许剑锋
- 作品数：39 被引量：152H指数：8
- 供职机构：上海海洋大学食品学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金上海市委属高校高水平特色发展项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学农业科学更多>>
- 四种食源性致病弧菌多重实时荧光定量PCR快速检测体系的建立
- 2024年
- 【背景】弧菌在全球范围内严重威胁人类健康,副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、拟态弧菌(Vibrio mimicus)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)与食用生的或未煮熟的海鲜所引起的胃肠道感染和败血症有关,因而备受关注。【目的】建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌,以提高检测效率和准确性。【方法】基于副溶血性弧菌和拟态弧菌的toxR基因、霍乱弧菌的ompW基因、创伤弧菌的vvhA基因设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件建立四重实时荧光定量PCR体系。【结果】该实时荧光定量PCR方法检测限均为10 copies/µL,扩增效率均在100%左右;在特异性试验中,分别运用多重实时荧光定量PCR和常规PCR对目的菌基因组、非目的菌基因组和空白对照进行扩增,结果均只有目的弧菌扩增明显,表明本方法有良好的特异性;在抗干扰实验中,高浓度弧菌不干扰低浓度弧菌检测;每个浓度梯度进行3次重复实验,每组变异系数均小于1.5%,表明本方法重复性好。【结论】建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速、特异地实现对副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌的检测。
- 马梦洁曹钰佳刘平平许剑锋喻勇新马晨晨
- 关键词：副溶血性弧菌霍乱弧菌拟态弧菌创伤弧菌
- 东紫苏化学成分研究概述被引量：6
- 2016年
- 东紫苏具有食用和药用价值,全草中含芳香油、黄酮、三萜、酚类、β-胡萝卜素、维生素C及无机元素,具有明显的抑菌、抗氧化和降血脂等活性。目前对东紫苏有效成分提取及其活性研究很少,本文现对东紫苏的化学成分研究作一综述,以期为进一步研究和开发提供参考。
- 毛媛刘克武刘克海许剑锋吕慧
- 关键词：化学成分
- 3种植物挥发油抑制食源性细菌生长活性成分及机理被引量：17
- 2017年
- 采用无水乙醇浸法提取柠檬花、茶树叶、留兰香叶挥发油,用抑菌圈法及微量肉汤稀释法测定挥发油对大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonellas enteritidis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和李斯特菌(Listeria monocytogenes)的抑菌效果,并通过气相色谱-质谱联用分析其有效成分,抑菌机理通过实验菌菌液的电导率及扫描电子显微镜验证。结果表明:柠檬油、茶树油中有效抑菌成分分别为柠檬烯、1,8-桉叶素,其含量分别为65.50%、48.67%,留兰香油中有效抑菌成分为柠檬烯与左旋香芹酮,其含量分别为16.33%、35.67%。其中抑菌广谱性及抑菌效果最好的为留兰香油及其有效活性成分左旋香芹酮。实验中的有效活性物质可能是通过改变实验菌细胞膜的通透性,且可使细菌细胞发生皱缩破裂,以此起到抑菌及杀菌的作用。
- 潘旭迟许剑锋傅昱晟吕留庄于晓巍
- 关键词：金黄色葡萄球菌沙门氏菌扫描电子显微镜气相色谱-质谱
- 人源R-spondin 2蛋白的生物信息学分析、表达、纯化及活性检测
- 2024年
