申宝玲
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 7型腺病毒E1A基因克隆及真核表达被引量：1
- 2008年
- 为了研究7型腺病毒(Ad7)E1A在感染中的致病机制,分离了Ad7d2病毒株,构建了Ad7E1A基因的真核表达体系。用A549细胞分离培养痰液标本中的腺病毒,应用重叠延伸PCR扩增Ad7E1A基因外显子,产物克隆至真核表达载体pIRES-Neo,构建重组子pIRES-Neo-Ad7E1A并转染A549细胞,利用Western印迹对其表达产物进行鉴定。克隆测序显示扩增的Ad7E1A基因外显子包含了完整的编码区基因,pIRES-Neo-Ad7E1A转染A549细胞的表达产物经Western印迹鉴定与设计相符。成功建立了Ad7E1A基因的真核表达体系。
- 沈鑫烽申宝玲黄燕燕余雪娇彭颖吕建新
- 关键词：7型腺病毒E1A基因克隆真核表达
- 细胞培养结合实时荧光RT-PCR法快速检测7型腺病毒感染被引量：5
- 2008年
- 目的建立一种细胞培养与实时荧光RT-PCR相结合的检测7型腺病毒(ADV7)感染的技术。方法A549细胞分离培养鼻咽分泌物中的腺病毒纯化后,以感染复数(MOI)为0.1、0.5、5.0和10.0的纯化病毒感染A549细胞,分别在感染后3、6、12和24h提取总RNA进行ADV7E1A基因的实时荧光RT-PCR检测并测序验证;最后用该法直接检测鼻咽分泌物标本中的7型腺病毒。结果实时荧光RT-PCR最快可在感染后3h检测出0.5MOI病毒感染的早期转录物;感染后6h可检测出0.1MOI病毒感染的早期转录物;鼻咽分泌物标本直接感染后6h即可检测到病毒的早期转录物。结论细胞培养结合实时荧光RT-PCR法能快速、灵敏、特异地检测出感染性的7型腺病毒,具有一定的推广应用价值。
- 尚定昆申宝玲郑晓群彭颖林新新
- 关键词：腺病毒细胞培养RT-PCR
