周小愿
- 作品数：19 被引量：86H指数：5
- 供职机构：黄河水产研究所更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程水利工程更多>>
- 大鲵虹彩病毒的形态结构及其包涵体特征被引量：11
- 2015年
- 运用电镜和免疫荧光技术,对纯化的大鲵(Andrias davidianus)虹彩病毒粒子、感染病毒的EPC细胞以及确诊感染病毒的病鲵组织样品进行观察和分析。结果表明,纯化的大鲵虹彩病毒负染后电镜下显示球形结构,具囊膜,直径约150 nm;感染EPC细胞中的病毒颗粒呈典型的正二十面体结构,由核衣壳和核心构成,核衣壳呈正六边形,对角直径为(150±5)nm(N=30),核衣壳厚度约5 nm,核心直径为(98±18)nm(N=27)。在病鲵病变的肺和肾组织中发现存在大量聚集或分散的病毒颗粒,其形态特征和感染EPC细胞超薄切片观察的结果一致。免疫荧光电镜观察结果显示,感染病毒的细胞可观察到明显的红色荧光信号,且呈斑块状分布,大小不等。综合大鲵虹彩病毒初步的形态发生和免疫荧光观察结果,认为病毒感染细胞后在不同的发生时期会形成不同类型的病毒包涵体。
- 周小愿张星朗吉红韩亚慧贾秋红高宏伟
- 关键词：虹彩病毒包涵体
- 水利水电工程对水生生物多样性的影响与保护措施被引量：19
- 2009年
- 统筹解决水利水电工程建设与水生生物多样性保护之间的矛盾需要科学、合理地分析水利水电工程建设对水生生物多样性的影响。通过详细分析水生生态系统的构成和特点,比较全面、客观地分析了水利水电工程建设中由于水生生态系统水生生境条件改变、建造大坝的阻隔效应以及水库调峰运行等对水生生物多样性的不利影响;全面总结了我国水生生物多样性保护如法制建设、建立自然保护区、人工增殖放流、研究过鱼设施的等保护措施方面取得的成就,并分析指出现有保护实践中存在的问题,结合今后水利水电建设的发展提出了有针对性的水生生物多样性保护对策建议。
- 周小愿
- 关键词：水利水电工程
- 抗大鲵虹彩病毒MCPCOE蛋白单克隆抗体的制备及初步应用被引量：3
- 2016年
- 制备抗大鲵虹彩病毒(CGSIV)MCP COE蛋白的单克隆抗体,并对其基本特性进行鉴定及开展初步应用。用纯化的重组CGSIV MCP COE蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株。采用间接ELISA法、免疫印迹法和单克隆抗体亚型检测试剂盒等鉴定单抗的稳定性、特异性和亚型;采用腹水诱生法制备单抗腹水,饱和硫酸铵法纯化腹水单抗;间接ELISA法分别测定单抗杂交瘤细胞上清液和腹水单抗的效价;利用间接免疫荧光法观察CGSIV的增殖。结果显示,细胞融合克隆率为98.68%,阳性率为20.52%,得到1株能够稳定分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,命名为1M6。单克隆抗体的亚型属于Ig G2b,κ链;免疫印迹法和间接ELISA法测定结果显示,单抗具有很好的特异性;杂交瘤细胞株培养上清液的效价为1∶1600,腹水单抗效价为1∶2×106,亲和常数为2×105。间接免疫荧光显示CGSIV感染EPC细胞24 h后在宿主细胞质中可以观察到成熟的病毒粒子形成的包涵体,而且在宿主细胞核内也能发现病毒粒子。抗CGSIV MCP COE蛋白单克隆抗体的成功制备为CGSIV免疫学检测方法的建立和其他相关研究的开展奠定了基础。
- 周小愿张星朗贾秋红韩亚慧高宏伟
- 关键词：虹彩病毒单克隆抗体
- 大鲵虹彩病毒的分离纯化及其MCP基因序列分析被引量：4
- 2014年
- 【目的】确定陕西省略阳县某大鲵养殖场高致死性疾病的病原,分析其主要衣壳蛋白(MCP)的基因特征。【方法】采集患病大鲵,观察其临床症状,取其脏器组织,处理后分别分离细菌和接种鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞,观察细胞病变,分离病毒;对病原进行增殖,采用蔗糖密度梯度(20%,30%,40%,50%,60%)离心法进行纯化,电镜观察纯化样品。克隆分离病毒的MCP基因,测定其序列并进行系统进化树分析。【结果】患病大鲵背部有溃疡、头部胀大且有出血点,尾部有轻微的溃烂。取病鲵内脏组织样品分离病原,未分离到细菌;处理的内脏组织感染EPC细胞,出现细胞病变。电镜观察证实,在蔗糖密度梯度为50%~60%的样品中,病毒粒子的纯度最高,且结构较为完整;病毒粒子的直径约150nm,与虹彩病毒相似。MCPPCR扩增得到了预期长度(1 392bp)的特异性产物。NCBI BLAST结果显示,扩增的MCP序列与蛙病毒属的感染性造血器官坏死病毒(EHNV)、食用蛙病毒(RSV)、普通产婆蟾病毒(CMTV)以及梭鲈虹彩病毒(PPIV)的MCP全长的同源性最高,达到99%;与中华鳖虹彩病毒(STIV)、蛙病毒3型(FV3)、虎纹蛙虹彩病毒(RTV)等MCP全长的同源性为98%。系统发育分析结果显示,导致该例大鲵发病的病毒为蛙病毒属的虹彩病毒。【结论】造成陕西省略阳县某大鲵养殖场大鲵大量死亡的病原为蛙病毒属的虹彩病毒,将该株病毒命名为大鲵虹彩病毒略阳分离株(CGSIV-LY1112)。
- 张星朗周小愿张辉
- 关键词：虹彩病毒纯化MCP系统进化树
- 大鲵虹彩病毒MCP蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与纯化
- 2017年
- 为研制基于杆状病毒表达系统的大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)新型亚单位疫苗,将CGSIV主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因克隆至杆状病毒穿梭载体p Fast Bac1质粒中,构建了重组质粒p Fast Bac-MCP。转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经PCR筛选和测序获得了阳性重组杆粒r Bacmid-MCP,在昆虫细胞转染试剂介导下将该重组杆粒转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见大量重组杆状病毒存在于细胞中。按不同感染复数(MOI=2、5、10)将重组杆状病毒感染Sf9细胞进行CGSIV MCP的表达。SDS-PAGE检测结果表明,在MOI=10时,目的蛋白的表达量最高;间接免疫荧光观察结果显示,目的蛋白在感染细胞中得到表达,且分布在细胞表面。以抗CGSIV MCP单抗为抗体制备的免疫磁珠纯化目的蛋白并利用兔抗CGSIV MCP多抗血清检测目的蛋白的生物学活性。SDS-PAGE和Western blot结果显示,纯化的目的蛋白纯度很高,而且具有抗原活性,能够被兔抗大鲵虹彩病毒MCP多抗血清识别。利用杆状病毒表达系统成功进行了CGSIV MCP的表达,并应用免疫磁珠法进行了目的蛋白的纯化,为CGSIV新型亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 张星朗高志杨平凹周小愿贾秋红韩亚慧高宏伟
- 关键词：杆状病毒表达系统蛋白纯化
- 西部地区渔业持续发展战略研究
- 2009年
- 本文总结分析了中国西部地区主要省市渔业资源现状和发展潜力以及汶川大地震对西部渔业造成的灾难性创伤,并在此基础上,提出了加大渔业产业投入、深化西部渔业科技创新、注重西部渔业人才培养、加强西部渔业基础设施建设、保护西部渔业生态环境、调整农业产业结构、加大区域渔政执法力度等振兴西部渔业经济的战略思路。
- 张林林周小愿
- 关键词：西部渔业地震灾害
- 水工程对水生生物资源影响综述与对策建议被引量：4
- 2009年
- 结合水生生态系统构成和特点,分析水工程建设对水生生物资源的不利影响;总结了中国水生生物资源保护取得的成就,指出现有保护实践中存在的问题,对今后水工程建设提出了水生生物资源保护方面的对策、建议。
- 周小愿
- 关键词：水工程水生生物资源
- 养殖环境生物除氮脱氮技术研究进展被引量：3
- 2010年
- 随着我国水产养殖业的快速发展,养殖环境中氮的污染问题日益严重。生物除氮脱氮技术由于具有无可比拟的优势而受到人们的重视,近年来无论在基础理论还是应用实践方面发展迅速。本文总结了水产养殖中该项技术的最新研究进展,并指出今后的研究方向和重点。
- 周小愿金卫荣高宏伟韩亚慧高志
- 关键词：养殖环境
- 大鲵虹彩病毒-LY株主要衣壳蛋白基因克隆和分子特征研究被引量：5
- 2015年
- 为明确大鲵虹彩病毒-LY株主要衣壳蛋白（mcp）基因分子特征和中国不同CGSIV毒株mcp基因变异及病毒的系统进化关系。克隆了CGSIV-LY株mcp基因,并运用生物信息学软件对获得的基因信息进行了分析。结果表明CGSIV-LY株mcp基因全长1392 bp,可编码463个氨基酸。预测蛋白质分子量为50.03 ku,理论等电点是5.75,为亲水性可溶蛋白。CGSIV-LY株mcp不含有信号肽;没有跨膜区存在;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,存在8个潜在的N-糖基化位点,存在17个潜在的O-糖基化位点和20个潜在的磷酸化位点。CGSIV-LY株mcp二级结构中无β-折叠,无规则卷曲占57.66%,延伸链占31.11%,α-螺旋占11.23%,主要以延伸链和无规则卷曲为主。氨基酸序列包含3个结构域：氨基酸N末端,氨基酸C末端和capsid_NCLDV保守区结构域,并在氨基酸序列的第414~436区存在一个低复杂度域。氨基酸序列多重比对和基于mcp氨基酸序列构建的蛙病毒属成员系统进化树分析结果显示,包括CGSIV-LY株在内的中国出现的不同CGSIV毒株之间mcp基因差异很小,为平行进化关系,共同聚为蛙病毒属成员独立的一支。中国出现的不同CGSIV毒株mcp基因应具有基本一致的分子结构和特征。
- 周小愿张星朗韩亚慧贾秋红高宏伟
- 关键词：虹彩病毒克隆
- 变温动物特殊动力作用的研究进展被引量：5
- 2009年
- 在总结对变温动物特殊动力作用(SDA)特征参数研究的基础上,从温度、摄食水平、食物的营养组成以及活动等方面深入分析了变温动物SDA的影响因素,指出变温动物SDA研究的方向和重点。
- 周小愿韩亚慧张林林陈媛媛
- 关键词：变温动物特殊动力作用影响因素
