施立楠
- 作品数：4 被引量：16H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 人β-1，2-N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ在毕赤酵母中的克隆表达与活性检测
- 毕赤酵母是现在广泛应用的、重要的外源基因表达宿主。本研究是本室毕赤酵母工程菌糖基化改造系列工作的必要组成部分。β-1,2-N-乙酰葡萄糖胺转移酶I(beta-1,2-N-acetylglucosaminyltransfe...
- 施立楠
- 关键词：毕赤酵母基因
- 文献传递
- 糖蛋白糖链的分析被引量：9
- 2005年
- 糖蛋白是蛋白与糖类的共价复合物,结合于蛋白肽链上的糖链具有重要的生物学功能。对糖蛋白上的糖链进行分析,要经过糖链释放、分离不同类型糖链、相对分子质量测定及糖链测序等步骤。本文简要介绍糖蛋白糖链分析各步骤的常用方法、各种方法的特点、适用范围等。
- 施立楠吴军
- 关键词：糖蛋白糖链分析方法
- 人sTNFR II-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母菌中的表达及其产物分析被引量：7
- 2007年
- 目的： 在毕赤酵母菌中表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白.检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析.方法： 从人淋巴细胞中提取总RNA, 经RT-PCR扩增目的基因sTNFRⅡ与IgG Fc, 然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRⅡ-IgG Fc, 并将其插入pPIC9载体中.以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行克隆与表达.采用ELISA筛选高表达sTNFRⅡ-IgG Fc融合蛋白的重组毕赤酵母菌株, 对融合蛋白通过还原和非还原SDS-PAGE分析其二聚体结构, 采用L929细胞检测融合蛋白抗TNF-α的生物学活性, 最后利用荧光辅助糖电泳（FACE）分析融合蛋白的N-糖链.结果： 成功地建立了可分泌表达sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白的重组酵母菌株, 摇瓶培养后融合蛋白的表达量为2 mg/L.SDS-PAGE和Western blot表明, 该融合蛋白能自然形成二聚体结构; 可抑制TNF-α对L929细胞的杀伤作用, 其中和5×10^4 U/L TNF-α的EC50为170 μg/L.FACE分析融合蛋白N-糖链的大小为11 ～13个糖残基.结论： 在毕赤酵母菌中成功地表达了sTNFR Ⅱ-IgG Fc融合蛋白, 为在毕赤酵母菌中表达其他的Fc融合蛋白和抗体提供了参考.
- 张义浜施立楠唱韶红巩新熊凌霜吴军
- 关键词：FC融合蛋白
- β-1,2-N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ在毕赤酵母中的克隆表达及活性检测
- ＜正＞毕赤酵母是现在广泛应用的外源基因表达宿主。它具有生长快、便于规模培养的优点,又具有一定的肽链翻译后加工产生糖蛋白的能力。然而其生产的蛋白糖链具有高甘露糖构型,在人体内半衰期短且具有免疫原性。本研究旨在将β-1,2-...
- 施立楠熊凌霜吴军
- 文献传递
