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杨益良: 作品数：15 被引量：166H指数：7; 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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XJ-160病毒复制子型表达载体的构建被引量：6: 2003年; XJ-160病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,全基因组测序已经完成。本文利用该病毒全基因序列首先构建了全基因组cDNA克隆质粒,在此基础上,利用基因重组技术将病毒结构基因序列替换为含有多个单酶切位点的序列,得到复制子表达载体质粒pRepxj160。为验证载体的功能,将报告基因绿色荧光蛋白(EGFP)和β-半乳糖苷酶基因(lacZ)分别插入到载体的多克隆位点,得到两个表达质粒;经体外转录获得的转录体RNA转染BHK-21细胞后14h,可检测到报告基因的表达。结果表明我们构建的XJ-160病毒复制子型表达载体具有自主复制功能,可以表达异源基因。本研究为进一步开发具有我国自主知识产权的甲病毒载体奠定了基础。; 杨益良梁国栋付士红苏乃伦邓娟侯云德; 关键词：辛德毕斯病毒

超重及肥胖者与正常成人脂肪组织中解偶联蛋白2基因表达水平的研究被引量：12: 2003年; 为比较超重及肥胖病人与正常人脂肪组织中解偶联蛋白 2 (UCP 2 )表达水平有无差异 ,探讨UCP 2在肥胖发生中的作用 ,选取 65例做腹部外科手术的病人 ,按体质指数BMI≥ 2 5为超重及肥胖 ,BMI <2 5为体重正常分组。在研究对象进行外科手术的同时采集腹膜内脂肪 ,然后提取其中的RNA ,再通过半定量RT PCR方法对两组研究对象的腹膜内脂肪中UCP 2的mRNA进行检测。结果 :男性超重及肥胖组UCP 2的mR NA相对水平为 0 92± 0 48(UCP 2 β actinamol amol) ,体重正常组为 1 75± 1 2 2 (UCP 2 β actinamol amol) ,两组间有明显差异 (P <0 0 5 ) ;女性超重及肥胖组的UCP 2的mRNA相对水平为 0 93± 0 43 (UCP 2 β actinamol amol) ,体重正常组为 1 48± 0 91(UCP 2 β actinamol amol) ,两组间有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :超重及肥胖病人腹膜内脂肪组织中UCP 2表达水平明显低于体重正常人 ,说明UCP; 由悦杨益良张树海赵文华杨晓光; 关键词：肥胖超重解偶联蛋白2 基因表达脂肪代谢

中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株感染性全基因组cDNA克隆的构建与分析被引量：10: 2005年; 报告了中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆的构建与鉴定.利用RT-PCR方法获得覆盖病毒全长基因组的cDNA片段,以低拷贝质粒pBR322作为骨架,将基因组cDNA置于SP6 RNA聚合酶启动子之后,基因组3'末端带有35个连续的A,通过DNA重组技术组装成病毒基因组全长cDNA克隆.该克隆可在大肠杆菌DH5a中稳定扩增.经体外转录,RNA转录体转染BHK-21细胞,细胞发生病变,恢复病毒滴度达到107～108pFU/ml.全基因组cDNA克隆构建过程中引入的沉默突变(8 453位核苷酸由C变为T)产生Xba Ⅰ酶切位点作为遗传标记,在子代恢复病毒的基因组中稳定存在.从细胞病变的特征、BHK-21细胞的空斑形态、病毒的抗原性、病毒在细胞中的生长动力学特征以及对乳鼠的致病性等方面比较,恢复病毒和亲本病毒XJ-160没有显著区别,提示获得了具有感染性的XJ-160病毒全长cDNA克隆.该病毒感染性全基因组cDNA克隆可以作为反向遗传学系统,为进一步研究病毒复制和致病机制,以及开发相应的载体表达系统提供分子生物学工具.; 杨益良梁国栋付士红何海怀李晓宇邓娟苏乃伦王力华侯云德; 关键词：辛德毕斯病毒

