顾长国
- 作品数：32 被引量：104H指数：6
- 供职机构：解放军第452医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划重庆市科委院士基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MD-2的B细胞抗原表位预测被引量：5
- 2006年
- 目的 利用生物信息学预测髓样分化蛋白-2（myeloid differentiation protein-2，MD-2）的B细胞抗原表位，为MD-2特异性抗体的制备提供实验基础。方法 采用多种生物软件和互联网服务器，以单参数（亲水性、抗原性、可及性及可塑性）预测为基础，二级结构预测初步筛选，抗原指数最终确定的方法预测MD-2的B细胞抗原表位。结果 96～110序列（RGSDDDYSFCRALK）的亲水性和抗原指数（AI=0．043）显著高于其他候选片断；65～76序列（YIPRRDLKQLYF）和107～117序列（ALKGETVNTTI）的A1分别为0．0063和0．0036。结论 96—110序列（RGSDDDYSFCRALK）是MD-2的B细胞优势抗原表位。
- 闫红徐发良顾长国胡承香葛衡江李磊
- 关键词：生物信息学MD-2抗原表位
- 脂多糖模式识别受体的研究进展被引量：2
- 2001年
- G- 细菌的脂多糖 (L PS)是重要的病原体相关模式分子。PAMPs均可被动物作为外来分子进行识别。L PS能激发机体细胞因子 IL- 1、TNF- α等活性分子的合成 ,对感染具有十分重要的作用。L PS是通过什么受体怎样将信号传入免疫细胞并启动免疫反应的 ,人们一直都不十分清楚。近年来 ,一种名为 Toll蛋白的发现 ,使人们对机体识别 L PS机制的认识向前跨进了一大步。
- 顾长国李磊
- 关键词：脂多糖模式识别受体TLRS
- 模拟MD2的抗菌抗炎拮抗多肽
- 本发明提供能模拟MD2与LPS结合的关键序列，可竞争性地拮抗LPS与MD2发生的特异性结合，从而达到减轻LPS对免疫炎症细胞过度活化，进而缓解由此而导致对机体过度的脓毒性损害的拮抗多肽。该拮抗多肽的氨基酸序列包括：序列1...
- 李磊闫红胡承香顾长国吴晓华
- 文献传递
- 手术创伤后Toll样受体4/髓样分化蛋白-2的表达被引量：9
- 2005年
- 目的研究手术创伤对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白2(MD2)表达的影响及其临床意义。方法设计自身配对实验,采集12例手术患者外周静脉血;用密度梯度离心法和黏附洗脱法分离单核细胞,用流式细胞仪检测单核细胞TLR4和MD2的表达;血浆脂多糖(LPS)、血浆TNFα和IL10,以及血浆TLR4和MD2含量分别用鲎试剂法、放免法和ELISA法检测。结果单核细胞TLR4和MD2在术后第1～3天显著上调表达(P<0.01),两者具有显著相关性;围手术期血浆LPS在正常范围波动(<50μg/L),血浆TNFα在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);血浆IL10于术后第3天显著升高(P<0.01);血浆MD2在术后第3～5天显著升高(P<0.01),而TLR4仅在第3天轻度升高(P>0.05)。结论手术创伤早期可导致TLR4/MD2上调表达,致机体敏感性增强;此后血浆抑制性介质IL10和MD2升高并产生免疫抑制效应。这种双向性变化可能是大手术后全身炎症反应综合征(SIRS)和脓毒症发生的分子机制之一。
- 徐发良李磊吕凤林顾长国徐祥胡承香尹华华
- 关键词：髓样分化蛋白-2TOLL样受体4血浆TNF-Α创伤后免疫抑制效应外周静脉血
- 人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达被引量：3
- 2003年
- 构建人髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 ( glutathione S transferase,GST)的融合蛋白(hMD 2 /GST)表达载体PGEX 4T 1/hMD 2 ,在大肠杆菌中融合表达hMD 2 /GST。以真核表达载体PEF BOS/hMD 2为模板 ,用PCR法在MD 2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子 ;将hMD 2编码序列克隆入原核表达载体PGEX 4T 1的相应酶切位点 ;用PCR和酶切筛选、鉴定重组质粒PGEX 4T 1/hMD 2 ,并对插入基因片断测序 ;重组质粒PGEX 4T 1/hMD 2转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导后用SDS PAGE分析表达产物。结果PCR、酶切鉴定和序列测定证实MD 2编码序列正向插入原核表达载体PGEX 4T 1的相应酶切位点 ,片断与PCR扩增产物大小相同、序列无误、阅读框架正确 ;SDS PAGE证实hMD 2 /GST在大肠杆菌中表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 0 %。说明成功构建了PGEX 4T 1/hMD 2载体 ,hMD 2 /GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达 ,为MD
- 徐发良顾长国胡承香李磊
- SELEX实验中两种富集方法的比较被引量：3
- 2003年
- 比较指数富集系统进化配体 (SELEX)实验中 ,液相筛选与固 液相筛选方法的差异对筛选富集库亲和力的影响。液相筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固 液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较 ,前一种方法更容易富集到与靶目标结合的目的序列。
- 胡承香邸雁飞朱旭东顾长国李磊吕凤林梁华平徐祥罗艳刘琛
- 模拟MD2的抗菌抗炎拮抗多肽
- 本发明提供能模拟MD2与LPS结合的关键序列，可竞争性地拮抗LPS与MD2发生的特异性结合，从而达到减轻LPS对免疫炎症细胞过度活化，进而缓解由此而导致对机体过度的脓毒性损害的拮抗多肽。该拮抗多肽的氨基酸序列包括：序列1...
