孙颖
- 作品数：24 被引量：41H指数：4
- 供职机构：天津医科大学代谢病医院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金天津市教委基金天津市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体的构建被引量：2
- 2007年
- 目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的人脂联素(Adiponectin)真核表达质粒。方法:用本实验室已构建好的人脂联素克隆载体pMD18-T/Adiponectin为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法克隆出Adiponectin目的片段,将该目的片段再连至真核表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO上,转化入TOP10感受态细胞中,通过筛选得到融合有绿色荧光蛋白的重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-Adiponectin。结果:PCR获得长度为736bp的目的片段,经pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO真核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入的目的片段与genebank检索的人脂联素cDNA序列(AccessionNM-004797)100%匹配。结论:绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体构建成功。
- 刘德敏杜春红孙颖张捷
- 关键词：脂类绿色荧光蛋白质类聚合酶链反应
- SUR1基因多态性与2型糖尿病的相关性研究
- 2005年
- 目的:探讨2型糖尿病(T2DM)与磺脲类药物受体1(SUR1)基因多态性的关系。方法:随机抽取正常人136例(正常组)及2型DM患者173例(T2DM组)外周血白细胞基因组DNA,PCR扩增SUR1基因31号外显子多态性位点的区域,用限制性酶切片段长度多态性分析其基因型,并用测序证实不同酶切图形基因型的准确性。结果:T2DM组和正常组SUR1基因31号外显子基因型及等位基因分布差别有统计学意义(P<0.05)。结论:SUR1基因可能是中国天津地区2型糖尿病发生的易感基因。
- 刘德敏孙颖靳立忠方显峰张捷
- 关键词：2型糖尿病基因序列
- 高HCY-糖尿病及其并发症新的危险因子动态代谢研究
- 刘德敏于德民范新萍孙颖方显锋张捷
- 本研究采用生物化学和分子生物学方法研究2型糖尿病HCY的代谢，深入探讨血浆tHcy对糖尿病及其并发症发生发展的意义。联合其他检验指标，全面分析了血浆tHcy及其代谢酶MTHFR677C→T、1298A→C突变对DM及其并...
- 关键词：
- 关键词：同型半胱氨酸2型糖尿病高效液相色谱法
- 同型半胱氨酸检测在糖尿病及其血管并发症中的应用研究
- 目的：许多研究显示高同型半胱氨酸血症(HHcy)是心血管疾病重要且独立的危险因子，而糖尿病患者的大、微血管并发症发生率极高，本研究旨在探讨Hcy及其相关基因与糖尿病及其并发症的发生是否相关。
方法：用rHPLC...
- 孙颖刘德敏范新萍
- 关键词：同型半胱氨酸亚甲基四氢叶酸还原酶糖尿病基因多态性血管并发症
- 文献传递
- 人脂联素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的:克隆人脂联素(adiponectin)基因,并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出adiponectin蛋白进行鉴定。方法:从人皮下脂肪组织提取总RNA,确认其正确性后经RT-PCR扩增得到全长cDNA片段,此片段经纯化回收后克隆至pMD18-T载体,经行DNA序列分析,进一步克隆构建到表达载体至pET-DEST42中,用IPTG在大肠杆菌中诱导表达。结果:含重组adiponectin质粒的大肠杆菌经0.4mmol/L的IPTG诱导6h后有高表达。结论:adiponectin基因的克隆构建和在大肠杆菌中的表达获得成功。
- 刘德敏杨莉丽孙颖张捷
- 关键词：胞间信号肽类和蛋白质类基因表达大肠杆菌
- 人脂联素原核表达载体PQE30/ADPN的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:构建人脂联素重组表达载体PQE30/ADPN,并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白,对表达产物进行鉴定。方法:将构建好的人脂联素克隆载体PUC57/ADPN与原核表达载体PQE30通过双酶切方法位点特异地连接在一起,再转化入大肠杆菌JM109感受态细胞中。通过筛选得到含有人脂联素基因的重组载体PQE30/ADPN,并用IPTG在大肠杆菌M15中诱导表达。结果:PCR获得长度为753bp目的片段,经PQE30原核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入的目的片段与GenBank检索的人脂联素cDNA序列(Accession NM-004797)100%匹配;含重组Adiponectin质粒的大肠杆菌经0.4mmol/L的IPTG诱导6h后有表达。结论:应用并成功构建了人脂联素原核表达载体PQE30/ADPN,且在大肠杆菌中获得有效表达。
- 史晓文刘德敏孙颖张捷
- 关键词：胞间信号肽类和蛋白质类基因表达大肠杆菌脂联素
- 氯化锂对大鼠肝细胞葡萄糖6磷酸酶基因表达的影响被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨利用糖原合成酶激酶3的抑制剂氯化锂对葡萄糖6磷酸酶基因表达的影响。方法:将原代培养的大鼠肝细胞在葡萄糖和不同浓度氯化锂的培养液中培养4h后提取RNA,以半定量RT-PCR方法检测细胞葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)和6磷酸葡萄糖转运亚基(G6PT)的mRNA水平。结果:氯化锂(10mM、20mM)与高糖培养液联合培养肝细胞4h后,肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶的催化亚基和转运亚基的mRNA的丰度均下降(P<0.05)。结论:锂盐可能能够有效的抑制葡萄糖-6-磷酸酶的表达起到胰岛素增敏的作用。对葡萄糖-6-磷酸酶进行干预能够有效的改善糖尿患者的高血糖状态。
- 刘德敏方显峰孙颖张捷
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸酶氯化锂基因表达原代肝细胞
- 同型半胱氨酸检测在糖尿病及血管并发症中的应用研究
- 目的:许多研究显示高同型半胱氨酸血症（HHcy）是心血管疾病重要且独立的危险因子,而糖尿病患者的大、微血管并发症发生率极高,本研究旨在探讨Hcy及其相关基因与糖尿病及其并发症的发生是否相关。方法:用rHPLC测定血浆tH...
- 孙颖
- 文献传递
- 人脂联素基因的克隆、表达及体外活性检测
- 目的利用Gateway表达系统快速构建脂联素原核表达载体,表达和纯化脂联素蛋白。利用一种高效的复性剂NDSB201使纯化的蛋白恢复其最大活性,了解脂联素的结构及作用机制。方法人脂肪组织总 RNA提取及脂联素基因的克隆:构...
- 刘德敏杨莉丽赵慧茹孙颖
- 文献传递
- 大鼠肝细胞的原代培养及鉴定被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨大鼠肝细胞原代培养的方法及细胞的鉴定。方法:采用胶原酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养,并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果:培养的肝细胞产量高、活力好,用相差显微镜对不同生长时期的肝细胞进行观察证实了细胞贴壁后变平变薄,双核细胞和多核细胞呈岛状连接的形态学特性,采用抗大鼠细胞角蛋白(ck18)的特异抗体进行免疫组化细胞爬片鉴定,经SP染色DAB显色后,阳性着色部位在胞浆呈棕黄色颗粒,阴性对照未见着色。结论:成功地体外培养了大鼠肝细胞并对其进行了鉴定,为进一步的实验研究奠定了基础。
- 刘德敏赵慧茹杨莉丽孙颖
- 关键词：肝细胞细胞培养技术免疫组织化学
