刘淼
- 作品数：37 被引量：76H指数：6
- 供职机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ cDNA的克隆与组织表达分析被引量：1
- 2015年
- 为了研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ)在哲罗鲑Hucho taimen生长繁殖过程中所起的作用,根据Gen Bank收录的大西洋鲑IGF-Ⅱ基因开放阅读框序列(NCBI登录号:NM_001123647)设计用于哲罗鲑IGF-Ⅱ开放阅读框扩增的引物,以哲罗鲑肝脏总RNA反转录成的cDNA为模板,利用PCR方法克隆获得哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的开放阅读框。生物信息学分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的长度为645 bp,编码含有214个氨基酸残基的蛋白,该蛋白的相对分子质量为24554,等电点为9.92;哲罗鲑IGF-Ⅱ前肽由信号肽、B、C、A、D、E肽6部分构成;同源性比对和系统进化分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ与鲑科鱼类IGF-Ⅱ核苷酸序列同源性最高,聚为一支,其中与大西洋鲑的IGF-Ⅱ同源性最高(98.6%),该基因在进化过程中有着高度保守的进化特性;用荧光定量PCR技术检测2龄哲罗鲑IGF-Ⅱ基因在不同组织中的表达,结果显示,该基因在肝脏中表达量最高,在心脏、鳃、脾、后肠、头肾、胃中的表达量次之,而在前肠和脑中的表达量最低。
- 吴秀梅徐黎明王晓玉纪锋赵景壮刘淼曹永生卢彤岩尹家胜
- 关键词：哲罗鲑
- 用于检测传染性造血器官坏死病毒的LAMP引物及应用
- 本发明公开了一种用于检测传染性造血器官坏死病毒的LAMP引物及应用。本发明所提供的引物为引物组，由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6组成；或由所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4组成；所述引物1、所...
- 徐黎明卢彤岩刘淼
- 文献传递
- 一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用
- 本发明涉及一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用，其制备方法包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒表面糖蛋白(Glycoprotein，G)基因的特异性引物对；(2)利用病毒敏感细胞系培养I...
- 徐黎明卢彤岩赵景壮刘淼曹永生
- 文献传递
- 传染性造血器官坏死病毒新疆株的分离与鉴定被引量：7
- 2016年
- 在新疆维吾尔自治区某养殖场取患病虹鳟Oncorhynchus mykiss组织样本,进行传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离鉴定、电镜观察、回归感染及遗传进化分析研究。细胞培养结果显示:患病虹鳟组织样本能够感染鲤Cyprinus carpio上皮细胞(carp epithelial cell,EPC)产生典型细胞病变(cytopathic effect,CPE),收集病毒悬液命名为XJ-13。滴度测定实验表明:该病毒为10^(6.15)TCID_(50)/m L。回归感染实验表明:该分离株在浓度为10~5PFU/尾的剂量使体质量5g的虹鳟死亡率达87.5%。通过透射电镜观察发现患病虹鳟组织悬液感染的EPC细胞内存在大量的子弹状病毒粒子,PCR鉴定结果表明该病毒为IHNV。XJ-13的糖蛋白氨基酸序列的聚类分析结果显示,该病毒株与我国IHNV-Sn1203株具有最高的同源性(99%),与美国参考株WRAC的同源性为94.6%。结果表明:IHNV XJ-13是造成该养殖场虹鳟大量死亡的病原。
- 赵羽涵徐黎明刘淼卢彤岩刘红柏
- 关键词：糖蛋白进化分析虹鳟
- 重组虹鳟IFN-γ2的原核表达及抗IHNV活性分析被引量：4
- 2016年
- 为获得虹鳟IFN-γ2(rt IFN-γ2)抗传染性造血器官坏死病毒(IHNV)活性的相关数据,实验根据NCBI已发表序列设计引物,提取经植物血凝素刺激后的虹鳟头肾细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增471 bp的该基因完整开放阅读框。将该基因重组至原核表达载体p ET32a中,并转化大肠杆菌Rosetta,进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,目的蛋白以包涵体形式表达,大小约为38.4 ku。重组蛋白经复性、纯化后在CHSE-214细胞上进行抗IHNV活性分析,结果显示,rt IFN-γ2在CHSE-214细胞上抗IHNV活性为6.63×106U/mg。Real-time PCR结果显示,rt IFN-γ2免疫后,虹鳟头肾、脾、肝中IRF-1、IRF-2、IFN-I、IFN-γ和Mx表达水平均显著提高,总体而言免疫后2天机体抗病毒状态弱于免疫后1天。攻毒保护实验结果显示,免疫后1天进行IHNV攻击时,鱼死亡率为40%,而免疫后2天进行IHNV攻击时,鱼死亡率达到80%。研究表明,原核表达系统制备的重组虹鳟IFN-γ2不仅具有体外抗IHNV活性,更能激发虹鳟的抗病毒状态,从而为虹鳟抵抗IHNV感染提供一定的保护力。
