史婧
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- 重组蛇毒纤溶酶Fibrolase的复性被引量：7
- 2007年
- 将Fibrolase基因克隆入表达载体pET25b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%左右.比较了直接稀释法、流加稀释法和透析法的复性效率,同时研究了温度、pH值、初始蛋白浓度、复性液中盐酸胍浓度和氧化/还原环境等对复性的影响,得到了较为适宜的复性条件.结果表明,采用流加稀释复性,并在4℃,pH8.5,1.5mol/L盐酸胍,1mmo1/LGSSG,2mmo1/LGSH,初始蛋白浓度10mg/mL及稀释体积为50倍时,复性效率最高.重组Fibrolase蛋白在复性和纯化后的收率可达25%左右.
- 张守涛史婧郭蔼光
- 关键词：大肠杆菌复性
- 蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定被引量：1
- 2007年
- alfimeprase(ALF)是蛇毒纤溶酶fibrolase的N端突变体,有纤溶活性而无出血活性。通过双酶切从克隆载体上获取目的基因alf,将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA,经高效电转化、Zeocin筛选鉴定及培养条件pH、每天甲醇流加终浓度、菌体生长密度和甲醇诱导时间的优化,获得了重组ALF(rALF)高表达菌株pPICZαA-alf/GS115,且在优化条件下rALF的最高产量达425mg/L。通过His.bind柱纯化后,rALF纯度高达95%。SDS-PAGE和Western blot分析表明rALF的分子量约为24kDa,且能与一抗特异结合。纤维蛋白平板法纤溶活性鉴定结果说明rALF获得了高活性分泌表达,即确立了一种优化表达体系,为ALF的深入研究和工业化生产应用奠定了重要基础。
- 史婧张守涛齐亚飞郭蔼光
- 关键词：毕赤酵母
- 蛇毒纤溶酶ALF基因在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2006年
- 根据蛇毒纤溶酶(A lfim eprase,ALF)氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性,设计了14条单链DNA,采用重叠延伸PCR方法人工合成了ALF基因编码区。通过克隆使其分别连接在融合标签N usA,T h ioredox-in,Skp,H is T ag和信号肽pe lB的C端,构建成了多种ALF表达载体p43-A lf,p25-A lf,p32-A lf,p15-A lf和pSkp-A lf,转化大肠杆菌后进行了诱导表达,并对表达产物进行了SDD-PAGE分析。实验结果表明,合成的ALF基因长度为603 bp;构建的表达载体在大肠杆菌中均获得了很好的表达,其中pSkp-A lf表达量最高,目的蛋白含量高达菌体总蛋白的45%。
- 张守涛史婧李楠郭蔼光
- 关键词：蛇毒纤溶酶基因表达
- BLM解旋酶的酶学特性与DHBN结构研究
- 以大肠杆菌recQ基因命名的RecQ家族解旋酶是对基因组稳定性维持极为重要的分子马达蛋白，其功能几乎涉及到DNA复制、修复、重组、转录和端粒维持等代谢过程。在人类的五种RECQ解旋酶中，基因blm，wrn和recq4的突...
- 史婧
- 关键词：酶学特性
- 文献传递
- 蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
- 血栓性疾病是严重危害人类健康的疾病之一,而利用溶栓剂治疗血栓病的溶栓疗法被认为是最为有效的方法。据统计,全世界每年有血栓栓塞性病人约1700万,所需的溶栓剂的潜在市场约20亿美元。因此,寻找和研制新型、高效、安全的溶栓药...
- 史婧
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 文献传递
