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犬细小病毒四川株的分离鉴定与一步生长曲线的测定被引量：6: 2014年; 为研究犬细小病毒（CPV）生长规律，利用F81细胞从四川地区疑似CPV感染的病犬血样粪便中分离得到1株CPV，对该株病毒进行理化试验、微量中和试验、PCR鉴定以及分子生物学系统鉴定后，证实该分离株是CPV，命名为SC—C。以SC—C分离株感染F81细胞，感染后不同时间收取上清，利用CPV荧光定量PCR检测方法对不同样品中病毒DNA进行定量分析，绘制CPV一步生长曲线。结果显示，感染后，0～8h细胞内病毒DNA含量较低，感染8h后，细胞内病毒DNA含量逐渐增长，12～60h细胞内病毒DNA含量迅速增长，60h后细胞内病毒DNA含量变化不大。CPV感染F81细胞，感染后O～12h为潜伏期，病毒DNA含量维持在较低水平；12～60h为突破期，病毒DNA含量呈对数增长；感染60h后增长速度减缓，病毒含量维持在较高水平逐步进入稳定期，病毒DNA含量呈“S型”曲线增长。; 韩燕朱玲周远成廖春燕徐志文郭万柱; 关键词：犬细小病毒荧光定量PCR

发酵床养猪模式中垫料的主要菌群分析被引量：10: 2012年; 为研究南方高热高湿地区发酵床养殖模式的微生态菌群分布,以四川邛崃、遂宁两大发酵床养猪场为研究对象,采集不同年龄阶段猪只肠道内容物及不同饲养阶段发酵床垫料进行细菌分离,对分离菌株进行动物致病性试验,并对致病菌进行耐药性分析。结果表明,不同年龄猪肠道以及发酵床分离细菌种类相同,但是细菌含量存在差异。主要分离菌有大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌、黏液性枯草芽孢杆菌、普通枯草芽孢杆菌。小鼠致病性试验显示,大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌为致病菌,黏液性枯草芽孢杆菌与普通枯草芽孢杆菌为有益菌。病原菌耐药性分析结果显示,分离到的4种病原菌仅对第3代头孢类药物(头孢曲松钠、头孢吡肟)敏感,对其他药物不敏感或敏感性低。可见,发酵床养猪模式的环境中存在大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌等致病菌的威胁,且致病菌的耐药性严重,一旦发病很难用药物控制。本试验结果可为发酵床养猪模式细菌性疾病控制提供参考。; 王潇娣廖春燕朱玲; 关键词：发酵床养猪致病菌

猪巨细胞病毒环介导等温扩增检测方法的建立及其在流行病学调查中的应用: 猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus，PCMV)可引起仔猪包涵体鼻炎，流产或者新生仔猪死亡。目前，该病毒已广泛存在于世界各地，其血清阳性率均可达90％以上。由于PCMV体外培养技术尚不成熟，对PC...; 廖春燕; 关键词：流行病学调查; 文献传递

猪巨细胞病毒环介导等温扩增方法的建立被引量：4: 2015年; 根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的DNA序列设计合成4对特异性引物,通过优化反应条件,以及敏感性、特异性检测,建立了猪巨细胞病毒的环介导等温扩增检测方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP);用建立的检测方法对2013年来自四川省雅安、成都、绵阳、眉山、乐山、德阳、遂宁、资阳等市的136份病料进行猪巨细胞病毒检测,将检测结果与常规PCR方法检测结果进行比对。结果显示,本试验建立的方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,是常规PCR的10倍;136份病料用LAMP检测,其中有89份样品为猪巨细胞病毒阳性,其阳性率与常规PCR方法检测的阳性相符率为100%。结果表明,本试验成功建立了PCMV的LAMP检测方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊,对PCMV的快速诊断、综合防控等具有重要意义。; 廖春燕徐志文周远成朱玲郭万柱; 关键词：环介导等温扩增技术

猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用被引量：11: 2014年; 为建立同时快速检测猪A群轮状病毒(GARV)、猪C群轮状病毒(GCRV)和猪星状病毒(AstV)的三重RT-PCR检测方法,根据GenBank中公布的序列进行病毒基因区同源性分析,然后使用Primer Premier 5.0软件分别设计了GARV、GCRV的VP6基因和AstV的ORF2基因特异性引物,预期扩增片段的大小分别为229、166和410bp。在这3种病毒单项RT-PCR技术的基础上,建立了GARV、GCRV和AstV的多重RT-PCR检测方法,并用该方法检测30份四川省仔猪腹泻粪样。结果显示,GARV、GCRV、AstV的阳性检出率分别为26.7%、13.3%、16.7%,本方法与这3种病毒的单项RT-PCR检测结果的符合率分别为100%、100%、83%,整体符合率达94.3%,特异性为100%。结果表明,本试验建立的多重RTPCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于GARV、GCRV和AstV的同时检测。; 杨文宇周远成韩燕陈蕾廖春燕付梦瑾季洪伟蔡雨涵朱玲徐志文郭万柱; 关键词：多重RT-PCR

猪NF-kappaB p65/p50基因克隆、序列鉴定及实时荧光定量PCR检测方法的建立: 2013年; NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用,其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标。为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法,作者对猪NF-κB p65ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析;设计特异性荧光定量引物,建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法。结果显示:所扩增的猪NF-κB p65ORF长1 662bp,编码553aa,成熟p50编码区长1 653bp,编码551aa;与不同动物的p65、p50序列相似性均较高;56.5%p65位于细胞核内,78.3%p50存在于细胞质中,p65、p50均无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:起始模板与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.999,扩增效率均在95%左右;敏感性高,初始模板的检出下限达到101 copies.μL-1;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内变异系数均小于5‰。本试验为进一步研究猪NF-κB p65/p50生物学功能及其在猪相关疾病发生发展中表达量变化奠定了基础。; 王潇娣朱玲廖春燕黄仆徐志文郭万柱; 关键词：实时荧光定量RT-PCR

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廖春燕