- 目的构建人源R-spondin 2(roof plate-specific spondin 2,RSPO2)的真核表达载体,表达、纯化融合蛋白RSPO2-Fu-Fc,用3C蛋白酶切除Fc结构域后,检测RSPO2-Fu的生物学活性。方法基于生物信息学方法分析人源RSPO2蛋白的理化性质和结构,筛选获得可在溶液中稳定存在的RSPO2截短蛋白RSPO2-Fu。将编码RSPO2-Fu蛋白的基因亚克隆至pCMV-Fc载体后,将质粒pCMV-RSPO2-Fu-Fc瞬时转染入HEK293F细胞中表达72 h,通过Protein A层析柱纯化融合蛋白RSPO2-Fu-Fc,用3C蛋白酶切去Fc结构域,分子筛进一步提纯获得RSPO2-Fu蛋白。最后,通过M50Super 8×TOPFlash检测RSPO2-Fu蛋白的生物学活性。结果生物信息学分析结果显示,RSPO2全长有243个氨基酸,相对分子质量为28300,等电点为9.42,为亲水性不稳定蛋白,RSPO2-Fu截短蛋白在溶液中的稳定性得到了极大提高;重组表达质粒pCMV-RSPO2-Fu-Fc经菌落PCR及测序证明构建正确;获得了纯度达95%的RSPO2-Fu蛋白;生物学活性检测结果显示,RSPO2-Fu的EC50值为1.5×10^(-12)mol/L。结论对RSPO2蛋白适当截短后,可获得稳定表达的RSPO2-Fu蛋白,其对Wnt信号通路有明显激活作用,为Wnt信号通路中RSPO2相关生物学研究提供了更好的参考。
- 耿腾洁许剑锋
- 关键词：荧光素酶报告基因WNT信号通路
- 人参果的活性成分研究进展
- 本文对人参果的营养成分、化学成分的提取分离以及抗炎、预防糖尿病、抗高血压的活性进行了综述，并对人参果的抗肿瘤活性机制进行了推测，为后续研究打下一定基础，未来的研究将主要集中在活性物质的进一步分离纯化，并对这些物质的抗肿瘤...
- 许倩倩岳恒许剑锋
- 关键词：人参果纯化抗炎抗肿瘤
- 实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测4种食源性致病弧菌
- 2024年
- 目的建立和优化4种食源性致病弧菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)快速检测方法。方法基于副溶血性弧菌的toxR基因(GenBank ID:MH047287.1)、霍乱弧菌的ompW基因(GenBank ID:MF100046.1)、拟态弧菌的toxR基因(GenBank ID:EF693743)和创伤弧菌的vvhA基因(GenBank ID:KC821520.1)设计常规PCR引物和qPCR特异性引物和探针。分别建立副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌4种食源性致病弧菌的单重qPCR检测体系,根据扩增曲线和Ct值对探针浓度进行优化,设置探针浓度梯度。结果4种弧菌的探针最适浓度均为0.1µmol/L。对设计的4种弧菌的引物分别进行常规PCR的扩增,其最低检出限均为1×10^(5) copies/µL,4种弧菌分别进行单重qPCR的最低检出限均为1×10^(1) copies/µL,扩增效率均接近100%。qPCR的灵敏度均高于常规PCR。特异性实验结果表明,4种目的弧菌DNA扩增出特异性曲线,其他的非目的基因未被扩增出扩增曲线。结论该方法准确度和灵敏度高,前处理简单快速,适用于4种食源性致病弧菌的荧光定量PCR快速检测。
- 马晨晨马晨晨宋昌彦彭国瑜刘平平李云峰许剑锋
- 关键词：副溶血性弧菌霍乱弧菌拟态弧菌创伤弧菌荧光定量聚合酶链式反应
- 17种植物挥发油对食源微生物抑菌活性研究被引量：11
- 2016年
