董燕 作品数:80 被引量:566 H指数:13 供职机构: 广州中医药大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 环境科学与工程 更多>>
抗菌肽cecropin B和兔NP-1融合基因转化鱼腥草的研究 被引量:11 2010年 目的:将抗菌肽cecropin B和兔NP-1(CN)融合基因转入鱼腥草,培育鱼腥草基因工程新品种。方法:设计并合成抗菌肽融合基因CN,构建重组质粒pBI121-CN,并转入农杆菌LBA4404,以农杆菌介导法转化鱼腥草外植体,将卡那霉素筛选获得的再生抗性植株以快速筛选PCR法进一步筛选阳性植株,再提取基因组DNA进行PCR-Southern鉴定,RT-PCR分析目的基因在鱼腥草中的表达,以大肠杆菌K12抑菌圈实验和立枯丝核菌感染实验分析转基因鱼腥草抗菌能力。结果:抗菌肽基因已整合到转基因鱼腥草基因组中并表达,表现出抗菌能力增强的性状。结论:以抗菌肽融合基因CN转化鱼腥草,初步获得抗菌活性提高的转基因植株。 董燕 张莹 易浪 来慧丽 张雅明 周联 王培训关键词:鱼腥草 抗菌肽 农杆菌 苍耳子对小鼠脾淋巴细胞蛋白质组影响的双向电泳分析 被引量:2 2005年 目的观察苍耳子对致敏小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达的影响。方法NIH小鼠正常组腹腔注射生理盐水,造模组和治疗组均注射羊红细胞(SRBC)致敏,治疗组经致敏后以苍耳子水煎剂灌胃,处理4 d后,分离小鼠脾淋巴细胞;提取总蛋白,双向凝胶电泳(2-DE)后,以计算机图像分析软件分析电泳图谱。结果致敏会引起多种蛋白质表达发生变化,而苍耳子可逆转其中部分蛋白质的变化。结论苍耳子可改善由致敏引起的小鼠脾淋巴细胞中部分蛋白表达的变化。 董燕 冯冲 马伟忠 曾靖 王培训 周联关键词:苍耳子 脾淋巴细胞 蛋白质组 双向电泳 茯苓多糖对小鼠肠道分泌型免疫球蛋白A,CD80,CD86表达的影响 被引量:21 2011年 目的:观察茯苓多糖对卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠肠道黏膜免疫应答的影响,探讨其对黏膜免疫的调节作用及其相关机制。方法:BALB/c小鼠随机分为2组:对照组和茯苓多糖组,对照组口服给予等体积生理盐水,茯苓多糖组每日按体重口服给药1次,剂量为200 mg·kg-1,2组小鼠给药1周后,1次性给予每只小鼠口服抗原卵清白蛋白(OVA)5 mg进行免疫,分别于免疫后1,2,3周,收集小鼠粪便样本,ELISA检测小鼠粪便OVA特异性分泌型免疫球蛋白A(sIgA);2组小鼠给药1周后,分离小鼠派氏结,流式细胞术检测派氏结(Peyer’s patches)中B淋巴细胞共刺激分子CD80,CD86表达。结果:对照组小鼠粪便中OVA特异性sIgA在1,2,3周时分别为(19.39±2.89),(17.60±5.65),(14.48±4.55)μg·L-1,茯苓多糖组为(28.44±3.72),(42.24±5.14),(26.29±4.82)μg·L-1,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。对照组小鼠派氏结B细胞CD80,CD86表达率(%)分别为1.84±0.11和16.50±1.47;茯苓多糖组表达为2.76±0.29,22.02±1.89,高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论:茯苓多糖对肠道sIgA分泌具有调节作用,这与其活化派氏结B淋巴细胞有关。 王青 胡明华 董燕 潘华新 周联 王培训关键词:茯苓多糖 分泌型免疫球蛋白A 双氢睾酮耦联Ki67多肽核酸对激素非依赖性前列腺癌细胞的抑制作用 2009年 目的:探讨双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)耦联Ki67多肽核酸(peptide nucleic acids,PNAs)对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞Ki67表达、细胞生长及凋亡的影响方法:人工合成针对Ki67基因的多肽核酸并与DHT耦联(DHT-PNAs)后转染PC-3细胞,采用RT-PCR、免疫细胞化学、Western blotting检测PC-3细胞Ki67抗原的表达,CCK8法检测PC-3细胞增殖,原位末端标记法(TUNEL)检测PC-3细胞凋亡,以上实验均以以PNAs组、DHT组为对照组。结果:DHT-PNAs、PNAs均能抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3的Ki67表达,诱导PC-3细胞凋亡,使细胞生长受抑,并且均具有浓度依赖性。DHT-PNAs作用强度明显强于相同剂量的PNAs,3μmol/L DHT-PNAs即可达到9μmol/L PNAs的作用强度。结论:DHT-PNAs能有效增强PNAs阻抑PC-3细胞Ki67表达、诱导细胞凋亡及抑制细胞生长的作用。 赖海标 吴松 孔祥廉 杨秀静 董燕关键词:双氢睾酮 KI67基因 前列腺肿瘤 燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究 被引量:20 2006年 目的:探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法:提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质,进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果:印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异,而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带,且主要集中于酸性端。结论:SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱,用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。 