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果蝇晚三龄幼虫脑神经元的快速分离与鉴定被引量：4: 2006年; 目的探索果蝇晚三龄幼虫脑神经元急性分离的新方法,并对分离制备的脑细胞进行形态学观察和电生理学记录。方法解剖果蝇晚三龄幼虫脑组织,用胶原酶化学消化并辅以机械微振荡法分离制备单个细胞,用果蝇细胞培养液适当孵育。在倒置相差显微镜下对其进行形态学观察和分类,结合全细胞膜片钳技术对其电生理学特征进行初步研究。结果成功制备出三类大小和形态各异、活性较好的果蝇脑神经元,未见神经胶质细胞;以三型细胞为电生理学研究对象,记录到五种类型的全细胞外向钾电流。结论新建立的果蝇晚三龄幼虫脑细胞急性分离方法简便易行,稳定可靠。; 刘洋廖大清罗南富张贞雄刘进; 关键词：果蝇脑神经元急性分离膜片钳

乳大鼠心室肌培养细胞代替急性酶分离细胞用于起搏电流电生理研究的可行性探索: 2007年; 目的探讨体外培养细胞代替急性酶分离细胞用于心室肌电生理研究的可行性。方法采用膜片钳全细胞记录技术,对比分析心室肌细胞培养的不同时间与急性酶分离的心室肌细胞起搏电流间的电生理学差异。结果短期的培养就会使细胞膜电容下降,各期培养细胞的膜电容小于急性酶分离细胞的膜电容〔(56±7)pF,P<0.05〕。4d后膜电容随着培养时间的延长有逐渐增大的趋势,但各期之间的膜电容差异无统计学意义(P>0.05)。各个培养时间段细胞的反转电位、电流密度、活化阈值、半最大激活膜电压(V0.5)等主要电生理指标之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论至少短期培养的乳大鼠心室肌细胞的起搏电流与急性酶分离细胞的起搏电流的主要电生理指标之间无明显差异,可以代替急性分离细胞应用于起搏电流的电生理研究。; 贾卫国邓珏林廖大清李妙龄曾晓荣黄德嘉; 关键词：哇巴因起搏电流心室肌细胞

毛细玻璃管法测定草履虫氯胺酮半数麻醉有效浓度被引量：1: 2008年; 目的:建立测定草履虫静脉麻醉药半数麻醉有效浓度(ED50)的方法。方法:139只运动状态良好的草履虫纳入本研究。以加药后4min内虫体出现沿自身长轴的高速自转运动,维持时间长于1min且在毛细玻璃管长轴的位移小于1cm为终点指标。采用序贯法,通过把虫体置入含不同浓度氯胺酮的缓冲液中,用Dixon-Mood法计算出ED50。重复实验六次。观察48h后虫体的存活情况。结果:六次实验测量草履虫的运动速度比较无统计学差异(P>0.05)。六次实验测定的ED50值分别为1.517±0.207、1.600±0.226、1.800±0.055、1.650±0.245、1.700±0.105、1.417±0.175g/L,无统计学差异(P>0.05)。48h后虫体均存活。结论:结果提示毛细玻璃管法稳定性较好,是一种可行的测定草履虫静脉麻醉药ED50的方法。; 阳慧庞雪花刘进廖大清; 关键词：氯胺酮草履虫麻醉 ED50

马桑内酯对大鼠海马神经元钠电流的影响被引量：1: 2007年; 目的研究马桑内酯(coriaria lactone,CL)对大鼠海马神经元钠离子通道电流的影响,探讨该影响在CL致痫中的意义。方法利用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠海马神经元上记录钠电流,观察CL对电流幅度的影响。结果经0.1 m g/mL、0.2 m g/mL的CL作用后,海马神经元钠电流有不同程度的增加〔CL 0.1 m g/mL组的最大峰值电流密度为(-90.11±14.02)pA/pF,增幅为17.32%±8.52%;CL 0.2 m g/mL组的最大峰值电流密度为(-111.52±6.65)pA/pF,增幅为37.98%±4.91%〕;经与对照组相比,CL 0.2 m g/mL组(P<0.05)的变化较CL 0.1 m g/mL组(P>0.05)明显。结论CL使海马神经元电压依赖性钠电流的幅度增大,从而改变细胞的兴奋性,引发异常放电。; 张勤赖晓晖廖大清刘洁周东; 关键词：马桑内酯海马神经元钠电流膜片钳技术癫痫

