能昌爱
- 作品数：14 被引量：15H指数：3
- 供职机构：燕山大学环境与化学工程学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达
- 2012年
- 本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达。提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5'端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA。经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹(Western blot)法检测OVA表达水平。结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列(登录号NM_205152)一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确。经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高。结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件。
- 能昌爱李秀锦仲飞李振张峰陈慧慧张考韩冬梅
- 关键词：卵清蛋白重组蛋白表达
- 维生素D3的免疫调节作用
- 维生素D3的活性形式为1,25-二羟维生素D[1,25-(OH)D],其经典的生物学功能是促进钙磷代谢。近30年人们研究发现维生素D除具有调节机体钙磷代谢的作用外,还具有多种免疫调节作用,包括先天免疫调节作用和获得性免疫...
- 李秀锦能昌爱仲飞温洁霞李文艳
- 文献传递
- 犬白细胞介素-7基因对DNA疫苗的生物佐剂作用
- 2012年
- 白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本实验以犬细小病毒VP2 DNA疫苗分析了白介素-7基因对DNA疫苗的生物佐剂作用。首先采用RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中扩增cIL-7基因,然后将cIL-7基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中。
- 孙岩李秀锦仲飞王幸兴王璐能昌爱
- 关键词：DNA疫苗脾淋巴细胞基因插入机体免疫能力
- D14信号肽序列介导卵清蛋白(OVA)基因在HEK293T细胞中的分泌表达
- 2012年
- 卵清蛋白(OVA)是禽蛋的重要营养成分,也是免疫学研究中最常用的模式抗原蛋白。尽管OVA在鸡输卵管中大量分泌表达,但OVA基因在培养动物细胞中表达水平较低,从而影响OVA基因作为DNA疫苗的研究应用。通过SignalP3.0 server软件分析,发现OVA基因缺乏典型的信号肽序列,这是否是OVA在非输卵管细胞表达水平低的原因,目前尚不清楚。
- 能昌爱李秀锦仲飞李振张峰
- 关键词：分泌表达OVA信号肽序列卵清蛋白免疫学研究抗原蛋白
- 人CD14信号肽序列介导卵清蛋白在HEK293T细胞中的高效分泌表达
- 卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）是禽蛋的重要营养成分，也是免疫学研究中最常用的模式抗原蛋白。尽管OVA在鸡输卵管中大量分泌表达，但OVA基因在培养的动物细胞中表达水平较低，从而影响OVA基因作为DNA疫苗的研究应用...
- 能昌爱
- 关键词：293T细胞分泌表达
- 文献传递
- IL-2与IL-7基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用被引量：5
- 2012年
- 【目的】探讨犬白细胞介素-2(cIL-2)与犬IL-7(cIL-7)基因对犬细小病毒(CPV)VP2蛋白DNA疫苗免疫增强的协同作用。【方法】利用含内部核蛋白体进入位点(IRES)的真核表达载体构建cIL-2和cIL-7双基因表达载体。然后利用本实验室构建的CPV VP2、cIL-2和cIL-7表达载体及本文构建的双基因表达载体,以不同组合对小鼠进行免疫,即VP2单免疫,VP2+cIL-2、VP2+cIL-7和VP2+cIL-2/cIL-7共免疫。通过ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠血清VP2的抗体水平,并分析中和抗体的效价,通过细胞增殖实验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,并用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。【结果】本实验构建的双基因表达载体结构正确,并能够介导cIL-2与cIL-7基因在真核细胞中进行同步分泌表达。小鼠免疫结果表明,VP2+cIL-2/cIL-7共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价均显著高于VP2+cIL-2和VP2+cIL-7共免疫组(P<0.05)。VP2+cIL-2/cIL-7共免疫组小鼠的淋巴细胞刺激指数比其它免疫组略有升高但尚未达到显著水平,然而γ干扰素的表达水平显著高于其它免疫组(P<0.05)。【结论】cIL-2和cIL-7基因对CPV VP2 DNA疫苗免疫原性的增强作用具有明显的协同效应。
- 陈慧慧仲飞李秀锦王璐孙岩能昌爱张考李文艳温洁霞
- 关键词：白细胞介素-2白细胞介素-7犬细小病毒
- 腺病毒介导犬干扰素-γ基因的表达及其体外抗犬细小病毒的作用被引量：6
- 2012年
- 【目的】构建含犬干扰素-γ(cIFN-γ)基因的重组腺病毒,并在培养的犬肾细胞MDCK中分析其抗犬细小病毒的活性。【方法】首先将cIFN-γcNDA基因克隆到腺病毒穿梭质粒中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒穿梭质粒pShuttle3-cIFN-γ。利用特异的酶切位点,通过直接连接法将cIFN-γ表达盒插入到腺病毒基因组质粒pAdeno-X中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒基因组质粒pAd-cIFN-γ。pAd-cIFN-γ质粒经酶切线性化后转染人胚胎肾细胞HEK293T,在细胞中拯救出含有cIFN-γ基因的复制缺陷型重组腺病毒。然后用该重组腺病毒处理(感染)培养的犬肾细胞MDCK,再用犬细小病毒感染重组腺病毒处理的细胞,分析重组腺病毒在体外抗犬细小病毒的活性。【结果】通过连接法构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,构建的重组腺病毒能够介导cIFN-γ在MDCK细胞中进行分泌表达。用含cIFN-γ基因的重组腺病毒处理MDCK细胞,可明显地抑制犬细小病毒在细胞中的增殖,表明构建的重组腺病毒具有明显的抗犬细小病毒的活性。【结论】构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,并证明该重组病毒在体外具有明显的抗犬细小病毒的活性。
- 张考靳慧君仲飞李秀锦能昌爱陈慧慧李文艳温洁霞
- 关键词：干扰素-Γ腺病毒载体抗病毒活性犬细小病毒
- IL-7基因与IL-2基因对DNA疫苗免疫原性增强的协同作用
- 2012年
- 白细胞介素(IL)2和IL-7是动物体重要的细胞因子。IL-2具有促进T细胞的增殖与分化、激活细胞毒性淋巴细胞和巨噬细胞的活性;IL-7具有促进T细胞和B细胞的增殖的活性。研究证明IL-7促进T细胞介导的免疫依赖于IL-2。由于IL-2和IL-7 IL-2均有刺激淋巴细胞增殖作用。
- 李秀锦陈慧慧仲飞能昌爱韩晓敏王璐孙岩
- 关键词：免疫原性细胞介导淋巴细胞增殖IL-7
- D14信号肽序列介导卵清蛋白(OVA)基因在HEK293T细胞中的分泌表达
- 卵清蛋白(OVA)是禽蛋的重要营养成分,也是免疫学研究中最常用的模式抗原蛋白。尽管OVA在鸡输卵管中大量分泌表达,但OVA基因在培养动物细胞中表达水平较低,从而影响OVA基因作为DNA疫苗的研究应用。通过SignalP3...
- 能昌爱李秀锦仲飞李振张峰
- 文献传递
- 人类CD14信号肽介导卵清蛋白基因在真核细胞的高效分泌表达
- <正>卵清蛋白(ovalbumin,OVA)是禽蛋的重要营养成分,也是免疫学研究中最常用的模式抗原蛋白。为提高重组OVA在非输卵管上皮细胞中的分泌表达水平,本实验采用人的CD14信号肽序列与OVA基因进行融合,以健进童组...
- 林洪羽能昌爱徐建王利月仲飞李秀锦
- 文献传递
