刘丽
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 丝状真菌外源基因表达分泌系统的受体菌的构建
- 丝状真菌因其具有高强度启动子,高蛋白分泌能力,类似哺乳动物细胞的翻译后加工能力以及成熟的发酵工艺,已成为新一代的外源基因表达分泌系统,黑曲霉更因其安全性而成为最主要的宿主菌。但丝状真菌包括黑曲霉,其自身产生的蛋白酶会引起...
- 刘丽刘谨唐国敏
- 文献传递
- 黑曲霉诱变株Aspergillus niger T21糖化酶产量提高的分子基础被引量：10
- 2001年
- 黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ Ｔ２１是以Ａ．ｎｉｇｅｒＡＳ３．７９５为出发株经诱变获得的糖化酶高产菌株，产量比原株提高１０～１７倍．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析知Ｔ２１的糖化酶ｍＲＮＡ含量约为ＡＳ３．７９５的２０倍，表明糖化酶基因（ｇｌａＡ）转录水平的提高是糖化酶产量提高的主要原因．以编码葡糖苷酸酶（ＧＵＳ）的 Ｅ．Ｃｏｌｉ ｕｉｄＡ 为报告基因，分别与 Ｔ２１和 ＡＳ３．７９５的 ｇｌａＡ５＇调控区融合后，引入Ａ． ｎｉｇｅｒ，根据转化子 ＧＵＳ酶活性测定结果， Ｔ２１ｇｌａＡ ５＇调控区的启动子活性是ＡＳ３．７９５相应启动子活性的３倍多，提示ｃｉｓ调控的改变是Ｔ２１ ｇｌａＡ转录水平提高的重要原因之一，但ｔｒａｎｓ调控的改变是Ｔ２１ ｇｌａＡ转录水平提高的更重要的原因．作为 ｔｒａｎｓ调控研究的第 １步，进行了 Ｔ２１ ｇｌａＡ ５＇调控区的功能分析，结果表明，ＡＴＧ上游－４０８～－５１３间的约 １００ ｂｐ区域与 ｇｌａＡ基因高水平表达相关．
- 范晓春仇润祥刘丽唐国敏
- 关键词：黑曲霉糖化酶发酵工业
- 黑曲霉T21 glaA 5’上游调控区的两个蛋白结合因子及其靶序列被引量：2
- 2002年
- 采用凝胶阻滞法从糖化酶高产株黑曲霉(Aspergillus niger)T21部分纯化的蛋白提取液中检测到与糖化酶基因(glaA)5＇cis调控区特异结合的两个蛋白因子,其一的靶DNA定位在glaA翻译起始点(ATG)上游-580～-509及-318～-254bp两个区域,另一蛋白因子的靶DNA定位在-809～-580区域.-580～-509序列含有“TATA”的重复结构,-318～-254序列富含“GC”以及-809～-580序列含有CCAAT的特点暗示此3片段及其所结合的蛋白因子在A.niger T21 glaA的表达调控中可能有重要作用.
- 仇润祥刘丽朱兴国唐国敏
- 关键词：靶序列黑曲霉糖化酶基因
- 环匹阿尼酸类生物碱化合物的用途
- 本发明涉及环匹阿尼酸类化合物的制备方法及新用途。将米曲霉进行固体或液体发酵，对发酵产物进行分离纯化，并通过应用质谱、核磁共振波谱、红外光谱等技术及文献对于本发明制备的3个化合物进行表征。本发明还提供了环匹阿尼酸类化合物在...
