孙苗苗
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：浙江大学化学工程与生物工程学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 用于拆分制备L-薄荷醇的脂肪酶基因克隆和表达
- 本文从实验室保藏的能有效拆分制备L-薄荷醇的菌株中克隆脂肪酶(Pseudomonas alcaligenes X1和Stenotrophomonas maltophilia X2),实现其在大肠杆菌中高效表达,并对表达产...
- 孙苗苗
- 关键词：脂肪酶基因文库L-薄荷醇同源分析
- 文献传递
- 产碱假单胞菌脂肪酶的克隆表达及酶学性质研究被引量：7
- 2012年
- 【目的】克隆产碱假单胞菌的脂肪酶基因,实现其在大肠杆菌中异源表达并进行酶学性质研究。【方法】通过基因文库构建和PCR,获得脂肪酶基因,并以pET30a(+)为表达载体、E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在大肠杆菌中进行异源表达,表达产物经HisTrapTM亲和层析柱纯化后进行酶学性质研究。【结果】从产碱假单胞菌中克隆得到一个脂肪酶基因,大小为1 575 bp(GenBank登录号为JN674069)。该酶分子量为55 kD,最适底物为p-NPO,最适反应温度和pH分别为35°C、pH 9.0。重组酶经1 mmol/L的Cu2+处理30 min可使酶活提高至156%。在最适反应条件下重组酶的比活力为275 U/mg,Km和Vmax分别为80μmol/L和290 mmol/(min.g protein)。【结论】产碱假单胞菌脂肪酶基因的克隆与表达不仅积累了脂肪酶基因的资源,并为其在手性拆分中的应用奠定基础。
- 孙苗苗陈辉吴坚平杨立荣
- 关键词：脂肪酶克隆
- 立体选择性脂肪酶的筛选及其在薄荷醇拆分中的应用
- 2013年
- 采用双平板透明圈方法,筛选得到1株能够选择性水解L-薄荷醇丙酸酯的微生物。通过16sDNA测序,鉴定为产碱假单胞菌Pseudomonas alcaligenes。该菌所产脂肪酶可水解4对薄荷醇丙酸酯,在35℃时绝对转化率达到50%时,表现出较高的对映体过量值(e.e.p>99%)与非对映体过量值(d.e.p>90%)。这一结果表明,产碱假单胞菌脂肪酶是具有工业应用前景的生物催化剂。
- 徐刚李牧孙苗苗吴坚平杨立荣
- 关键词：脂肪酶L-薄荷醇
