公共文化服务平台

重组人载脂蛋白AI米兰突变体在毕赤酵母中的表达方法: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种重组人载脂蛋白Al米兰突变体(rAIM)在毕赤酵母中分泌表达的方法。将突变后的apoAI—milano cDNA插入表达质粒pPIC9k，电击导入毕赤酵母GS115，通过对摇瓶培养基...; 宋大新赵志安张彦钟江; 文献传递

产人胃蛋白酶原的酵母工程菌及其制备方法和应用: 本发明公开了一种产人胃蛋白酶原的酵母工程菌，该酵母工程菌是由重组表达载体转化的酵母菌，该重组表达载体包含人胃蛋白酶原基因。本发明还公开了该酵母工程菌的制备方法和应用。本发明的酵母工程菌，实现了人胃蛋白酶原C在毕赤氏甲醇酵...; 徐晓晶宋大新金维荣; 文献传递

bglS基因的亚克隆及功能分析被引量：1: 1991年; 带有枯草杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因(bglS)7.1kb的EcoRI片段,经亚克隆,将1.5kb的EcoR I-Pst I酶切片段插入pUC19的polylinker上,转化E.coli JM101后合成出β-1,3-1,4葡聚糖酶,它能专一性地降解大麦β-1,3-1,4葡聚糖和地衣多糖,酶的大部分(>50%)留在胞内,其中25%分泌到胞外。根据酶特性分析,大肠杆菌中合成的β-1,3-1,4葡聚糖酶完全与出发菌株枯草杆菌相同。; 陈永青宋大新黄兴奇江红敖万远郑伟军; 关键词：基因亚克隆功能分析

枯草杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质研究被引量：4: 1990年; β-葡聚糖是大麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份,约占大麦总重量的10％。β-葡聚糖酶（Endo-1,3-1,4-β-Glucanase）能专一性地分解大麦β-葡聚糖,产生可利用的还原糖。因此,是啤酒酿造业,农副产品加工业中一个亟待开发应用的重要工业用酶。本文报道了对枯草杆菌（B.SubtiliS 1.88）中分离制备的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质的研究结果。1; 黄兴奇郑伟军陈永青宋大新; 关键词：枯草杆菌酶学性质

人载脂蛋白ApoAⅠ在毕赤氏酵母胞内表达的方法: 本发明属生物工程技术领域，具体为一种人载脂蛋白ApoA I在毕赤氏酵母胞内表达的方法。它将人工合成的apoA I基因插入胞内表达质粒pPIC3.5k，电击导入毕赤氏酵母菌株GS115，经摇瓶发酵和甲醇诱导，在酵母细胞内有...; 宋大新赵志安杨婷婷张淼张彦; 文献传递

粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白锌离子结合域定点突变被引量：8: 2007年; 粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni granulovirus,TnGV)增强蛋白(enhancin)具有增强病毒感染力的作用。该蛋白包含一个多种杆状病毒增强蛋白都具有的保守结构域HELGH,是典型的金属蛋白酶锌离子结合域,但该结构域对增强蛋白生物活性的重要性尚未得到研究。本研究通过定点突变构建了该结构域的5个氨基酸分别突变为2种不同氨基酸的共10种增强蛋白突变体基因,并用杆状病毒载体进行了重组表达。活性测定发现,10种突变型增强蛋白大部分都丧失了野生型增强蛋白所具有的降解粉纹夜蛾幼虫围食膜粘蛋白的生物学功能,只有1种(第4位G突变为A)保留该生物学活性。这一结果表明锌离子结合域对增强蛋白生物活性具有重要作用,也提示增强蛋白确是一种金属蛋白酶。; 尹隽单梁宋大新钟江; 关键词：杆状病毒增强蛋白金属蛋白酶围食膜定点突变

人载脂蛋白基因apoAⅠ在毕赤氏酵母中的表达被引量：2: 2004年; 将化学法合成的apoAⅠ基因插入分泌型载体 pPIC9K .将重组的 pPIC9K apoAⅠ用BglⅡ酶切后 ,转化PichiapastorisGS115菌株 ,筛选获得G4 18高抗性转化子 .转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导 ,上清液用SDS PAGE检测 ,有明显的rApoAⅠ表达 .经Phenyl sepharose 6 (FastFlow)疏水层析柱和SephadexG 5 0 (coarse)分子筛层析 ,得到rApoAⅠ蛋白纯品 .经Westernblotting ,N末端氨基酸顺序测定证明 ,毕赤氏酵母表达的rApoAⅠ与人血浆提取的ApoAⅠ基本一致 .; 张淼赵志安杨婷婷刘林宋大新; 关键词：分泌型载体毕赤氏酵母蛋白质印迹

ApiIa抗菌肽基因的化学合成、克隆及其在酵母中的表达被引量：4: 1998年; 用固相亚磷酰胺法合成了ＡｐｉＩａ抗菌肽基因，全长为８０个核苷酸．它被分成４个寡核苷酸片段，分别在ＤＮＡ合成仪上合成．经分离纯化后的寡核苷酸片段经酶促连接，然后被克隆到分泌型载体质粒ｐＦＤ１０１上．经限制酶酶切、ＰＣＲ模板检测以及双链ＤＮＡ序列分析检测，证明合成的ａｐｉＩａ基因和设计的完全一致．将含有ａｐｉＩａ基因的质粒ｐＦＤ１００１经ＢｇｌⅡ 酶切后，转化毕氏酵母．所得转化子经摇瓶发酵，上清液经２５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，有ＡｐｉＩａ抗菌肽表达．用抑菌圈试验作定性实验表明，表达的ＡｐｉＩａ有明显的生物活性．; 韩万江盛泽娟张青宋大新陈永青夏天辉; 关键词：化学合成无性系抗菌肽

重组人载脂蛋白A-Ⅰ在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高表达被引量：3: 2004年; 高密度脂蛋白 (High densityLipoprotein ,HDL)是血浆中重要的脂蛋白 ,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(ApoliproteinAⅠ ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白 ,首先尝试利用Pichiapastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段 ,将其插入到P .pastoris分泌型载体pPIC9K上 ,BglⅡ酶切线性化后电转化P .pastorisGS115 ,将获得的 10 0 0多个转化子依次在含不同G4 1 8浓度的YPD平板筛选高抗性转化子 ,得到的2 2个高抗性转化子经甲醇诱导 ,SDS PAGE检测得到 6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化 ,结果显示 :接种后培养 2 4～ 2 8h ,转入诱导阶段 ,培养基pH值在 7～ 7 5 ,菌体密度OD6 0 0 =80左右 ,以 1%甲醇诱导 96h最有利于ApoAⅠ的表达 ,表达水平达 16 0mg L。 14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当 ,均高于其它表达系统。; 冯美卿蔡钦生宋大新钟江吴满平周珮; 关键词：毕赤酵母

分子伴侣 SecB 基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达被引量：6: 1997年; 分子伴侣ＳｅｃＢ基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达周颖张青殷长传宋大新陈永青（复旦大学微生物学系和遗传研究所上海２００４３３）分子伴侣（Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ）是细胞内催化及维持其他蛋白质正确构象的一类蛋白质分子［１，２］。研究表明，分子伴...; 周颖张青殷长传宋大新陈永青; 关键词：分子伴侣基因表达

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

宋大新