- 采用抑菌圈实验研究17种天然源植物挥发油对大肠杆菌(E.coli),沙门氏菌(S.a.),金黄色葡萄球菌(S.aureus)和李斯特菌(Lis)的抑菌效果,通过Matlab的评价,筛选得到10种具有广谱抑菌性且抑菌效果较好的产品进行最小抑菌浓度(Minimum Iinhibitory Concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration,MBC)实验,并利用气相色谱-质谱法(Gas Chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析得到效果最好的留兰香油的有效活性成分。结果表明:留兰香油对4种实验细菌均有较强的抑制作用,其MIC均在6.25 mg·m L^(-1),MBC均在50 mg·m L^(-1),有效活性成分为柠檬烯(13.71%)和左旋香芹酮(71.34%),其中左旋香芹酮对E.coli和S.aureus具有更强的抑菌效果,MIC及MBC均在12.5μg·m L^(-1)。佐以扫描电镜实验,发现加入左旋香芹酮后培养的细菌会产生皱缩或破裂现象,说明左旋香芹酮可抑制实验细菌的生长繁殖,最终导致细菌死亡。初步表明在留兰香油中左旋香芹酮是主要抑菌成分。
- 潘旭迟傅昱晟许剑锋朱靖豪
- 关键词：金黄色葡萄球菌沙门氏菌扫描电镜气相色谱-质谱MATLAB软件
- 代谢型谷氨酸受体5的纯化及纳米抗体的筛选
- 2023年
- 文章首先采用细胞表达抑制状态的代谢型谷氨酸受体5(Metabotropic glutamate receptor 5,m GluR5)蛋白免疫野生双峰驼,构建纳米抗体文库,运用M13噬菌体展示技术,筛选出与m Glu R5具有特异性结合的纳米抗体;其次用细胞对m GluR5蛋白进行表达纯化,然后对野生单峰驼进行7次免疫,对抽取骆驼的外淋巴细胞总RNA进行提取,经过反转录的方式转为c DNA,将用巢式PCR对VHH片段进行扩增并与p MECS噬菌粒载体进行连接,并电转化至TG1大肠杆菌中构建纳米抗体噬菌体展示文库;其三通过M13噬菌体展示技术对文库进行淘选,淘选出多个互补决定区3序列不同的纳米抗体;最后纯化出纯度较高的m GluR5蛋白,构建出库容量为5.47×10^(8)CFU/mL的噬菌体文库菌,经过两轮液相淘选,获得了12个互补决定区3序列不同的纳米抗体。研究成功筛选出12个与m GluR5特异性结合较高的纳米抗体,为m Glu R5的靶向药物研发和G蛋白偶联受体的信号通路研究奠定了基础。
- 王辉马梦洁许剑锋
- 关键词：代谢型谷氨酸受体5
- 新型冠状病毒特异性纳米抗体的筛选和鉴定被引量：3
- 2022年
- 目的通过噬菌体展示技术,从骆驼外周血中筛选针对SARS-CoV-2 RBD结构域的特异性纳米抗体,并对纳米抗体的亲和力、结合表位和中和活性进行评估。方法利用重组RBD免疫骆驼,从骆驼外周血中分离淋巴细胞,提取RNA并逆转录为cDNA,接着通过巢式PCR扩增VHH基因,电转化至pMECS噬菌粒载体中,构建噬菌体展示抗体库并进行免疫淘选,鉴定可以与RBD特异性结合的纳米抗体。分别利用Octet Red96e和HPLC测定纳米抗体与重组RBD的亲和力和结合表位,通过SARS-CoV-2假病毒中和实验测定纳米抗体的中和活性。结果从外周血淋巴细胞中成功扩增出VHH基因,构建的噬菌体展示抗体库库容为1.33×10^(8) CFU/ml;经过2轮免疫淘选,鉴定出2株特异性纳米抗体——NB2D11和NB4E9,K_(D)值分别为2.21和0.31 nmol/L;NB2D11和NB4E9具有非竞争性的结合表位,中和SARS-CoV-2假病毒的IC_(50)值分别为340.7和35.5 nmol/L。结论筛选到的2株高亲和力特异性纳米抗体可以有效地地阻断SARS-CoV-2假病毒与ACE2的结合,为COVID-19的诊断和治疗奠定了基础。
- 史震中徐晓驰吴文惠许剑锋
- 关键词：RBD噬菌体展示技术
- 丁香精油对鲜切杭白菜保鲜效果的影响被引量：8
- 2020年
- 该文以新鲜杭白菜为试验材料,进行鲜切处理(7~8 cm小段),使用一次性透明塑料盒包装并以保鲜膜封口,模仿日常超市售卖状态放置在温度为4℃湿度为65%的条件下贮藏。通过测定感官品质、VC含量、叶绿素含量、可溶性固形物含量、微生物数量等理化指标,研究不同浓度丁香精油(0. 5、1、2 mL/L)处理的保鲜效果。结果表明,3组实验组均比对照组保鲜效果明显。0. 5 mL/L和2 mL/L处理的鲜切杭白菜,货架期延长了3 d。1 mL/L丁香精油处理效果最好,货架期延长了6 d,能最有效抑制微生物的滋生,菌落数增长最为缓慢,各营养成分损失最低,而且没有异味残留。
- 徐双双许剑锋
- 关键词：鲜切丁香精油保鲜