钾通道在新生大鼠星形胶质细胞缺氧缺血性水肿中的作用机制: 2008年; 目的探讨钾通道在体外培养的新生大鼠星形胶质细胞缺氧缺血性水肿中的作用机制。方法体外培养出生3d新生大鼠的星形胶质细胞；采用RNA干扰技术制作水通道蛋白4（AQP4）敲低型（AQP4^-/-）细胞模型；用放射性[^3H]标记的甲基D-葡萄糖摄取，测定缺氧缺血性AQP4^-/-和野生型（AQP4^＋/＋）星形胶质细胞体积；利用全细胞膜片钳技术记录培养的星形胶质细胞电压依赖性钾通道（Kv）的电流特性，并记录缺氧缺血性星形胶质细胞Kv通道的电流变化。结果AQP4^＋/＋和AQP4^-/-星形胶质细胞在缺氧缺血时均较其对照组细胞体积明显增加（AQP4^＋/＋和AQP4^-/-组细胞在缺氧缺血0．5、1、2、4h组占所对应的对照组D-葡萄糖摄取值的百分数分别为104±7、109±6、126±12、152±9和97±7、105±9、109±7、132±6，均P〈0．05），但相同缺氧缺血时间点AQP4^-/-介导细胞水肿程度明显减轻（均P〈0．05），而且细胞电流密度随着缺氧缺血时间延长，进行性下降（对照组和缺氧缺血0．5、1、2、4h组细胞电流密度值分别为116±8，107±9，91±10，76±6，37±11，均P〈0．05）。结论在细胞缺氧缺血时，细胞外向性钾通道下调，可能阻止细胞内堆积的钾离子流出细胞外，引起渗透性改变而导致水通过AQP4流入细胞内，从而出现细胞水肿。; 付雪梅向龙廖大清封志纯母得志; 关键词：膜片钳术

花生四烯酸乙醇胺对乳鼠心肌细胞外向钾通道电流的影响被引量：1: 2009年; 目的研究内源性大麻样物质花生四烯酸乙醇胺(AEA)对乳鼠心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)及持续外向钾电流(Isus)的作用。方法体外培养乳鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳方法检测不同浓度的AEA对Ito及Isus的作用。结果20nmol/LAEA即可显著抑制心肌细胞Ito及Isus的电流密度(分别为16.13±3.31pA/pFvs14.48±1.97pA/pF,及11.17±3.25pA/pFvs10.16±3.21pA/pF;P均<0.01)。逐步增加AEA的浓度至100,500nmol/L及1,5,10μmol/L仍然对Ito及Isus有抑制作用,但对Ito电流密度抑制最多的是5μmol/LAEA,而对Isus电流密度产生最大抑制作用的AEA浓度为1μmol/L。结论AEA对体外培养的乳鼠心肌细胞的Ito及Isus具有抑制作用,这一作用在一定的药物浓度范围内随剂量增加而增加。; 谭真廖大清黄德嘉; 关键词：电生理学钾电流膜片钳技术心肌细胞

