刘晓宁
- 作品数：11 被引量：41H指数：4
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- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 血清1和3型多杀性巴氏杆菌铁调控外膜蛋白共同抗原的初步分析被引量：15
- 2008年
- 用普通BHI和缺铁BHI培养基培养禽多杀性巴氏杆菌C48-19(血清1型)、P1059株(血清3型),提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳比较不同培养条件下两株细菌的外膜蛋白,发现缺铁培养时2株细菌均增加了87、81、79、64、60.5 ku铁调控外膜蛋白(IROMPs)。以C48-19株攻毒后耐过的鸡血清作为抗体进行免疫印迹,检测到其中的87、79和60.5 ku蛋白是2株细菌共同的、具有交叉免疫反应性的IROMPs,推测这3种蛋白可能是这2个菌株的共同抗原,并可能在C48-19感染的鸡体内特异表达;对鸡胚尿囊液中培养的C48-19株OMPs的SDS-PAGE电泳和免疫印迹试验,也观察到类似IROMPs的表达。这些IROMPs的发现为亚单位疫苗的研制提供了候选蛋白。
- 余旭平邬栋栋刘晓宁胡东建杜鑫陈玉银
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌SDS-PAGE
- 鸽圆环病毒浙江株全基因组的克隆及其外壳蛋白的原核表达
- 鸽圆环病毒（Pigeon Circovirus,PiCV）是近年来发现的圆环病毒科的一个新成员。与其他圆环病毒一样,鸽圆环病毒常潜伏感染,但往往侵染淋巴细胞等增殖速度快的细胞,引起免疫力下降,导致动物对多种条件性病原二次...
- 刘晓宁
- 关键词：全基因组序列原核表达
- 文献传递
- 反向疫苗学及其在动物医学中的应用被引量：2
- 2007年
- 邬栋栋刘晓宁余旭平
- 关键词：动物医学重组亚单位疫苗重组活载体疫苗基因缺失疫苗分子生物学DNA疫苗
- 鹅圆环病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法。确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05μg/mL,待检血清稀释度为1∶50,HRP-IgG稀释度为1∶2000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min。经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应;重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10%。应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0%～90.9%。本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段。
- 姜轲冉胡东健孙红霞于洪涛刘晓宁俞永裕余权法陈维虎余旭平
- 关键词：间接ELISA
- 鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达被引量：8
- 2008年
- 根据已发表的鹅圆环病毒GoCV-yk1株的序列,设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因(Cap),用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带。应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域,新设计一对引物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因,将截短Cap基因克隆入pET-28a进行融合表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,截短Cap蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为27.6ku,表达产物以包涵体形式存在,其表达量可以达菌体总蛋白的18.3%。截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础。
- 余旭平胡东建郑新添竺春刘晓宁于洪涛
- 关键词：圆环病毒核衣壳蛋白基因核定位信号原核表达
- 浙东白鹅H5亚型禽流感免疫方案初探
- 2010年
- 本试验设计两疫苗各5组单次免疫方案,测定相应的抗体消长规律。在单免试验基础上设计双次免疫试验,检测不同方案的抗体消长规律,建立合理、适用性强的免疫方案。试验结果显示,浙东白鹅禽流感H5亚型免疫较为可行的方法是:在禽流感威胁小的区域和季节采用3周单次免疫,每羽鹅颈部皮下注射0.5 mL;在禽流感威胁严重的区域和季节采用1周首免,每羽颈部皮下注射0.5 mL,3周加强免疫,每羽颈部皮下注射1.0 mL。
- 孙红霞王芳鲍明道董路林志华吕祖国李夫南蔡瑞峰刘晓宁谭双余旭平
- 关键词：浙东白鹅禽流感免疫
- 一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法
- 本发明公开了一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法，其采用原核表达的鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA检测的包被抗原，以HRP-羊抗鸡IgG酶标抗体作为二抗，进行鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法检测...
- 余旭平胡东建赵秀玲郭婧于洪涛刘晓宁孙红霞俞永裕陈维虎
- 文献传递
- 鸽圆环病毒浙江株△Cap基因的克隆与原核表达被引量：14
- 2007年
- 根据已发表的鸽圆环病毒(PiCV)序列,在V1ORF保守序列部位设计引物(目的片段长度为629bp),对浙江某鸽养殖场的病料进行PCR扩增检测,获得阳性样品;应用设计的删除核定位信号外壳蛋白基因(△Cap)的引物,扩增获得680bp的△Cap基因,克隆于pMD18-T载体,进行测序;将△Cap基因亚克隆到原核表达载体pET-28a进行融合表达,SDS-PAGE电泳检测发现,△Cap融合蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的22.1%。
- 余旭平刘晓宁郑新添邬栋栋刘江梅竺春
- 关键词：圆环病毒核定位信号
- 比较制度优势与中国出口奇迹
- 刘晓宁
- 一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法
- 本发明公开了一种采用间接ELISA方法检测鹅圆环病毒抗体的方法，其采用原核表达的鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA检测的包被抗原，以HRP-羊抗鸡IgG酶标抗体作为二抗，进行鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法检测...
- 余旭平胡东建赵秀玲郭婧于洪涛刘晓宁孙红霞俞永裕陈维虎
