罗元明
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 单链抗体2F3表达条件的优化及其提纯和性质研究被引量：9
- 2002年
- 将构建好的单链抗体 2F3表达载体pTMF2F3ScFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)。先挑选出表达量高的单克隆 ,然后让其在 37℃进行表达 ,并将表达时的培养条件进行优化。实验结果表明 :最佳诱导条件为开始诱导时的菌体密度OD590nm =1.0～ 1.8,所加异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)的浓度为 0 3～ 0 5mmol L ,诱导时间 7h ,优化后目的蛋白表达量占菌体总蛋白的 2 0 % ,并用发酵罐成功地进行了扩大培养 ,筛选了洗涤包涵体的最佳条件。采用两步法对包涵体复性进行了研究 ,用Westernblotting及ELISA法检测了所表达的单链抗体及其生物活性 。
- 罗元明牟颖魏景艳阎岗林罗贵民
- 关键词：提纯包涵体ELISA抗体酶
- 含硒单链抗体酶的纯化、人源化及生物印迹酶的研究
- 由于单克隆抗体酶分子量大,在机体内不易被运输和吸收,故用其模拟GPX并应用于医药领域具有许多局限性.该文采用分子量小的单链抗体酶模拟GPX,能克隆以上缺点.并对单链抗体的人源化进行了研究.同时,采用更为简单的分子印迹技术...
- 罗元明
- 关键词：纯化人源化
- 文献传递
- 应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶被引量：2
- 2001年
- 目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后，构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ，经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变，得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ ｐｌｕｓ），表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在，相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ，接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。
- 牟颖高姝娟张岩苏丹苏大明任晓君由德林罗元明闫岗林罗贵民黄华梁刘子
- 关键词：包涵体谷胱甘肽过氧化物酶硒
- 具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒单链抗体酶制备被引量：2
- 2001年
- 利用RT PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株 2F3中 ,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因 .经DNA测序后 ,用Linker(Gly4 Ser1) 3 构建成单链抗体 (scFv)表达载体pTMF scFv ,将重组质粒pTMF scFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,实现了单链抗体的高效表达 .表达的单链抗体占菌体总蛋白 2 5%～ 30 % .该重组蛋白以包涵体形式存在 ,分子量为 30kD .经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化 ,得到电泳均一的单链抗体 .再经化学诱变 ,得到含硒单链抗体酶 ,其谷胱甘肽过氧化物酶活性为 330 0U μmol.
- 由德林高姝娟黄华梁冯书章牟颖苏丹罗元明刘子闫岗林罗贵民杨同书沈家骢
- 关键词：单链抗体化学诱变抗体酶硒