一种显示网状纤维的方法被引量：1: 2001年; 廖大清马玉琼陈思秀; 关键词：网状纤维碳酸铵浓氨水

应用联合酶建立BALB／c鼠枯否氏细胞体外分离培养方法被引量：4: 2008年; 目的用作用功效不同的酶联合消化分离BALB／c鼠枯否氏细胞（KC），建立简便易行，产量、活性、纯度较稳定的KC分离培养方法。方法将0．1％Ⅳ型胶原酶、0．2％链霉蛋白酶、0．01％Dnase Ⅰ酶按1：1：1比例混合原位灌注和离体消化肝组织，经Percoll梯度离心，贴壁培养纯化细胞，应用荧光显微镜观察、免疫组织化学染色、吞噬功能实验进行鉴定。结果KC获得率为（2～3）×10^6／鼠肝，细胞存活率达96％，免疫组化和吞噬实验鉴定细胞纯度达92％。KC贴壁后形态大小不规则，呈多角形或星形，免疫组织化学染色显示溶菌酶阳性，胞浆内见吞噬的碳素墨汁颗粒。结论用作用功效不同的酶联合消化KC，经梯度离心和贴壁培养，可获得高产量、高活性、高纯度的BALB／c鼠KC，为进一步研究KC在肝脏疾病中的作用提供可靠的细胞来源。; 郑雪莲严茂林廖大清周总光陈珂玲; 关键词：枯否氏细胞 BALB/C鼠

超快速脱毒对吗啡成瘾大鼠血浆吗啡和脑组织β-内啡肽水平的影响被引量：3: 2005年; 目的探讨超快速脱毒对吗啡成瘾大鼠血浆吗啡和脑组织β-内啡肽水平的影响。方法 Wistar雄性大鼠90只,随机分为正常组(n=5)、成瘾组(n=5)、自然戒断组(n=20)、单纯全麻组(n =20)、全麻+纳洛酮组(n=20)及可乐定处理组(n=20)。成瘾组、自然戒断组、单纯全麻组、全麻+ 纳洛酮组及可乐定处理组采用5日递增成瘾法建立大鼠吗啡成瘾模型。正常组和成瘾组在脱毒前取血浆和脑组织,后四组分别在予以生理盐水、全麻、纳洛酮及可乐定等相应处理后,分别于脱毒后即刻、脱毒后1、2、3 d处死5只大鼠,取血浆和脑组织,气相色谱／质谱法测定血浆吗啡浓度,放免法测定脑组织p．内啡肽含量。结果成瘾组血浆吗啡浓度为(224±164)ng/ml,高于各脱毒组(P<0．01)。脱毒后即刻,可乐定处理组血浆吗啡浓度高于各脱毒组(P<0．05);脱毒后1～3 d,各脱毒组血浆吗啡浓度差异无统计学意义(P>0．05)。成瘾组脑组织β-内啡肽含量(18．7±4．2)ng/mg低于正常组(33．5± 3．8)ng/mg(P<0．01);脱毒后即刻,全麻+纳洛酮组和可乐定处理组脑组织β-内啡肽含量较正常组增高(P<0．01),且脱毒后1～3 d均高于自然戒断组(P<0．05)。结论超快速脱毒对吗啡成瘾大鼠脱毒后3 d内血浆吗啡浓度没有影响,超快速脱毒的机制可能与纳洛酮和／(或)可乐定升高脑组织内源性阿片肽有关。; 唐昱英刘进罗南富廖大清; 关键词：阿片相关性障碍吗啡依赖 Β-内啡肽

利用膜片钳技术对小鼠嗅感觉神经细胞电生理学的初步研究被引量：2: 2008年; 目的利用全细胞膜片钳技术初步探讨小鼠嗅感觉神经细胞的电生理学特性。方法取生后7～14d的昆明小鼠的嗅黏膜，用胰蛋白酶消化组织，获取单个嗅感觉神经细胞，并用全细胞膜片钳技术对急性分离的嗅感觉神经细胞的离子通道进行记录和分析。结果急性分离的小鼠嗅感觉神经细胞的功能状态良好，在膜片钳记录过程中细胞与记录电极之间能形成高阻封接，并可记录到电压门控性的内外向电流。内向电流具有快速激活和失活的特性，并可被0．1μmol／L河豚毒（TTX）完全阻断，说明内向电流主要由Na^＋介导；外向电流包含有瞬时成分和持续成分，并可被CsCl完全阻断，说明外向电流主要由K^＋介导。结论急性酶分离的小鼠嗅感觉神经细胞的电生理学特性的初步研究，为嗅觉传导机制和药理学的研究提供依据和指导。; 倪茂美唐玥玓廖大清刘进; 关键词：电生理学全细胞膜片钳

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