张先舟
- 作品数：60 被引量：214H指数：9
- 供职机构：河北农业大学食品科技学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金河北省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学医药卫生化学工程更多>>
- G-四联体与聚合酶链式反应联用可视化检测沙门氏菌被引量：2
- 2021年
- 建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标,设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物,通过PCR的特异性识别并扩增目标序列,获得大量含G-四联体的双链DNA,变性后与氯高铁血红素结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶(DNAzyme),并催化H_(2)O_(2)与2,2’-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐由无色变为绿色,实现G-四联体与PCR联用对沙门氏菌的可视化检测。在优化的检测体系下,沙门氏菌基因组的质量浓度对数与421 nm处的吸光度具有良好的线性关系,其回归方程为y=0.1299x+0.2179,R^(2)=0.9945,线性范围0.07~771.6 ng/μL,灵敏度为0.07 ng/μL。特异性分析表明:此方法适用于沙门氏菌属的检测,可成功应用于人工污染沙门氏菌牛奶的检测,检出限为1.2×10^(2) CFU/mL。通过检测30种市售样品,发现其结果与国标检测方法结果一致。本研究为食源性致病菌的检测提供了新的策略。
- 刘健慧耿凤珍张先舟高浩李聪高洁檀建新
- 关键词：沙门氏菌
- LAMP检测转基因大豆方法的建立被引量：3
- 2010年
- 针对转基因大豆的特异基因CP4-EPSPS(GenBank accession numberAY5966948)设计引物,用LAMP引物在线设计软件设计引物。对反应温度、反应时间、镁离子浓度、Bst DNA聚合酶浓度等扩增条件进行优化,建立了LAMP反应体系,检出限为0.01%。
- 李琳张先舟何义张伟
- 关键词：转基因大豆LAMP核酸
- 黄曲霉毒素B1核酸适配体筛选和检测方法的建立被引量：6
- 2020年
- 建立一种高灵敏的快速检测黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计针对AFB1核酸适配体的筛选方案。经过10轮筛选,共获得45条ssDNA序列。挑选具有代表性的6条序列进行亲和力分析实验,其解离常数Kd分别为16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31 nmol/L。选用亲和力较高的AFB-5、AFB-8进行特异性实验,结果显示所筛选的适配体能特异性吸附AFB1。最后利用适配体AFB-8作为识别元件建立了基于纳米金比色检测AFB1的方法。在优化的检测条件下,AFB1质量浓度与A520 nm值有良好的线性关系,其回归方程为y=-0.00709x+0.46142(R^2=0.9979),线性范围为0.025~10 ng/mL,检出限为0.025 ng/mL。通过特异性实验和对大米样品加标回收实验,加标回收率为83.36%~105.74%,证明本方法的可行性。
- 张敏张先舟李聪高浩刘健慧田益玲马雯李英军檀建新
- 关键词：黄曲霉毒素B1核酸适配体纳米金
- 环介导等温扩增技术检测沙门氏菌反应体系的优化被引量：10
- 2010年
- [目的]建立快速检测沙门氏菌的环介导等温扩增(LAMP)技术。[方法]以沙门氏菌的特异性基因(invA)序列为靶序列设计引物,并对该序列进行等温扩增;对Mg2+浓度、反应温度和反应时间扩增条件进行优化,并对沙门氏菌进行检测和鉴定。[结果]在Mg2+浓度为2.0mmol/L时,62℃反应40min,扩增可达最佳效果,LAMP法检测的灵敏度为7.8cfu/ml。[结论]建立了快速检测沙门氏菌的LAMP技术,该方法灵敏度高、耗时短、方法简便,便于在基层推广,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。
- 张胜凯张先舟王羽马晓燕张会彦张伟
- 关键词：环介导等温扩增沙门氏菌
- 改良LAMP检测鸡肉中单增李斯特氏菌的研究被引量：5
- 2018年
- 本研究建立一种改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测鸡肉中单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L. monocytogenes)的方法。针对单增李斯特氏菌的溶血素基因(hlyA)设计LAMP引物,对单增李斯特氏菌进行特异性检测,通过荧光曲线和肉眼观察荧光颜色来判定检测结果。试验结果表明:改良LAMP方法检测单增李斯特氏菌具有良好的特异性,7株单增李斯特氏菌呈阳性结果,24株非单增李斯特氏菌呈阴性结果。与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法相比,改良LAMP方法具有灵敏度高(5.4×100 fg/μL)、检出限低(3.9×100 CFU/g)的特点,均是PCR结果的100倍。对66份鸡肉样品进行检测,得到改良LAMP方法的敏感性为100%,特异性为98.41%,符合率为98.48%。综上所述,改良LAMP方法能够快速、准确的检测单增李斯特氏菌,具有很好的应用前景。
