汪劲松
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院放射医学研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征。方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Luc报告基因构建慢病毒示踪载体,转染HCM和A549细胞,激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征。非特异性启动子驱动的GFP(GFPC)和红色荧光蛋白(RFPC)报告基因作为对照。结果:2种细胞转染GFPC和RFPC后第3 d,都表达GFP和RFP;而HCM只在转染pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc 21 d后表达GFP和Luc,A549细胞不表达。结论:pMLC2v主要在培养21 d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达,这为监测干细胞向心肌细胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具。
- 许秀芳辛毅汪劲松赵莉敏杜兰萍葛桂玲李娜张颖王世强黄益民罗毅
- 关键词：肌球蛋白轻链萤光素酶
- 绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白共转染骨髓间充质干细胞、乳鼠心肌细胞、Eahy926细胞表达特征的共聚焦分析被引量：7
- 2011年
- 目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病毒载体,将GFP、RFP以同时或先后方式共转染hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞,激光共聚焦显微镜观察2种报告基因在不同细胞中的共表达特点。结果 3种细胞均能被GFP、RFP共转染,其中hMSC和乳鼠Myo均有竞争加随机转染方式,Eahy926只有随机转染方式;3种细胞转染GFP、RFP的效率有所不同,共表达2种报告基因的细胞表现为以核为中心的表达区域重叠。结论 hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞均可共转染2种报告基因,但整合方式有所不同,这将对利用多个报告基因同时示踪细胞多种生命特征提供有力帮助。
- 张颖辛毅汪劲松许秀芳罗毅黄益民
- 关键词：人骨髓间充质干细胞心肌细胞内皮细胞株绿色荧光蛋白红色荧光蛋白
- GFP和RFP报道基因在人体不同细胞中转导率的比较研究被引量：6
- 2011年
- 目的比较慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)报道基因在人体不同细胞中的转导率,为再生医学和组织工程学研究中报道基因的选择提供依据。方法将构建的GFP和RFP慢病毒载体分别转染人骨髓间充质干细胞(hMSC)、人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)和人肺泡上皮细胞株(A549)。4d后,用流式细胞仪检测GFP和RFP的转导率,并利用激光共聚焦显微镜观察GFP和RFP的表达特征。结果 GFP和RFP在hMSC、Eahy926和A549三种细胞间的转导率均有显著性差异(P(0.01);在hMSC或Eahy926或A549的同种细胞中GFP和RFP的转导率也有显著性差异(P(0.01);RFP在部分Eahy926和A549细胞局部高表达。结论慢病毒载体介导的GFP和RFP报道基因在人体不同细胞中的转导率明显不同。
- 罗毅辛毅张颖汪劲松王世强李景超高飞黄益民
