侯力丹
- 作品数：58 被引量：85H指数：5
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院重点部署项目北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生政治法律更多>>
- 鸭瘟病毒UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失突变株及其构建方法与应用
- 本发明涉及鸭瘟病毒UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失突变株及其构建方法与应用，本发明提供一种UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失的重组鸭瘟病毒毒株，该毒株具有减弱的毒力，对鸭无致病性，且具有良好的免疫原性，...
- 杨承槐毛娅卿刘丹侯力丹黄小洁李俊平李启红王乐元
- H5亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2-H5株的构建及其应用
- 本发明涉及H5亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2-H5株的构建及其应用。本发明设计构建了一株重组鸭肠炎病毒rDEVΔ UL2-H5，该毒株是表达5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组鸭肠炎病毒，可用于制备制备成活...
- 杨承槐李俊平侯力丹刘丹毛娅卿李岭李启红李慧姣王乐元
- 文献传递
- 犬细小病毒2c亚型毒株的分离与鉴定被引量：1
- 2019年
- 采集一疑似犬细小病毒(CPV)患犬的粪便,用纳米PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在F81细胞中的增殖动态。利用PCR扩增分离病毒的VP2基因,测序结果用DNAMAN软件对获得的VP2基因序列进行拼接,并与NCBI上已经公布的犬细小病毒的全基因组序列以及相关蛋白的核酸序列进行比较,确定其所分离的病毒株型并推导氨基酸序列。结果表明,纳米PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变(CPE),血清学鉴定为CPV抗原阳性,序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框(ORF)为1755 bp。进化分析显示,该毒株属于CPV-2c型,并命名为CPV-2c-Guangxi23。
- 邓永孔冬妮侯力丹毛娅卿王嘉
- 关键词：犬细小病毒
- RIG-I敲除293T细胞系的建立及其对B型流感病毒复制的影响
- 2020年
- CRISPR/Cas9基因编辑技术是通过人工设计的单向导RNA(Single-guide RNA,sgRNA)指导Cas9蛋白对目的基因靶位点进行特异性的识别、结合和切割后,通过细胞的非同源末端连接或同源末端重组修复机制来完成对基因组的敲除与敲入的编辑技术。RIG-I是机体的一种模式识别受体,能够识别胞质中的含5′-三磷酸基团的RNA,并通过与下游信号分子MAVS相互作用,激活IRF3/7和NF-κB,从而启动I型干扰素和炎性因子的表达。已有研究表明,B型流感病毒(IBV)在感染早期能够上调RIG-I的表达水平。为了探索RIG-I是否为B型流感病毒激活抗病毒天然免疫信号通路的主要受体及其对IBV复制的影响,本研究利用CRISPR-Cas9技术对293T细胞中的RIG-I基因进行了敲除,经嘌呤霉素压力筛选到了一株稳定敲除RIG-I基因的293T(RIG-I-/-293T)细胞系。Western blotting检测发现,IBV或仙台病毒感染后该细胞系中RIG-I不再表达,说明该敲除细胞系构建成功。IBV感染RIG-I-/-293T细胞后,干扰素、炎性因子及干扰素刺激基因的转录水平与野生型293T细胞相比明显下降,并且在RIG-I-/-293T细胞中检测不到p65和IRF3磷酸化,表明IBV感染早期细胞因子的表达主要依赖于RIG-I信号通路的激活。IBV在野生型及RIG-I-/-293T细胞中的多步生长曲线表明,RIG-I可抑制IBV的复制。以上结果表明,RIG-I敲除的293T细胞系构建成功,RIG-I是IBV激活下游抗病毒天然免疫信号通路的主要受体之一,且对IBV的复制具有负调控作用,该研究为探索IBV的感染机制奠定了基础。
- 田璐焦鹏涛侯力丹李芸宋正宇刘文军范文辉范文辉
- 关键词：RIG-I基因敲除B型流感病毒
- H5亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2‑H5株的构建及其应用
- 本发明涉及H5亚型禽流感重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2‑H5株的构建及其应用。本发明设计构建了一株重组鸭肠炎病毒rDEVΔUL2‑H5，该毒株是表达5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组鸭肠炎病毒，可用于制备制备成活疫...
- 杨承槐李俊平侯力丹刘丹毛娅卿李岭李启红李慧姣王乐元
- 文献传递
- 一种检测禽呼肠孤病毒抗体的间接ELISA试剂盒
- 本发明属于生物技术检测领域，具体的涉及一种检测禽呼肠孤病毒的间接ELISA抗体检测试剂盒。本发明通过分析Sigma‑B蛋白序列信息进行二级结构、亲疏水性、抗原性等分析，选取抗原重组表位，构建至原核表达载体，纯化制备蛋白质...
