朱和平
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列,选取第3外显子约600bp作为靶位点,在其上、下游设计2条同源臂,分别为4.4和1.4kb。以pPNTⅢ为骨架载体,在其2个多克隆位点处插入同源臂,构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ。结果显示,经DNA测序及酶切鉴定证实1.4kb同源短臂和4.4kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明,成功构建出牛MSTN-KO-pPNTⅢ打靶载体。
- 朱和平吴凯峰苏小虎王一超周欢敏赵瑞媛张焱如
- 关键词：肌肉生长抑制素基因基因打靶
- 可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体的构建与鉴定
- 2015年
- 为了构建可定点整合的无筛选标记的拟蛛丝蛋白基因表达载体,试验以p EGFP-N1为骨架载体,并采用PCR技术分别添加Loxp和att B片段,利用无缝克隆法将拟蛛丝蛋白基因(2s)连入质粒,经过转化、阳性克隆筛选、酶切及DNA测序鉴定。结果表明:PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果与相应寡核苷酸序列一致。说明试验成功构建了可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体p EGFP-N1-2s,可用于无筛选标记的转基因供体细胞的构建。
- 王瑞瑶闫涛朱和平周欢敏
- 关键词：CRE/LOXP系统PEGFP-N1
- 体细胞核移植生产转fat-1基因克隆Holstein牛被引量：2
- 2015年
- 为培育含ω-3多聚不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids,PUFAs)丰富的转基因奶牛新材料,本试验将fat-1基因转染到Holstein奶牛胎儿成纤维细胞,筛选获得的转基因阳性克隆细胞株,通过核移植方法构建转基因重构胚胎,比较了非转基因与转基因重构胚体外发育情况,并移植到代孕母牛子宫角。妊娠足月产下犊牛后,对犊牛进行转基因的DNA以及mRNA的表达鉴定。结果显示,非转基因与转基因重构胚囊胚率分别为32.1%和28.1%,两者之间无显著差异(P>0.05)。受体母牛的妊娠率为66.7%(6/9),其中3头母牛妊娠足月(50%)。自然分娩3头克隆牛,体细胞克隆牛的效率为20%(出生小牛头数/移植胚胎数)。经PCR鉴定,这3头小牛中有1头为转fat-1基因阳性,其余2头均为阴性,转基因阳性率为33.3%。
- 王丙萍刘羿羿王峰田栋张东李璐杜威刘彩云王申元闫涛朱和平张立周欢敏
- 无标记转Fat-1基因真核表达载体的构建及转基因绵羊细胞系的建立
- 2016年
- 为了建立无筛选标记基因的转Fat-1基因绵羊细胞系,本研究将PCR克隆得到的Fat-1基因,合成的attB、Loxp序列并克隆入pN1-EGFP框架载体,得到可删除筛选标记基因的pEGFP-N1-Fat-1真核表达载体。体外转录合成phiC31整合酶mRNA并与线性化的pEGFP-N1-Fat-1载体共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞,G418筛选得到表达绿色荧光的单克隆,再利用pET-28a-His-NLS-TAT-Cre质粒诱导Cre重组蛋白表达,将纯化后的Cre穿膜肽转导表达绿色荧光的单克隆细胞,将荧光淬灭的细胞系扩繁,提取基因组DNA,进行PCR及测序鉴定,得到无标记转Fat-1基因绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系,为生产无筛选标记基因的转基因绵羊奠定基础。
- 阿力玛朱和平王瑞瑶闫涛苏小虎李璐王丙萍那顺温都乐齐贵春周欢敏
- 关键词：真核表达载体
- 樟子松外生菌根中NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶的酶学性质研究
- 2015年
- 对褐环乳牛肝菌-樟子松菌根组织、樟子松根组织及褐环乳牛肝菌纯培养菌丝的异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)进行纯化和酶学性质鉴定。通过硫酸铵分级沉淀及葡聚糖凝胶层析纯化后的IDH进行SDS-PAGE电泳检测,并进行3种来源酶的酶学性质鉴定。菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝NADP-IDH对NADP+的Km值分别为10.7μmol/L、11.4μmol/L和22.1μmol/L;对异柠檬酸的Km值分别为71.7μmol/L、79.3μmol/L和87.8μmol/L。最适p H分别为8.2、8.0和7.5,略偏碱性。菌根IDH和根IDH的最适反应温度为45℃,真菌IDH的最适反应温度为42℃。3种IDH的活性依赖于不同的二价金属阳离子的存在,Mn2+、Mg2+存在时酶活性最强,Ca2+、Co2+、Cu2+和Zn2+对酶的活性有较强抑制作用。菌根真菌与樟子松形成外生菌根之后异柠檬酸脱氢酶的蛋白含量及酶活力都得到了提高。
- 王一超姚庆智朱和平陈丽霞郭欣杨倩倩闫伟
- 关键词：樟子松异柠檬酸脱氢酶酶学性质
- 可定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 试验旨在构建一个能够定点整合且无筛选标记基因的半乳糖苷酶基因LacS表达载体。本研究以pEGFP-N1质粒为原始框架,通过PCR及限制性酶切位点在pEGFP-N1质粒的标记基因两端添加两个同向LoxP序列,在多克隆位点上游添加能够定点整合的attB序列,最后再将目的基因BC promoter-LacS-PolyA通过限制性酶切位点插入多克隆位点。每一步都进行PCR、酶切及测序鉴定。PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果也与相应寡核苷酸序列一致,证明各个基因片段正确地连接到载体相应位置。本试验成功构建了可定点整合的无筛选标记半乳糖苷酶基因表达载体pEGFP-N1-LacS。
- 闫涛王瑞瑶朱和平苏晓田王亚娟李浩天周欢敏
