刘爱平
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人MxA基因重组真核载体的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:应用真核载体PcDNA3.1构建含我国健康人目的基因MxA的重组真核载体PcDNA3.1-MxA。方法:在大肠杆菌JM109中扩增前期已构建的含有目的基因MxA的PAdtrack-MxA和真核载体PcDNA3.1,使用两者共同的限制性内切酶XbaⅠ、NotⅠ进行双酶切,并连接以构建重组真核载体PcDNA3.1-MxA,然后通过氨苄青霉素抗性筛选,双酶切及PCR鉴定,选取鉴定正确的克隆测序,并应用DNAssist 2.0软件对序列与前期获得的基因序列以及已知GenBank中MxA基因序列进行同源性分析。结果:经限制性内切酶、PCR鉴定重组真核载体PcDNA3.1-MxA构建成功。测序结果表明本实验所克隆片段长2012bp,包含人MxA基因序列,核苷酸序列分析表明与前期获得的目的基因序列完全相同,而与GenBank中人MxA基因序列同源性也达99.75%,仅有5个碱基不同,且所编码的氨基酸仅1个发生改变,此氨基酸位于MxA蛋白的非功能区。结论:重组真核载体PcDNA3.1-MxA构建成功,为下一步研究MxA抗乙型肝炎病毒作用奠定了基础。
- 黄琴赵瑞秋刘爱平许红梅
- 关键词：MXAPCDNA3.1
- 人抗黏液病毒A基因重组腺病毒体外抗乙型肝炎病毒的作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究人抗黏液病毒A(MxA)基因重组腺病毒AdMxA体外抗乙型病毒性肝炎病毒(HBV)的作用效果。方法:以1倍感染复数(MOI)(1倍MOI感染组)及5倍MOI(5倍MOI感染组)的重组腺病毒AdMxA分别转染HepG2.2.15细胞,以未感染HepG2.2.15细胞为对照(未感染组),利用RT-PCR检测3组HepG2.2.15细胞内MxAmRNA水平表达,并检测3组HepG2.2.15细胞内HBsAg及HBeAg滴度变化。结果:3组HepG2.2.15细胞内MxAmRNA水平比较差异有统计学意义(F=226.294,P<0.001),3组细胞内HBsAg、HBeAg水平比较差异有统计学意义(F值分别为94.519和44.065,P均<0.001),而1MOI及5MOI感染组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组腺病毒AdMxA感染HepG2.2.15后其MxAmRNA表达水平明显升高,并能显著抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制及表达,重组腺病毒AdMxA有望成为一种有效的基因治疗方法。
- 毛国强彭明利赵瑞秋黄琴刘爱平任红许红梅
- 关键词：重组腺病毒
- 人MxA基因重组真核载体抗乙型肝炎病毒作用的实验室研究被引量：1
- 2010年
- 目的:研究重组真核载体PcDNA3.1-MxA体外抗HBV的作用,为研究MxA基因(myxovirus-resistant A)治疗慢性HBV感染奠定基础。方法:将构建成功的重组真核载体PcDNA3.1-MxA转染入HepG2.2.15。将HepG2.2.15分为实验组(转染PcDNA3.1-MxA的HepG2.2.15)和对照组(转染PcDNA3.1的HepG2.2.15),应用RT-PCR方法检测两组HepG2.2.15内MxA mRNA(P<0.01),并应用ELISA法检测两组HepG2.2.15内HBsAg、HBeAg的水平。结果:RT-PCR扩增结果显示实验组的MxA mRNA水平均较对照组明显升高,实验组HBsAg、HBeAg水平明显低于对照组(均P<0.01)。结论:转染重组真核载体PcDNA3.1-Mx AHepG2.2.15内MxA蛋白明显抑制了HBV DNA的复制及表达,为进一步研究MxA蛋白体内抗病毒作用提供理论。
- 黄琴彭明利赵瑞秋刘爱平任红许红梅
- 关键词：HEPG2.2.15
- 超声微泡破碎技术促进人MxA基因在小鼠肝脏转染的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:观察静脉注射基因和微泡声学造影剂,同时经皮超声辐照肝脏的方式是否能增强外源MxA基因在小鼠肝脏中的定位表达,并探讨不同辐照参数对该基因表达的影响。方法:(1)不同转染方法对转染效率的影响:采用昆明小鼠24只,随机分为4组。分别为质粒转染组、微泡+质粒组、超声+质粒组和微泡+超声+质粒组。7d后分别取肝、心、脾、肾、肺和骨骼肌,采用间接免疫荧光法进行MxA蛋白的半定量检测。(2)不同辐照参数对基因表达的影响:采用昆明小鼠20只,随机分为4组。按转染不同超声辐照声强分为0.25W/cm2组、0.5W/cm2组、0.75W/cm2组和1.0W/cm2组。7d后分别取肝组织,采用间接免疫荧光法进行MxA蛋白的半定量检测。结果:(1)肝脏每高倍视野表达阳性细胞数在微泡+超声+质粒组最高,其次为超声+质粒组,再次为微泡+质粒组,表达最少的为质粒组;各组间两两比较,均有显著统计学差异(P<0.001);超声+微泡+质粒组中检测发现,脾组织偶有MxA表达阳性细胞,其余各组仅在肝组织存在MxA表达。(2)肝脏每高倍视野表达阳性细胞数0.5W/cm2组最高,其次为0.75W/cm2组,再次为1.0W/cm2组,0.25W/cm2组表达最少;各组间两两比较,均有显著统计学差异(P<0.001)。结论:超声微泡破碎技术能显著增强外源MxA基因在小鼠肝脏中的靶向性表达;超声辐照频率不变的条件下,在一定范围内增加声强,能促进外源MxA基因在小鼠肝脏表达;当声强为0.5W/cm2时,转染率最高;该技术生物安全性好,为肝脏疾病的基因治疗提供了一项高效、安全的转染技术。
- 刘爱平赵瑞秋蔡丽君周方冉海涛任红许红梅
- 关键词：微泡声学造影剂超声基因转染
