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博尔纳病病毒p24和p40基因星形胶质细胞特异表达重组质粒的构建: 2012年; 目的构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用。方法用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe I和EcoR I酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连接至pCMvie-GFAP质粒中的GFAP启动子的下游,分别得到p24和p40重组质粒。用酶切、PCR以及测序3种方法鉴定重组质粒,并将质粒转染人胶质瘤细胞株(U251),采用免疫细胞化学方法检测目的蛋白表达。结果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带位置与预期相符,经测序可见插入序列正确,质粒转染U251细胞后,经免疫细胞化学检测到目的蛋白表达。结论成功构建了pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形胶质细胞特异性表达质粒,为研究这两种病毒蛋白的致病机制及其对星形胶质细胞的影响提供了工具。; 李文娟张亮邓婧金戈黄荣忠房亮谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒核蛋白磷蛋白星形胶质细胞

抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：5: 2012年; 目的制备并鉴定鼠抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体。方法重组核蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤并进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单克隆抗体并进行效价测定和特异性鉴定。结果建立了1株能稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F6E8,重链为IgG2a,轻链为κ。ELISA法测得腹水的效价高达1∶32 000以上。Western-blot和间接免疫荧光实验证实该单克隆抗体能特异性结合重组核蛋白及天然核蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的抗核蛋白单克隆抗体,为建立博尔纳病病毒血清免疫学检测方法奠定了基础。; 徐晓艳金戈张亮李文娟邓婧马丽华黄荣忠房亮谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体

一种用于检测抑郁症的试剂盒: 本发明涉及生物技术领域，具体是一种用于检测抑郁症的试剂盒，包括封闭液、酶标抗体、酶底物溶液、终止液和酶标板、还包括PEDF蛋白或者包含PEDF蛋白的蛋白质片段，和与PEDF蛋白特异性结合的抗体，其中PEDF蛋白的氨基酸序...; 谢鹏杨涌涛周婵娟詹远房亮; 文献传递

人miR-134真核表达载体的构建及其鉴定: 2014年; 目的:构建包含外源性miR-134前体的真核表达载体,并使其在人类少突胶质瘤(oligodendroglia,OL)细胞中表达,为进一步研究miR-134的功能及作用靶标提供技术支持。方法:从人类OL细胞基因组DNA扩增miR-134前体,将所得目的片段克隆到pEGFP-N1载体上,重组质粒经测序鉴定后将其转染至人类OL细胞中,荧光倒置显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达情况,并采用荧光定量PCR检测miR-134基因水平的表达。结果:pEGFPmiR-134重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带与预期结果一致,经测序可见插入序列正确。将重组质粒转染OL细胞后,荧光定量PCR结果示pEGFP-N1空质粒转染组与空白对照组的miR-134表达水平无统计学差异(P=0.882);pEGFP-miR-134质粒转染组miR-134表达水平是pEGFP-N1空质粒转染组的52倍,两者具有统计学差异(P=0.023)。结论:通过构建真核细胞表达质粒可以高效表达外源性microRNA分子,为后续的研究奠定实验基础。; 王明菊张亮白顺杰杨柳周婵娟房亮谢鹏; 关键词：微小RNA 真核表达载体转染

重性抑郁患者血浆双向电泳图谱的构建: 2013年; 目的:建立稳定的重性抑郁血浆双向凝胶电泳技术体系。方法:从血浆蛋白质样品制备、等电聚焦和水化方式等方面对双向凝胶电泳分离技术进行优化。结果:建立了稳定的抑郁症血浆双向凝胶电泳图谱,达到了较好的血浆蛋白分离效果。结论:成功的血浆图谱构建,为进一步开展重性抑郁诊断和机制研究奠定基础。; 杨涌涛房亮詹远彭扬吴波周林科陈亮谢鹏; 关键词：蛋白质组学双向电泳血浆

博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达及纯化: 2011年; 目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确;表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式表达;纯化的重组蛋白纯度达85%左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合。结论已成功原核表达并纯化了重组BDV p24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法奠定了基础。; 金戈张亮徐晓艳黄荣忠马丽华邓婧李文娟房亮谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类原核细胞纯化

博尔纳病病毒对人少突胶质细胞增殖与凋亡的影响被引量：5: 2012年; 目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响。方法用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量。结果与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达。随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P<0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3 d后,细胞出现凋亡增多。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P<0.05),细胞增殖指数降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P<0.05)。结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生。; 邓婧李丹张亮黄荣忠李文娟马丽华房亮谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞细胞增殖细胞凋亡

首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸检测分析及其临床意义被引量：5: 2012年; 目的检测首发未用药抑郁症患者血浆氨基酸浓度并分析其与健康对照者之间的差异以及可能的临床价值。方法使用同位素内标结合串联质谱鉴定的方法测定26例首发未用药抑郁症患者和25例健康对照者血浆氨基酸浓度,同时使用17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton rating scale-17 for depression,HAMD-17)评定患者病情严重程度并进行统计分析。结果与健康对照组相比,抑郁症组中9种氨基酸(色氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、γ-氨基丁酸、α-氨基己二酸、谷氨酰胺、乙醇胺和亮氨酸)存在异常改变(P<0.05);抑郁症组中天冬氨酸和β-氨基异丁酸浓度与汉密尔顿抑郁量表得分呈显著的负性相关(P值分别为0.045、0.006,r值分别为-0.397、-0.521);回归分析提示色氨酸、半胱氨酸和谷氨酰胺组成的预测模型对抑郁组和健康对照组人群具有较好的预测效果。结论抑郁症患者病程早期存在血浆氨基酸代谢紊乱;循环氨基酸或可用于抑郁症病情严重程度评价以及抑郁症初步诊断。; 陈奕晨徐红波胡子成房亮陈建军谢鹏; 关键词：串联质谱法同位素标记抑郁症

microRNAlet-7a与抑郁症临床及机制的初步研究: 研究背景：　　抑郁症是临床最常见的精神疾病之一，具有发病率高、致残率高、致死率高等特点。目前关于抑郁症发病机制的学说复杂多样，主要有单胺类神经递质（5-HT、DA、NE）假说、细胞因子假说、下丘脑-垂体-肾上腺轴假说、神...; 房亮; 关键词：抑郁症 5-HT受体致病机制生物标志物

5-羟色胺2A受体基因多态性T102C与抑郁症关系的Meta分析研究被引量：2: 2014年; 目的:综合评价5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)2A受体基因多态性T102C与抑郁症的关系。方法:检索中国生物医学文献光盘数据库(CBMdisc)和PubMed(2000年1月至2012年11月)。根据纳入标准收集5-HT2A受体基因多态性与抑郁症研究的国内外文献。应用RevMan 5.0软件对符合条件的研究结果进行Meta分析。结果:共纳入9篇符合条件的文献,累计疾病组1 717例、对照组2 037例。数据合并结果显示5-HT2A受体基因多态性纯合子突变CC型、杂合子突变TC型与抑郁症并无明显关联。结论:5-HT2A受体基因多态性与T102C抑郁症并无明显关联,可能并不是抑郁症的易感因素。; 周婵娟钟家菊李丹房亮杨柳谢鹏; 关键词：抑郁症 5-羟色胺2A受体基因 META分析

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房亮

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