林洁茹 董燕 周华 赖小平 王培训关键词:SDS-PAGE 等电聚焦电泳 农杆菌介导鱼腥草遗传转化的主要影响因素 2010年 目的:研究鱼腥草遗传转化的影响因素,以提高转化效率,获得转基因植株。方法:通过分析GUS报告基因的瞬时表达和外植体愈伤分化情况比较菌株质粒组合、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间、抗生素种类和浓度等因素对转化的影响,应用PCR和Southern blot技术鉴定转基因植株基因组中的外源基因。结果:菌液浓度A600为0.3、26℃侵染15min条件下侵染,添加乙酰丁香酮有利于转化,适宜的预培养时间和共培养时间与菌株/质粒组合有关,农杆菌LBA4404/pBI121优于EHA105/pCAMBIA1305.2组合。经条件优化,转化外植体的GUS染色阳性率在60%~80%之间,经鉴定外源基因已整合到转基因鱼腥草基因组中。结论:通过影响因素的优化研究,获得了鱼腥草转基因植株,为培育鱼腥草基因工程新品种奠定了基础。 董燕 张莹 来慧丽 周联 王培训关键词:鱼腥草 农杆菌 影响因素 小檗碱对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响 被引量:1 2014年 【目的】观察小檗碱对脂多糖(LPS)、白细胞介素-4(IL-4)诱导的小鼠RAW264.7细胞极化的影响。【方法】体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,模型组和给药组分别加入LPS(终浓度100 ng/mL)或IL-4(终浓度10 ng/mL),给药组用终浓度20μmol/L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶-1(Arg-1)、一氧化氮合酶(iNOS)、细胞因子信号传导抑制蛋白2(SOCS2)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-10的分泌量。【结果】小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF-α分泌量的增加以及iNOS、SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用(P<0.05或P<0.01);对IL-4刺激的巨噬细胞IL-10分泌量的增加和Arg-1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用(P<0.05),而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响(P>0.05)。【结论】小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1/M2动态平衡中发挥调节作用。 朱瑞丽 吴阳阳 罗进芳 易浪 董燕关键词:脂多糖 基因表达调控 细胞培养 青藤碱对FLS增殖及α7nAChR、TLR2和TLR4表达的影响 被引量:4 2016年 目的探讨青藤碱(sinomenine,SIN)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptors,α7n ACh R)、Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响。方法组织块法分离培养原代FLS,流式细胞术检测FLS表面标志物CD90。FLS设对照组、TNF-α组、SIN组(100,200,400μmol·L^(-1)),SIN组给予SIN干预30 min后,TNF-α组、SIN组均给予20 ng·m L^(-1)TNF-α刺激24 h,采用MTT法检测各组FLS增殖,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)分泌量,RT-PCR法检测α7n ACh R、TLR2和TLR4 m RNA表达及Western bolt法检测α7n ACh R、TLR2和TLR4蛋白表达。结果 TNF-α刺激FLS后,细胞明显增殖,分泌IL-6明显增加,α7n ACh R、TLR2和TLR4 m RNA及蛋白表达增加,SIN(200,400μmol·L^(-1))能抑制FLS增殖,抑制IL-6分泌,并且下调α7n ACh R、TLR2和TLR4 m RNA及蛋白表达。结论 FLS增殖与α7n ACh R、TLR2和TLR4表达相关,且SIN能抑制FLS增殖,并下调α7n ACh R、TLR2和TLR4表达。 彭冲 易浪 吕彦军 白莎莎 李景 董燕 王培训关键词:青藤碱 成纤维样滑膜细胞 Α7烟碱型乙酰胆碱受体 增殖 转基因技术在药用植物中的应用 被引量:5 2009年 药用植物是我国中药宝库的重要组成部分,应用植物转基因技术提高植株抗病性,优化中药植物种质资源,培育药效成分量高的新型转基因药材,或以基因工程细胞生产药用价值高、来源有限的中药活性成分,对中药现代化和可持续性发展具有重要意义。结合转基因植物的历史发展与植物转基因技术现状,论述了基因工程技术在传统中药材中的应用和发展前景。 董燕 张雅明 周联 王培训关键词:药用植物 中药 基因技术 Ki67反义寡核苷酸及联合紫杉醇对PC-3细胞增殖的影响 被引量:1 2008年 目的研究Ki67反义寡核苷酸(antisense oligodexynucleotides,AS-ODN)对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用及与紫杉醇联用的协同作用。方法Ki67反义寡核苷酸在脂质体介导下转染PC-3细胞,以RT-PCR技术检测Ki67基因表达情况,以CCK8法检测Ki67反义寡核苷酸以及联合紫杉醇对PC-3细胞增殖的影响,以金正均Q值法评价二者是否有协同作用。结果31.25nmol/LAS-ODN能显著抑制PC-3细胞的增殖(P<0.05),且抑制作用随AS-ODN浓度增加而增强;各不同浓度的AS-ODN能显著降低Ki67 mRNA的表达;31.25nmol/LAS-ODN与0.001μmol/L紫杉醇联用,Q=1.77。结论Ki67反义寡核苷酸可以通过抑制增殖蛋白Ki67的表达进而抑制PC-3细胞的增殖,且与紫杉醇(0.001μmol/L)联用有协同作用。 杨秀静 董燕 周联 吴松 赖海标 王培训关键词:前列腺癌细胞 KI67 反义寡核苷酸 紫杉醇