- 侯力丹毛娅卿翟天舒陈晓春苏佳吴华伟
- 我国禽用生物制品现状及禽用病毒类生物制品质量情况分析
- 2024年
- 对我国禽用生物制品基本现状及2013-2022年禽用病毒类生物制品的质量情况进行总结,分析存在的问题,提出强化SPF鸡(鸡胚)质量控制、持续开展风险监测方法研究、完善禽用标准物质、推动禽用新型生物制品研制的建议。
- 吴华伟刘丹王嘉陈晓春黄小洁孔冬妮苏佳侯力丹薛麒邓永翟天舒赵炜白洪旭薛青红
- 禽网状内皮组织增生症病毒MD-2株感染性克隆的构建与突变分析被引量：1
- 2020年
- 为构建禽网状内皮组织增生症病毒(REV)MD-2株的感染性克隆,将MD-2株的前病毒基因组全长克隆至pMD18-T Simple载体中构建MD-2全长质粒,经转染CEF细胞后进行病毒拯救及鉴定,并对拯救病毒进行了生物学特性研究。结果表明,成功构建了MD-2全长质粒,拯救病毒感染CEF细胞后用间接免疫荧光试验检测到病毒抗原;拯救病毒的生长特性与亲本病毒相比无明显差异。随后对env基因进行了多个位点的定点突变,并拯救出相应的突变株,结果显示env基因第1433位碱基突变后不能拯救出病毒,推断1433位的突变为致死性突变。MD-2株感染性克隆的构建和病毒拯救的研究为继续研究REV基因和蛋白功能提供了技术支持。
- 黄小洁孔冬妮刘丹陈晓春杨飞侯力丹李俊平
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒感染性克隆突变
- 应用多重Digoxigenin标记探针在核酸斑点杂交检测中识别Ⅰ群禽腺病毒的感染被引量：2
- 2020年
- 禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)是鸡群中常见的免疫抑制性病毒,其中Ⅰ群FAdV有12个血清型(FAdV1-8a,8b-FAdV11),这为Ⅰ群FAdV检测带来了挑战。为开发一种可以同时检测Ⅰ群FAdV的Digoxigenin标记核酸探针或者其组合,本研究针对Ⅰ群FAdV的hexon基因保守区域设计引物,分别以12个血清型的Ⅰ群FAdV参考毒株DNA为模板合成了12种Digoxigenin标记核酸探针,并将这12种核酸探针及其组合形成的多重探针共13种探针分别与同一杂交膜上的12种不同血清型Ⅰ群FAdV参考毒株的毒株核酸进行杂交,观察各探针或其组合能够识别的最大限度。结果显示,12种血清型对应的单一核酸探针能检测和识别的病毒类型及其灵敏度差异较大,而多重探针组合PM可以同时检测出所有12种血清型毒株并体现出最高灵敏度的优势。本研究建立了应用多重Digoxigenin标记探针组合在核酸斑点杂交检测中识别Ⅰ群FAdV核酸的新方法,为解决类似病毒高通量检测提供了新的思路。
- 侯力丹张亚文苏奇刘丹刘丹毛娅卿王嘉黄小洁赵鹏李俊平
- 关键词：DIGOXIGENIN核酸斑点杂交
- SPF鸡感染网状内皮组织增生症病毒后血清和卵黄的抗体反应相关性比较
- 2017年
- 为进一步研究采用卵黄抗体检测代替血清抗体检测的可行性,采用已建立的卵黄抗体ELISA检测方法,比较同一时期卵黄抗体与血清抗体的相关性。人工感染23周龄无特定病原体(SPF)鸡,每周采集全血分离血清,每天收集种蛋,ELISA方法检测血清、种蛋中的REV抗体,并进行比较,结果表明:攻毒后第2周开始血清抗体和卵黄抗体呈阳性,并达到峰值,之后抗体水平缓慢下降,两者具有相似的消长规律;对同一时期的卵黄抗体和血清抗体S/P比值进行统计学比较,P值小于0.05,相关系数为0.931,表明两者差异性不显著,相关性很好;阴阳性符合率比较,阳性符合率为97.8%,阴性符合率为100%,总体符合率为98.4%,阴阳性复合率很高。试验证明,同一时期的卵黄抗体和血清抗体的相关性很好,可用卵黄抗体检测方法代替血清抗体检测,从而为监测SPF鸡群感染REV提供新的技术手段。
- 黄小洁陈晓春刘丹朱真侯力丹李慧姣李俊平杨承槐
- 关键词：网状内皮组织增生症病毒血清卵黄抗体ELISA