- 刘宏伟刘丽宝丽韩俊杰
- 文献传递
- 黑曲霉糖化酶cis调控区上两个CCAAT框协同参与基因启动子的转录激活作用被引量：4
- 2003年
- 已报道的EMSA和Footprinting试验表明黑曲霉Aspergillus niger T21糖化酶基因glaA启动子区-489～-414bp及-390～-345bp(分别简称为DC,PC)是与蛋白粗提液中同一蛋白因子结合,并均含有CCAAT五核苷酸的序列。对DC,PC在糖化酶表达调控中的作用进行了分析,用CGTAA取代CCAAT,获得突变体DCm,PCm,两者均丧失体外结合蛋白因子的能力。突变体的体内分析结果显示,DC和PC中任何一个发生突变或改变DC,PC在原启动子中的相对方向,则启动子的活性下降到基础表达水平,将多拷贝串联后的DC引入A.niger T21glaA启动子原位,则内源糖化酶的表达和由该启动子引导的外源uidA基因的表达均发生下降,但由构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA引导的uidA的表达不受影响,而且EMSA结果表明不等DC拷贝的A.niger转化子中DNA结合蛋白的含量没有明显变化,表明多拷贝DC的引入引起了调控蛋白的滴定效应,从A.niger T21cDNA中克隆到AngHapC基因,将AngHapC基因引入上述含多拷贝DC而糖化酶低表达的A.niger菌株,AngHapC基因的表达使糖化酶的表达量得到明显回升。上述结果表明,DC和PC中CCAAT五核苷酸序列为蛋白因子结合所必需,而且两者必须同时与调控蛋白结合才能发挥促进转录的作用,AngHapC为与DC区域结合的正调节蛋白。
- 朱兴国H.M.Wang仇润祥刘丽董志扬唐国敏
- 关键词：黑曲霉糖化酶转录调控突变分析基因启动子
- 黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框与反式作用因子AngCP结合的分析被引量：4
- 2003年
- 依次通过20％～40％饱和硫酸铵、凝胶过滤、肝素柱层析及DNA亲和层析纯化了黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框DC(-489 bp～-414 bp)结合蛋白(AngCP1)及CCAAT框PC(-390 bp～-345 bp)结合蛋白(AngCP2).凝胶过滤分析和SDS-PAGE结果表明AngCP1和AngCP2的分子质量均约为120 ku,由分子质量为34 ku和50 ku的亚基组成.Western blot显示两者的34 ku亚基均能特异性地与鼠抗AngHapC抗体产生反应,进一步的电泳迁移率实验证实AngCP1和AngCP2为同一蛋白质,称为AngCP.Southwestern blot显示34 ku亚基结合于DC,而50 ku亚基结合于PC,并且34ku亚基与DC的结合能力强于50 ku亚基与PC的结合.上述AngCP具有与DC,PC不等结合强度的特点暗示三者在糖化酶表达调控中有着重要作用.
- 朱兴国仇润祥刘丽唐国敏
- 关键词：黑曲霉糖化酶蛋白纯化反式作用因子丝状真菌基因表达
- 丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建被引量：15
- 2002年
- 黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达分泌质粒pGT10 vhb通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株T2 1,检测在蛋白酶缺陷株AspergillusnigerT2 1 2 0 1和原株T2 1中VHb的分泌表达 ,结果表明在A .nigerT2 1 2 0 1中VHb表达水平显著高于原株 ,但Northernblot却显示在两菌株中vnb基因的转录水平近似 。
- 刘丽刘谨仇润祥朱兴国唐国敏
- 关键词：丝状真菌受体菌VHB
- 黑曲霉T21 glaA 5'上游调控区DNA与蛋白因子的相互作用分析被引量：5
- 2002年
- 以糖化酶生产菌株黑曲霉T21（Aspergillus niger T21）的糖化酶基因（glaa）5＇cis调控区片段为探针,采用电泳迁移率变动分析（EMSA）法,从黑曲霉蛋白粗提液中检测到与glaA 5＇调控区特异结合的蛋白因子,并把其结合DNA定位在T21 glaA 5＇调控区的-374～-344,-484～-414以及-580～-540 bp 3个区段,且此3个结合DNA的片段在EMSA实验中呈现交叉竞争,表明这3个DNA区段可与同一个蛋白因子相结合.以-374～344 bp序列为探针的紫外交联实验表明,该蛋白因子的分子量（或亚基分子量）约为10ku.利用DNase I足印分析确定了此蛋白因子在前两个区段的精细结合部位,并对其结合序列的特性进行了分析.
- 仇润祥朱兴国刘丽唐国敏
- 关键词：糖化酶基因
- 黑曲霉外源蛋白表达-分泌系统的构建
- 黑曲霉糖化酶（GLA）高产菌株A.nigerT21经紫外诱变,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定,筛选出一株胞外酸性蛋白酶活力仅为原株0.76﹪的菌株A.nigerT21-201.以该实验室前期工作中分离的主要元件黑曲霉T2...
- 刘丽
- 关键词：黑曲霉糖化酶
- 文献传递
- 环匹阿尼酸类生物碱化合物的用途
- 本发明涉及环匹阿尼酸类化合物的制备方法及新用途。将米曲霉进行固体或液体发酵，对发酵产物进行分离纯化，并通过应用质谱、核磁共振波谱、红外光谱等技术及文献对于本发明制备的3个化合物进行表征。本发明还提供了环匹阿尼酸类化合物在...
- 刘宏伟刘丽宝丽韩俊杰
- 文献传递