- 曹永生徐黎明赵景壮刘淼张奇亚卢彤岩
- 关键词：原核表达
- 哲罗鲑胰岛素样生长因子-I的原核表达及活性鉴定被引量：1
- 2016年
- 为进一步了解哲罗鲑IGF-I,实验采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,从哲罗鲑肝脏的总RNA中扩增出胰岛素样生长因子-I（IGF-I）的c DNA开放阅读框（open reading frame,ORF）序列。利用原核表达载体p S构建重组表达质粒（IGF-I/p S）,并将其转化到宿主大肠杆菌Rosetta后经IPTG诱导获得重组哲罗鲑IGF-I蛋白。经SDS-PAGE电泳检测,在35~50 ku有条带与预期相符,且重组蛋白以包涵体的形式存在。包涵体经变性/复性实验后,获得纯化的IGF-I融合蛋白。ELISA鉴定结果显示,目的蛋白能特异性识别抗鱼类IGF-I抗体,表明获得了具有免疫活性的哲罗鲑IGF-I蛋白。细胞增殖实验（MTT法）结果显示,重组IGF-I蛋白对大麻哈鱼胚胎细胞（CHSE-214）、鲤上皮细胞（EPC）及虹鳟性腺细胞（RTG-2）均有显著促增殖作用,表明获得的重组IGF-I蛋白具有细胞水平的生物活性。本研究为深入了解IGF-I在哲罗鲑生长发育中的调控机制及绿色高效促生长制剂的研发奠定基础。
- 王晓玉徐黎明刘淼赵景壮卢彤岩曹永生尹家胜
- 关键词：哲罗鲑胰岛素样生长因子-I原核表达生物活性
- 北方地区淡水主养鱼类出血病综合防治技术
- 卢彤岩李绍戊王荻刘红柏赵吉伟尹家胜王秋实张颖徐黎明曹永生赵景壮刘淼
- 该项目对中国北方淡水主养区养殖鱼类出血性疾病开展流行病学调查、建立了该病细菌性病原的检测方法,对病原菌特性、分型、耐药性等进行深入研究,并初步建立起中国北方淡水主养鱼类出血病细菌性病原库.同时,建立起中国北方地区淡水鱼出...
- 关键词：
- 关键词：出血病防治淡水鱼养殖流行病学调查
- 鱼类传染性造血器官坏死病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：7
- 2014年
- 将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法。针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green I荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色。2%琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致。该方法实现了检测结果的可视化。特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA。本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测。
- 刘淼徐黎明卢彤岩赵景壮曹永生刘红柏尹家胜张金凤冯剑
- 关键词：RT-LAMP
- 鱼类传染性造血器官坏死病毒糖蛋白的酵母表面展示被引量：2
- 2016年
- 糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因。为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Sn1203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因片段后,连接酵母表面展示载体p YD1,构建重组质粒p YD1-G。将p YD1-G转化酿酒酵母EBY100细胞后,利用半乳糖诱导G蛋白的表达。利用细胞免疫荧光、Western Blotting及流式细胞仪检测酵母表面G蛋白的表达情况。细胞免疫荧光结果显示,转化了p YD1-G重组质粒的酵母细胞表面呈现出特异性荧光;Western Blotting结果显示,经半乳糖诱导后G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;流式细胞仪检测结果表明,随着半乳糖诱导时间的增加,G蛋白的表达量随之增加,并在诱导48 h时达到峰值。以上研究表明G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达,本研究为以酵母为活载体的新型口服疫苗的研制奠定了基础。
- 赵景壮徐黎明刘淼曹永生尹家胜刘红柏卢彤岩
- 关键词：糖蛋白真核表达酵母表面展示
- 我国虹鳟传染性造血器官坏死病防控研究现状被引量：7
- 2019年
- 虹鳟Oncorhynchus mykiss是我国主要冷水鱼养殖种类之一。传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis, IHN)是世界性的鲑科鱼类传染性疾病和制约我国冷水鱼产业发展的瓶颈之一。我国对IHN陆续开展了流行病学、病原学及防控技术等研究,取得了较大进展。本文简要综述了我国虹鳟IHN病害防控研究现状,主要包括IHN病毒基因型、分布、流行规律及疫苗研制等研究进展,以期为相关研究和我国虹鳟养殖业健康发展提供参考。
- 冯剑赵景壮刘淼卢彤岩纪锋徐黎明
- 关键词：虹鳟防控技术核酸疫苗