我国分离的两株病毒为重组甲病毒被引量：24: 2001年; 目的　明确我国分离的XJ 90 2 6 0和XJ 910 0 6病毒的分类地位、种系发生和遗传型。方法　特异引物逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增两株病毒的NSP4、E1基因区和 3′端非编码区 ,测序 ,进行核苷酸序列同源性比较和 3′端非编码区核苷酸序列分析 ,并结合同属其他病毒这些基因区的核苷酸序列进行种系进化分析。结果　两株病毒的核苷酸序列同源性为 10 0 % ,与西方马脑炎病毒的核种酸序列同源性最高 ,具有西方马脑炎病毒 3′端非编码区结构特征 ,其NSP4基因区与东方马脑炎病毒同源 ,E1基因区与辛德毕斯病毒同源 ,两株病毒均位于西方马脑炎病毒B组 ,与西方马脑炎病毒俄罗斯分离株进化关系最近。结论　我国分离的XJ 90 2 6 0和 910 0 6病毒属于西方马脑炎病毒同一遗传型 ,均为重组甲病毒。; 何海怀吕新军杨益良付士红周国林张桂筠陈向伟梁国栋金奇侯云德; 关键词：甲病毒属

我国新分离虫媒病毒的初步鉴定被引量：3: 2001年; 1990～ 1994年 ,从新疆地区的蚊、蜱和病人血清分离了多株病毒 ,为了明确这些病毒的分类地位 ,对其中的2 0株病毒进行了组织培养细胞感染实验和血清学检验 ,对部分毒株做了动物接种实验和理化性质鉴定。结果显示 :2 0株病毒均可使BHK 2 1细胞病变 (1～ 3天 ) ,主要表现为细胞圆缩 ,聚集 ,融合 ,破碎 ,脱落等 ;致Vero细胞病变为 2～ 4天 ;15株病毒致C6 / 36细胞病变 (2～ 4天 ) ,5株病毒对C6 / 36细胞连续观察 7天未见细胞病变。 11株病毒对乳鼠 2～ 4天致死 ,对成年鼠 2～ 5天致死。选取 6株病毒进行理化性质鉴定 ,4株病毒 (90 2 6 0、910 0 2、910 0 4和 910 2 8)对 5 氟脱氧尿苷耐受 ,对乙醚和酸敏感 ,提示为有膜RNA病毒 ;一株病毒 (90 2 6 5 )对 5 氟脱氧尿苷、乙醚和酸均敏感 ,提示为有膜DNA病毒 ;另一株病毒 (90 5 9)对 5 氟脱氧尿苷耐受 ,对乙醚和酸也耐受 ,提示可能为无膜RNA肠道病毒。 2 0株病毒中 ,17株病毒与甲病毒、乙型脑炎病毒和布尼亚病毒的特异性免疫腹水不反应 ,提示这些病毒中可能不存在甲病毒、黄病毒和布尼亚病毒 ;3株病毒 (90 2 6 0、910 0 2和 910 0 4)只与甲病毒的特异性免疫腹水反应 ,与乙型脑炎病毒和布尼亚病毒的不反应 ,提示这三株病毒为甲病毒。; 吕新军付士红杨益良何海怀张桂筠陈向伟梁国栋金奇侯云德; 关键词：病毒鉴定甲病毒

XJ-160病毒单方向血清学反应分子基础研究: 2010年; 本研究通过基因替换和重组等技术构建重组病毒解释XJ-160病毒单方向血清学反应的分子基础。以实验室构建的XJ-160病毒全感染性克隆为基础获得XJ-160病毒和辛德毕斯病毒(SINV)糖蛋白基因单独和同时相互替换的重组病毒。首先研究重组病毒对细胞及动物感染性和致病性,同时利用微量细胞中和试验方法鉴定引起XJ-160病毒单方向血清学反应的基因区段。研究结果显示XJ-160病毒E2糖蛋白是影响病毒在细胞中的生长速率,空斑形态及对乳鼠致病性的主要因素。中和试验结果显示SIN病毒E2糖蛋白对决定引起XJ-160病毒单方向血清学反应起着重要作用。本研究确定了引起XJ-160病毒单方向血清学反应的基因区段,并为进一步研究XJ-160病毒基因组结构与功能打下了基础。; 王力华付士红杨益良朱武洋唐青梁国栋; 关键词：糖蛋白重组病毒