- 冯显显杨倩张先舟马晓燕李英军张伟王建昌陈启跃
- 关键词：单增李斯特氏菌鸡肉
- 免疫亲和层析技术协同酶联免疫吸附法检测赭曲霉毒素A被引量：3
- 2024年
- 利用免疫亲和层析技术(immunoaffinity chromatography,IAC)对样品中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)进行捕获与浓缩,利用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法对IAC捕获的目标物OTA进行测定。IAC与ELISA中的抗OTA单克隆抗体来自不同的克隆株,分属不同独特型,与OTA结合靶点的选择性存在差异,IAC与ELISA协同检测,可以有效过滤OTA结构类似物造成的干扰,提高免疫分析的特异性与灵敏度。该方法用于加标样品测定时,OTA的检出限为0.2 ng/g,定量限为0.4 ng/g,OTA的平均回收率为75.9%,与单一的ELISA法相比,该方法虽然回收率略低,但灵敏度可以显著提高,达到ELISA法的60倍。通过对49份样品的实际检测,该方法检出阳性样品与国标法的符合率达到100%,漏检率为0%,由此可见,该方法在准确性上表现出明显的优势。作为一种综合免疫分析技术,该方法不需要大型仪器设备,对操作环境没有严格要求,便于基层实验室对样品中OTA的分析。
- 张蕴哲张先舟袁耀武张伟
- 关键词：酶联免疫吸附法赭曲霉毒素A
- G-四链体与As-PCR联用可视化检测沙门氏菌被引量：1
- 2023年
- 沙门氏菌是食源性病原菌,常在食品媒介中传播,因此快速检测是控制该病原菌的关键。本研究用沙门氏菌基因组DNA作模板,通过对不对称PCR(As-PCR)扩增条件的优化,证明当非限制性引物HF终浓度0.4μmol/L,与限制性引物GR终浓度比10∶1、退火温度58℃,扩增40个循环时可获得最大浓度的单链DNA(ssDNA)产物。带有G-四链体序列的ssDNA与40μmol/L氯化血红素作用60 min时,G-四链体显示出最高的过氧化物酶活性。在此基础上,将As-PCR和G-四链体联用,实现了可视化检测沙门氏菌invH基因,在2 pg/μL~258 ng/μL的质量浓度区间,质量浓度对数与吸光值A421nm呈线性关系(y=0.0691x+0.3085,R2=0.9729)。对污染的牛奶样品检测,检出灵敏度高,为35 CFU/mL,且操作便捷,为病原微生物检测提供了新技术支撑。
- 刘健慧张先舟张蕴哲王红静李雪瑶耿凤珍檀建新
- 关键词：沙门氏菌
- 改良环介导等温扩增技术快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌被引量：30
- 2009年
- 【目的】采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌。【方法】以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的16S-23SrRNA间区序列作为靶序列,设计内、外引物和环引物,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果。【结果】LAMP检测阪崎肠杆菌的灵敏度为0.101CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1.1CFU/g。采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时1h。而对照,PCR检测阪崎肠杆菌的灵敏度为101CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1100CFU/g。采用同样方法提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时3h。【结论】因此,LAMP检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌灵敏度高,耗时短,方法简便。
- 胡连霞张伟张先舟袁耀武张蕴哲张会彦马晓燕苏旭东
- 关键词：环介导等温扩增LAMP阪崎肠杆菌婴儿配方奶粉
- 一种燕麦甜醅生产方法
- 本发明属于燕麦传统产品现代化生产的一种加工方式，在传统燕麦甜醅生产工艺的基础上，分离纯化了甜醅生产的主要发酵菌种，采用纯种接种的方式对预处理好的燕麦原料进行发酵后添加甜味剂和稳定剂进行成品化处理，保证了甜醅产品品质的一致...
- 田益玲张伟李慧静李宁张先舟王羽马晓燕
- 高产酵母壁多糖菌株的选育及其酿造性能研究被引量：2
- 2012年
- 为了获得高产细胞壁多糖的突变菌株,从成品红葡萄酒中筛选出84株酿酒酵母菌,采用苯酚-硫酸法对84株菌进行细胞壁多糖含量的测定,筛选得到产细胞壁多糖量高于对照菌株得4株酿酒酵母菌,对4株酵母菌进行发酵性能实验和3项耐性实验,试验结果表明,K73菌株含有较高的细胞壁多糖,与对照菌株有显著性差异。在模拟发酵实验中,菌K73表现出显著性优势。
- 孔维涛张先舟王羽马晓燕梁磊张伟
- 关键词：红葡萄酒发酵性能
