李河林
- 作品数：13 被引量：92H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛传染性鼻气管炎病毒XA株的分离与鉴定被引量：3
- 2010年
- 【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增并测序。【结果】分离病毒在MDBK细胞上产生了明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,偶见含有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRV gB特异性引物进行PCR,可扩增出1 182 bp的特异性条带,目的序列与已发表的IBRV基因组序列一致。【结论】该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV XA株。
- 李河林王晶钰刘红彦张三东
- 关键词：IBRVPCR
- 布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用被引量：11
- 2010年
- 根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性。经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL。不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好。应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%。检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等。
- 王晶钰张三东刘红彦李河林程媛媛李宇立战美娜
- 关键词：布鲁菌外膜蛋白基因多重PCR
- 表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组腺病毒的构建被引量：1
- 2015年
- 为研制表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组腺病毒疫苗,根据PCV-2ORF2(Cap)基因序列和耶尔森菌侵袭素C端(InvC)序列,克隆获得Cap和InvC基因后,插入pAdShttle-CMV载体构建重组穿梭载体pAdShttle-Cap-InvC,经PmeI线性化后,转化入BJ5183感受态细菌与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-Cap-InvC。重组质粒经PacⅠ线性化后,转染HEK293细胞,连续传代后获得重组腺病毒。应用PCR、Western blot和间接免疫荧光(IFA)技术分别检测重组腺病毒中Cap和InvC基因及表达。结果表明,成功构建了表达PCV-2Cap蛋白和InvC的重组腺病毒rAd-CapInvC,经过噬斑纯化和连续传代,重组腺病毒TCID50可达10-9.32/mL,为PCV-2重组腺病毒活载体疫苗的研发提供了基础材料。
- 许晗李海敏王爱玲李春燕李河林吕其壮张彦明郭抗抗
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白重组腺病毒
- IBRV XA株的分离鉴定及其gD蛋白的原核表达
- 传染性牛鼻气管炎病( Infectious bovine rhinotracheitis, IBR)是由牛疱疹病毒1型(BHV 1)引起的急性、热性、接触性传染病,主要牛的引起严重呼吸道和生殖道感染,给全球养牛业造成巨大...
- 李河林
- 关键词：传染性牛鼻气管炎病毒PCR原核表达
- 文献传递
- 布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用
- 根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 ...
- 王晶钰张三东刘红彦李河林程媛媛李宇立战美娜
- 关键词：布鲁菌外膜蛋白基因多重PCR
- 文献传递
- 鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗的安全性和免疫效力试验
- 将鸡新城疫、禽流感(H9亚型，SY株)二联灭活疫苗分别以肌肉注射和皮下注射的方式单剂量、单剂量重复、超剂量接种28日龄SPF鸡和6月龄产蛋鸡进行安全性试验，同时，将疫苗以不同剂量分别接种30日龄SPF鸡，接种后定期采血，...
- 刘淑红焦铁军李河林白军王运宏黄建斌张娟娟渠淑华
- 关键词：灭活疫苗油乳剂
- 鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗免疫效力试验被引量：8
- 2013年
- 为评价鸡新城疫和禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗(以下简称"二联苗")对SPF鸡的免疫保护效力,进行了血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性的研究及免疫持续期试验。不同抗体水平的SPF鸡攻毒试验结果表明,当NDV HI≥5.0log2,AIV HI≥6.0log2时,分别攻击NDV、AIV,试验鸡的保护率均达到100%;免疫期试验结果表明,二联苗以0.3mL和0.5mL的剂量分别免疫SPF鸡,免疫接种后各试验组鸡均产生较高的HI抗体,其免疫期分别能持续18周和36周。表明二联苗对试验鸡有较好的保护效果。
- 白军刘淑红焦铁军王运宏黄建斌李河林马建玲赵希斌于三科
- 关键词：新城疫禽流感灭活疫苗免疫效力
- 猪瘟病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及免疫保护试验
- 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病,我国...
- 李河林
- 关键词：猪瘟病毒腺病毒载体疫苗E2
- H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达被引量：2
- 2010年
- 【目的】构建H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因的原核和真核表达载体,将其分别在大肠杆菌和293细胞中进行表达,为进一步研究NS1蛋白的功能及其与宿主的相互作用,以及鉴定禽流感疫苗免疫禽和野毒感染禽ELISA诊断试剂盒的制备提供理论依据。【方法】用RT-PCR方法扩增H9N2亚型AIV的NS1基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中构建NS1基因的原核重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;同时,将NS1基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建NS1基因真核重组质粒,将其瞬时转染293细胞,48h后收集感染细胞,对大肠杆菌表达产物和293细胞表达产物进行Western-blotting分析。【结果】成功构建了NS1基因的原核表达载体pET-32a-NS1和真核表达载体pEGFP-C1-NS1。Western-blotting结果表明,大肠杆菌和293细胞的表达产物均能检测到特异性条带(大肠杆菌的表达产物在约44ku处出现阳性条带,293细胞表达产物在约55ku处出现特异条带)。【结论】NS1基因在大肠杆菌和293细胞中得到成功表达,获得的NS1蛋白具有良好的抗原活性。
- 王晶钰刘红彦李河林张三东柳超温肖会雷萌桐
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒NS1基因293细胞原核表达真核表达
- 牛传染性鼻气管炎病毒的增殖培养及纯化
- 【目的】制备出可用于IBRV检测及单克隆抗体制备所需的抗原。【方法】本试验通过将IBRV-oxford标准毒株接种于牛肾细胞(MDBK),30～48h细胞病变达80%时收毒的方法来培养增殖病毒。病毒细胞培养物经反复冻融3...
- 王晶钰陈婷李河林王利勤
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒增殖纯化
- 文献传递