我国分离的XJ-90260病毒鉴定为西方马脑炎病毒被引量：22: 2001年; XJ 90 2 6 0病毒是从新疆乌苏县境内采集的赫坎按蚊中分离到的一株病毒 ,病毒的鉴定结果显示 :XJ 90 2 6 0病毒可引起BHK 2 1细胞病变 ,表现为圆缩 ,脱落 ;可引起Vero细胞病变 ,表现为圆缩 ,破碎 ,脱落 ;可以在C6 / 36细胞中增殖 ,但不引起细胞病变。对 3日龄小白鼠 2～ 3天致死 ,对 3周龄小白鼠 3～ 4天致死。该病毒株对酸、乙醚敏感 ,抵抗 5 -氟脱氧尿苷。病毒与甲病毒组特异性免疫腹水起反应 ,与乙型脑炎病毒及布尼亚病毒组特异性免疫腹水不反应。进一步的分子生物学鉴定表明 ,该毒株基因组 3′非编码区 (ntranslatedregion ,UTR)核苷酸序列具有典型的西方马脑炎病毒特征 ,与标准西方马脑炎病毒 (California株 )的同源性为 99%。结果证明 :我国新疆分离的XJ- 90 2 6 0病毒为西方马脑炎病毒。这是我国有关西方马脑炎病毒的首次报导 ,有重要的流行病学意义。我国 9省区 ,886份血清的流行病学调查显示 ,该病毒抗体阳性血清 2 4份 ,阳性率为 2 71%。其中新疆 (8/ 15 7)、河南 (6 /76 )、甘肃 (5 / 94)三省区抗体阳性数较多 ,占总阳性数的 79 2 %(19/ 2 4)。; 吕新军付士红杨益良何海怀张桂筠陈相伟梁国栋; 关键词：血清流行病学虫媒病毒

我国分离的XJ-160病毒全基因组克隆的构建被引量：1: 2001年; XJ 160 virus was isolated in 1990 from Xinjiang, China. The biological characteristics of XJ 160 virus suggested that it might be a Togavirus. The serological tests showed that XJ 160 virus is a Sindbis like virus. The complete 11626 base nucleotide sequence of XJ 160 has been determined recently. It is necessary to establish a reverse genetic system for rescue of XJ 160 virus from its cDNA clone. We describe here the constructon of full length cDNA clone of XJ 160 virus. The total RNA were extracted from BHK cells infected with XJ 160 virus. Specific primers were used to amplify five fragments covering the whole genome of XJ 160 virus. All of these five fragments have the restriction enzyme sites at both termini to be assembled into the full length cDNA clone. The five PCR fragments were cloned into pGEM T vector. The clones with SP6 inserted direction were selected for subsequent manipulation. After a series of plasmid manipulation, the full length cDNA clone of XJ 160 virus was assembled into pBluescript vector. The restriction enzyme assay and sequencing analysis demonstrated that the whole genome of XJ 160 virus was correctly assembled into pBluescript vector, with added SP6 promoter in 5′ terminus and poly A in its 3′ terminus.; 何海怀杨益良付士红李蕾周国林吕新军梁国栋; 关键词：辛德毕斯病毒

XJ-160病毒感染性cDNA克隆的构建与分析: XJ-160病毒是1990年夏天从中国新疆维吾尔自治区伊犁地区霍城县境内捕获的按蚊中分离的一株病毒,经血清学和生物学鉴定为甲病毒属辛德毕斯病毒.这是中国首次分离的辛德毕斯病毒.病毒全基因组序列测定表明XJ-160病毒基因...; 杨益良; 关键词：辛德毕斯病毒复制子; 文献传递

肥胖与正常成人瘦素基因表达水平及血清水平研究被引量：5: 2003年; 由悦杨益良赵文华杨晓光; 关键词：肥胖正常成人瘦素基因表达血清水平

杨益良

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