常晨
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
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- 我国部分省份猪嗜血支原体感染血清流行病学调查被引量：1
- 2013年
- 为研究猪嗜血支原体在猪群中的感染情况,本研究采用阻断ELISA方法对来自我国7个省(区)的1 492份猪血清进行了检测,并对其感染的时间、空间和种群间的分布进行了分析。结果表明:血清总阳性率为17.36%,其中上海地区最高为57.01%,广西地区最低为4.55%,安徽、浙江、江苏、江西和四川分别为28.40%、20.25%、13.93%、7.14%和5.49%。感染时间从6、7月份开始,9月份感染比例达到最高(33.94%),然后开始慢慢下降。种群间分析显示,母猪血清阳性率为65.48%,仔猪为4.8%。血清流行病学调查结果显示猪嗜血支原体在我国猪群的感染比较普遍,而且呈现出逐年增加的趋势,应该引起足够的重视。
- 程王琨侯成才常晨李玉峰
- 关键词：阻断ELISA血清流行病学调查
- 猪乳转铁蛋白N端活性区的表达和多克隆抗体的制备
- 2012年
- 在采用亲和层析技术筛选猪嗜血霉形体表面黏附蛋白MSG1相关受体的过程中,发现猪乳转铁蛋白(LTF)可能是MSG1蛋白的潜在受体。为了对其受体功能进行确认,对截短的猪乳转铁蛋白进行了原核表达和多克隆抗体的制备。首先,以人工合成的猪乳转铁蛋白全基因为模板,通过PCR扩增猪乳转铁蛋白基因N端762个碱基后连接入pET-32a(+)载体中。其次,将重组质粒导入大肠杆菌BL-21感受态细胞中用IPTG进行蛋白诱导表达,对表达的重组蛋白用His单抗进行特异性鉴定,并对鉴定后的蛋白应用包涵体洗液进行纯化。最后,以纯化的蛋白通过背部多点皮内注射免疫小鼠和家兔制备多克隆抗体。结果,重组蛋白的分子质量在44ku左右,能够与His单抗发生特异性反应。Western-blot反应证明,制备的鼠和家兔多克隆抗体具有高度的特异性。猪乳转铁蛋白鼠和家兔多抗的制备为猪乳转铁蛋白受体功能的确认和激光共聚焦对其定位提供了技术储备。
- 马培培李玉峰常晨王帅彪王晓晔
- 关键词：重组蛋白多克隆抗体
- 猪嗜血支原体MSG1蛋白B细胞表位的解析及双抗体夹心ELISA方法的建立
- 猪嗜血支原体（Mycoplasmassuis/M.suis）又称猪附红细胞体(porcineeperythrozoon/PE)，是传染性贫血病（Infectiousanemia）的病原体，危害全球养猪业。目前猪嗜血支原体...
- 常晨
- 关键词：B细胞表位双抗体夹心ELISA
- 文献传递
- 入侵地与原产地加拿大一枝黄花木质素代谢差异的研究
- 加拿大一枝黄花(Solidago canadensis L.)原产于北美地区，20世纪30年代作为观赏花卉被引入我国，后逸生至野外，成为一种恶性杂草，破坏了我国的生态环境并且造成了严重的经济损失。天敌逃逸假说(Enemy...
- 常晨
- 关键词：加拿大一枝黄花入侵机制木质素
- 加拿大一枝黄花茎秆木质素含量和木质素化程度的测定方法被引量：5
- 2018年
- 测定木质素含量的方法主要有Klason法和巯基乙酸(TGA)法,其中Klason法测定类型较全面,而TGA法主要用于测定β-O-4型木质素含量。Fasga染色法和Quantifasga法可用于观察和测定木质部和韧皮部木质素化程度。为了探究上述方法是否能用于测定加拿大一枝黄花(Solidago canadensis)茎秆木质素含量和木质素化程度,为进一步研究木质素与其入侵能力的关系提供试验方法,本研究选用采集于南京、南通和宁波3个地区的加拿大一枝黄花种群,在生长期和成熟期分别测定了它们的株高和茎直径;利用上述方法测定其茎秆木质素含量及木质部和韧皮部木质素化程度。结果显示,南京种群成熟期株高、茎直径均显著高于其他2个种群。Klason法、TGA法的测定结果显示,3个地理种群生长期的木质素含量没有显著差异;且随着生长发育期的延长均显著增加;成熟期南通种群具有最高的总木质素含量。Fasga染色法和Quantifasga法测定结果显示,在生长期各地理种群木质部和韧皮部木质素化发育程度相似;但在成熟期,南京种群木质部木质素化程度显著高于宁波种群。上述结果表明,Klason法和TGA法都能有效测定加拿大一枝黄花木质素含量,由于测定的木质素类型不同,建议根据实验目的选择;Fasga染色法及Quantifasga法能应用于加拿大一枝黄花茎秆木质素化程度的定性和定量研究。
- 常晨程继亮强胜宋小玲张裕
- 关键词：加拿大一枝黄花木质素TGA
- 汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立被引量：2
- 2013年
- 为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定。以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法。结果如下:抗原包被量0.4μg·mL-1,37℃包被2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD450nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑。建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72%。该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查。
- 程王琨常晨马培培陈攀郑芳园李玉峰
- 关键词：巴尔通体间接ELISA
- 猪嗜血支原体猪体感染试验被引量：5
- 2013年
- 为研究猪嗜血支原体致病机制,将其感染健康猪和切脾猪,从临床症状、血液学和生物化学指标、菌血症、抗体水平以及细胞因子、病理剖检和组织学检查等方面系统研究猪嗜血支原体病的发病过程。结果显示,与不切脾猪相比,切脾猪体内的猪嗜血支原体含量(血液中含量1.0×108拷贝·mL-1)更高,维持时间更长。猪嗜血支原体血液中含量和白细胞计数、血细胞比容、红细胞计数和铁等指标显著相关。仅1头猪产生猪嗜血支原体抗体,3组猪血清中均没有检测到细胞因子IL-4和IFN-γ。本研究复制出猪嗜血支原体病病例,记录了该病的发展过程,为该病的病理机制、预防、诊断等方面的研究奠定基础。
- 王帅彪李玉峰常晨程王琨马培培邹垚
- 关键词：致病机制
