｖβ２２都呈现异常增高表达，与正常对照有显著差异（Ｐ＜００５～００１）。结论：选择性的ＴＣＲＶβ基因的优势表达可能对ＳＬＥ的发病和活动起极大的作用。; 王元沈南薛峰裴军陈顺乐; 关键词：磷脂抗体 T细胞受体基因表达

人Fas全长cDNA的克隆和序列分析: 1999年; 目的克隆人Fas基因。方法采用RT-PCR技术从EB病毒转化的人B淋巴细胞株中扩增包含全长阅读框架的FascDNA，与pGEM-T质粒连接，经测序验证。结果RT-PCR扩增Fas的PCR产物经限制性内切酶后生成的片段符合预期大小。氨节育抗性的克隆经测序证实得到的正常人FSS与首次文献报道Fas基因有2个碱基的差异。结论本研究用RT-PCR方法克隆了正常人Fas全长cDNA，为进一步研究Fas的功能奠定了基础。; 裴军沈南薛峰薛峰王元; 关键词：FAS基因克隆

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薛峰