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人外周血NK细胞的纯化及体外扩增被引量：2: 2000年; NK细胞是机体防御体系的第一道防线 ,近年来对它的研究不断深入。本文概述了NK细胞的纯化手段和扩增技术 ,并简单介绍了其应用情况。; 徐彤田志刚; 关键词：NK细胞纯化体外扩增肿瘤免疫

NK细胞纯化、扩增、克隆化培养条件的研究及NKh1/NKh2假说的提出: NK细胞是重要的淋巴细胞亚群,人成熟NK细胞的主要来源是外周血.由于NK细胞仅占外周血单个核细胞(PBMC)的5％-10％,其纯化及体外扩增是研究NK细胞重要的方法学基础.结果显示与外周血NK细胞相似.在以上研究结果的基...; 徐彤; 关键词：NK细胞克隆 RT-PCR; 文献传递

NK细胞功能亚群:“NKh1和NKh2”的初步验证被引量：9: 2001年; 目的证实 NK细胞存在与 T细胞类似的 Th1/Th2两类亚群。方法从健康人外周血分离纯化 NK细胞，利用促漂移和 RT-PCR的技术，检测外周血静止的 NK细胞及在不同极化条件下培养的 NK细胞表达Ⅰ和Ⅱ类细胞因子的情况。结果采用补体裂解法＋单抗铺皿法分离纯化 15例健康人外周血 NK细胞， RT-PCR方法检测 NK细胞表达的两类因子，发现外周血静止 NK细胞中Ⅰ类细胞因子的表达较强，主要是 IFNγ，Ⅱ类细胞因子中主要是 IL-10、 IL-13。在促 Th1极化条件下， NK细胞中表达的Ⅰ类细胞因子 IFNγ 明显增强，Ⅱ类细胞因子表达减弱，而在促 Th2极化状态下， NK细胞表达的 IFNγ水平下降，Ⅱ类细胞因子的表达水平升高。静止和Ⅱ类细胞因子状态下 NK细胞均表达极低水平或不表达 IL-4。结论 NK细胞根据其产生的细胞因子可以分化为两个亚群，暂命名为 NKh1和 NKh2。外周血中静止的 NK细胞主要以 NKh1表型为主，两个亚群的 NK细胞均表达较高水平的 IFNγ，这与 NK细胞的杀伤功能是密切相关的。; 梁淑娟徐彤魏海明张彩房静孙汭田志刚; 关键词：自然杀伤细胞细胞因子

转染双启动子杆状病毒表达载体在昆虫细胞共表达人白细胞介素12被引量：2: 2000年; 目的　通过体外表达rhIL 12 ,以供研究其在体内外的生物学效应。方法　外周血单个核细胞 (PBMC)、粘附细胞和人口腔表皮样癌细胞KB分别经SAC(含A蛋白的金黄色葡萄球菌CowanⅠ菌株 )、IFN γ +LPS和PDBu(12 ,13 二丁酸佛波酯 )刺激 ,以GIT(异硫氰酸胍 )一步法提取细胞总RNA ,经RT PCR技术获取IL 12P40和P35cDNA ,将两条基因分别插入双启动子杆状病毒转染载体pAcUW5 1的多角子启动子和P10启动子下游 ,构建真核表达载体pAcUW5 1/IL 12 ,与AcNPV共转染昆虫细胞Sf9,获取表达IL 12的细胞株 ,表达产物分别经SDS PAGE ,Westernblot,ELISA和生物学活性鉴定。结果　rhIL 12产物的相对分子质量 (Mr)经SDS PAGE和Westernblot鉴定为 6 7× 10 3 ,表达水平为15 4～ 15 7μg/ 10 6细胞。MTT法检测IL 12表达产物促进NK细胞杀伤K5 6 2细胞的能力比对照可提高 6 0 % ,刺激PHA激活的PBMC增殖的能力最高可达到 5 8%。结论　成功构建了双启动子杆状病毒表达载体pAcUW5 1/IL 12 ,获得了共表达IL 12P40和P35亚单位的昆虫细胞株。; 魏海明田志刚冯进波徐彤夏菁孙汭; 关键词：白细胞介素12

人外周血NK细胞纯化、扩增及克隆化的初步探索被引量：11: 2000年; 分别采用Panning法、补体裂解法、绵羊红细胞花环法、Percoll不连续密度梯度离心法对NK细胞进行纯化并以流式细胞仪检测其纯度和计数探索NK细胞的体外扩增条件 ,将纯化NK细胞经有限稀释 ,在饲养细胞、IL 2、PHA及LCM等培养条件下进行克隆化培养并进行鉴定。研究表明NK细胞的纯度由纯化前 10 %左右提高到 30 %～ 70 %不等 ,以Percoll不连续密度梯度离心法所获纯度最高 ,约为 70 %。NK细胞的体外扩增在含有IL 2、PHA及条件培养基最显著。每 96孔板可获 4～ 16个CD3 CD5 6 +NK细胞克隆 ,每 96个克隆的细胞数最多可达 2 35× 10 5。; 徐彤张彩田志刚王君甫张建华孙汭; 关键词：NK细胞纯化扩增克隆

人外周血NK细胞纯化方法的初步比较被引量：9: 2000年; 目的 :初步探索NK细胞的纯化方法并在此基础上研究其生物学特性。方法 :分别利用Panning法、补体裂解法、绵羊红细胞花环法对NK细胞进行纯化并利用流式细胞仪检测其纯度 ,利用MTT法检测NK细胞对K5 6 2细胞的杀伤特性 ,利用RT PCR检测NK细胞在IL 2作用下IFN γ基因表达情况。结果 :NK细胞的纯度由纯化前 10 %左右提高到 5 5 75 % ,不同纯化方法有所不同 ,纯化NK细胞较天然人PBMC对靶细胞K5 6 2的杀伤作用强 ,IL 2的促进作用更为明显 ,纯化NK细胞较外周血单个核细胞 (PBMC)有更强的体外增殖能力 ,NK细胞在IL 2作用下IFN γ基因表达提高。结论 :初步建立了人外周血NK细胞纯化及体外扩增的方法 ,纯化NK细胞与人PBMC和LAK细胞相比具有独特的生物学特性。; 徐彤田志刚张彩张建华夏青孙汭; 关键词：NK细胞增殖纯化白细胞介素-2

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徐彤