- 李磊闫红胡承香顾长国吴晓华
- 文献传递
- 创伤患者外周血单核细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化被引量：13
- 2003年
- 目的 研究创伤患者外周血单核细胞内内毒素复合受体Toll样受体 4(TLR4) 髓样分化蛋白 - 2 (MD - 2 )mRNA的表达变化 ,观察其与临床预后的关系。 方法 35例创伤患者 [损伤严重度评分 (ISS)≥ 9分 ]与 14例正常对照 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法扩增TLR4、MD - 2 ,以 β肌动蛋白 (β -actin)的表达作为内参照 ,比较TLR4、MD - 2的表达水平 ;采用鲎试剂法测血浆脂多糖 (LPS)浓度 ;同时观察患者的预后情况。 结果 所观察的创伤患者中 ,血浆LPS浓度均发生不同程度的升高 ;TLR4、MD - 2基因的表达均降低 ,但预后良好的可在伤后第 5天恢复正常水平 ,预后差的在伤后第 5天的表达仍处于低水平。 结论 创伤可引起内毒素血症 ,创伤后人外周血单核细胞内TLR4、MD - 2mRNA的表达与患者的免疫机能、预后情况密切相关。
- 郑仲谨顾长国胡承香李磊
- 关键词：创伤内毒素血症TOLL样受体4髓样分化蛋白-2全身炎症反应综合征
- TLR4胞内区的同源模建被引量：1
- 2002年
- 目的 为进一步研究新发现的ＴＬＲ４蛋白在ＬＰＳ对机体细胞产生作用的机制，分析其Ｑ结构上的功能区域。方法 同源模建，通过计算机模拟从理论上对ＴＬＲ４胞内区的功能区域进行探讨。结果Ｐｒｏ７１２Ｈｉｓ突变体溶液可及表面的亲疏水性质有明显变化，且相应位置所带的电荷从中性变为正电荷。结论ＴＬＲ４胞内区在发生作用时，起主要作用的是疏水性作用，下一个接头蛋白ＭｙＤ８８与ＴＬＲ４胞内区相互作用的部位应当是一个有较强疏水作用的区域。这样当Ｐｒｏ７１２Ｈｉｓ突变体出现时，由于电荷的排斥，疏水作用无法达到点突变以前的强度，２个蛋白的结合不能得以实现，信号无法继续传递。从而出现对ＬＰＳ的耐受现象。
- 顾长国胡远东李松李磊
- 关键词：胞内区同源模建
- 外源性DNA电转化导入XL1-blue菌株条件的优化被引量：2
- 2009年
- 目的:优化外源性DNA导入XL1-blue菌株电转化条件,摸索构建噬菌体抗体库构建过程较优化的电转化条件。方法:培养XL1-blue菌株,在不同培养时间制作感受态细胞,应用不同电压分别作电转化,并对其转化效果进行鉴定,确定较好的培养时间和电压后,再确定较好的电击时间。结果:不同条件的电转化对于抗体库构建的影响有较大的差别。结论:感受态细胞数量在OD600nm0.5～0.8、电压为2.0kV、电击时间为3ms时,电转化能达到更好的效果。
- 顾长国贾淑芳刘琛李磊
- 关键词：电转化抗体库感受态细胞
