闫明菲
- 作品数：12 被引量：29H指数：4
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金广州市科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。
- 黄震魏春娅闫明菲田悦茹张民泽谢杰雄孙龙张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR
- 化合物在CD163受体胞外区的蛋白表达和抗体制备中的作用
- 引言/目的猪繁殖与呼吸道综合征是影响世界养猪业的重要传染病之一。CD163受体是PRRSV侵入宿主细胞的一个重要的细胞受体。本研究以Marc-145细胞的CD163基因为研究对象,在CD163作用域的初步筛选的基础上,制...
- 闫明菲曹宗喜张超轶贺丹丹郭泗虎焦培荣张桂红
- 关键词：胞外区缓冲液抗体制备目的蛋白化合物
- 文献传递
- 2株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因序列分析被引量：4
- 2012年
- 利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株全基因组序列进行了遗传进化分析,结果显示PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株与美洲型参考株的核苷酸序列相似性分别为88.1%～97.8%和88.4%～98.0%;与欧洲型参考株(Lelystad)的核苷酸序列相似性分别为60.6%和60.4%,且在2株毒的Nsp2蛋白上有30个aa的缺失,表明PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株均为美洲型分离株的缺失变异株。
- 张民泽闫明菲谢杰雄黄震曹宗喜吴欣伟郭泗虎张桂红
- 关键词：PRRSV基因组
- 两株猪繁殖与呼吸征病毒的分离鉴定及遗传变异分析被引量：2
- 2012年
- 从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和分析,结果表明,PRRSV ZH-GD株和ZS-GD株的核苷酸序列与欧洲型代表株LV株间的相似性相对较远,与美洲株经典毒株VR-2332间的相似性分别为88.6%和88.1%,与中国经典美洲毒株CH-1a间的相似性分别为94.4%和93.0%。在Nsp2上有30个氨基酸的缺失,与JXA1、XH-GD等高致病性变异株的Nsp2缺失位置一致。分离的两株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。
- 张超轶吴欣伟闫明菲张亮权郭泗虎黄昌力黄震张民泽赵付荣张桂红
- 关键词：PRRSV
- 化合物在CD163受体胞外区的蛋白表达和抗体制备中的作用
- 猪繁殖与呼吸道综合征是影响世界养猪业的重要传染病之一。CD163受体是PRRSV侵入宿主细胞的一个重要的细胞受体。本研究以Marc-145细胞的CD163基因为研究对象，在CD163作用域的初步筛选的基础上，制备其多克隆...
- 闫明菲曹宗喜张超轶贺丹丹郭泗虎焦培荣张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸道综合征蛋白表达抗体制备
- 一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了对从湖南某发病猪场送检的血清中分离到的1株蓝耳病病毒进行鉴定,试验通过接种Marc-145细胞传代后产生明显而稳定的细胞病变,又经过RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)检测成功验证;通过对分离株的ORF5基因的测序结果表明,ORF5核苷酸序列与欧洲型代表株LV株及北美经典毒株VR-2332、国内经典美洲株CH-1a的相似性分别为64.5%、87.4%、93.0%,说明其属于美洲型;而将NSP2高变区的测序结果与JXA1等高致病性变异株的Nsp2比较后发现,都在同一位置不连续缺失30个氨基酸。说明成功分离到1株北美型变异株,最终将其命名为PRRSV CZ-HN株。
- 郭泗虎曹宗喜李海琴闫明菲张超轶张民泽赵付荣张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 反向遗传操作技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗研发中的应用
- 2011年
- 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病。该病自1987年首次发现以来，已遍及世界各个养猪国家，它所引发的母猪流产和仔猪的呼吸障碍给养猪业造成了灾难性的打击。特别是2006年以来，变异株PRRSV的出现则对我国养猪业的发展产生了巨大的影响。
- 郭泗虎曹宗喜李海琴闫明菲亓文宝焦培荣张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作技术病毒疫苗传染性疾病PRRSV
- H3亚型猪流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,与普通PCR进行比较。研究结果表明,标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,R2为0.994,CV在0.17%～1.41%之间,具有良好稳定性。除H3亚型SIV外,对H1、H4、H6、H9亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒和猪圆环病毒2型的检测均为阴性,与普通PCR相比更灵敏。该方法特异性好,准确率高,适于临床分离鉴别H3亚型SIV。
- 郭泗虎王文华张亮权齐海涛曹楠闫明菲黄昌力张超轶张桂红
- 关键词：猪流感H3亚型
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒XH株感染性克隆的构建被引量：4
- 2011年
- 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,本实验采用RT-PCR方法将PRRSV-XH株的基因组序列分为6个片段进行扩增,连接至低拷贝载体pOKQ中,获得全长cDNA克隆。将该克隆体外转录,经脂质体转染Marc-145细胞,观察细胞病变。经RT-PCR、间接免疫荧光和western blot等试验验证,表明构建了具有感染性的PRRSV-XH株全长cDNA克隆。本实验为在分子水平上研究PRRSV的复制、致病机理和基因产物的功能等方面提供技术支持,并为构建新型病毒载体和开发安全有效的活病毒疫苗奠定基础。
- 吴欣伟熊永忠秦宏阳曹宗喜于俊勇闫明菲郭泗虎张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全长CDNA
- 检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立被引量：4
- 2011年
- 根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结果表明,建立标准曲线的相关系数为0.998,斜率为-3.039,Ct值变异系数(CV)在0.17%～1.41%之间,有良好的稳定性。同时在检测猪群常见病中显示出很好的特异性,并且比RT-nPCR更灵敏,适合于swHEV的检测。
- 张亮权欧阳昀刘志刚曹宗喜闫明菲王文华郭泗虎张桂红
- 关键词：猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR
