目的观察整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻小鼠(UUO)肾脏中的表达,并探讨其在肾小管上皮细胞转化中的作用。方法将10周龄健康雄性 CD-1小鼠随机分为假手术组(C,n=20)和 UUO 组(n=40),分别于术后1、3、7、14 d 处死小鼠。采用 Masson 染色观察肾间质纤维化程度;用免疫组织化学(SP 法)的方法观察 ILK、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot 半定量分析梗阻侧肾组织 ILK 的蛋白水平;用即时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测 ILK、E-cadherin 和α-SMA mRNA 的表达。结果免疫组织化学显示 ILK 在假手术组只有微量表达,主要位于肾小球脏层上皮细胞,UUO 术后1 d ILK 蛋白表达显著增多(t=16.5,P<0.01),7 d 达高峰。术后3 d 肾小管上皮细胞及肾间质α-SMA 阳性细胞数显著增多(t=21.0,P<0.01),肾小管上皮细胞表达 E-cadherin 明显减少(t=5.6,P<0.01)。根据免疫组织化学结果分析,术后1～7 d,ILK 蛋白表达与α-SMA 蛋白表达呈正相关(R=0.88,P<0.01),与 E-cadherin表达呈负相关(R=-0.87,P<0.01)。Western blot 结果显示 ILK 蛋白表达于术后1 d 明显增加,7 d达高峰,14 d 表达不再增加(P>0.05)。RT-PCR 结果显示术后1 d ILK mRNA 表达增多(t=141.6,P<0.01),E-cadherin mRNA 表达于术后3 d 显著减少(P<0.01),α-SMA mRNA 表达于术后3 d 开始增多(P<0.01)。结论 UUO 模型早期整合素连接激酶表达增高,可能通过介导肾小管上皮细胞-间充质转化而参与肾脏纤维化的发生发展。
