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人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及初步应用被引量：2: 2010年; 目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融合蛋白经切胶回收纯化后免疫大白兔制备抗体。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测Ago2在细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察Ago2的细胞定位。结果:成功构建表达质粒,继而k-Ago2得以表达与纯化,免疫大白兔后得到Ago2多克隆抗体。ELISA检测抗体效价为1∶19 000,Western blot确定抗体具有高度特异性,并成功地用该抗体检测到Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。结论:Ago2多克隆抗体的成功制备,对RNAi机制的深入研究及其进一步的临床应用均具有重要价值。; 李海芳浦永汤石明强冉汤华; 关键词：多克隆抗体 RNA干扰

慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖被引量：1: 2010年; 甲胎蛋白(AFP)是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法,本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后,Western印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%(P<0.05).pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞,感染3 d时GFP的表达量达95%,感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因.Western印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后,AFP表达水平均有降低,抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后,细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制.; 张艳强冉唐晓燕李怡璇刘民李欣汤华; 关键词：HEPG2细胞甲胎蛋白 RNA干扰慢病毒

mir-214通过靶定plezin-b1抑制肿瘤细胞的运动和增殖能力: 目的： microrna（mirna）是一类新发现的能够调控其靶基因表达水平的小rna分子家族。近几年已经发现并确定了上千种mirna，目前mirna的功能研究正日益成为生物学一个非常活跃的研究领域。本研究旨在结...; 强冉; 关键词：MICRORNA 靶基因肿瘤细胞增殖能力; 文献传递网络资源链接

miR-214通过靶定Plexin-B1抑制肿瘤细胞的运动和增殖能力: 目的： MicroRNA（miRNA）是一类新发现的能够调控其靶基因表达水平的小RNA分子家族。近几年已经发现并确定了上千种miRNA，目前miRNA的功能研究正日益成为生物学一个非常活跃的研究领域。本研究旨...; 强冉; 关键词：MICRORNA 靶基因肿瘤细胞增殖能力; 文献传递

人DFF45蛋白多克隆抗体制备及其初步应用被引量：4: 2010年; 目的:表达、纯化带GST标签的DNA裂解因子45(DNA fragmentation factor 45,DFF45)融合蛋白并制备多克隆抗体。方法:构建pGEX-5X-1/DFF45原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导融合蛋白表达,经纯化后免疫日本大耳白兔得到多克隆抗体并用CNBr-activatedSepharoseTM4B进行纯化。用间接ELISA法检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,同时用免疫荧光染色鉴定抗体特异性并观察DFF45的细胞定位。进一步检测DFF45在人类几种细胞系的表达差异情况。结果:成功构建原核表达质粒,表达、纯化DFF45蛋白并免疫动物后得到多克隆抗体。间接ELISA法显示抗体效价达1∶20 000,Western blot确定抗体具有高度特异性。应用该抗体检测发现DFF45在人类几种细胞系中表达存在差异并观察到其细胞定位。结论:DFF45多克隆抗体的成功制备及其在人类细胞系的差异表达,为进一步研究DFF45基因与肿瘤及其相关疾病的关系奠定了基础。; 孔卫青李海芳刘涛吴海东强冉汤石明刘民汤华; 关键词：DFF45 融合蛋白多克隆抗体

miRNA对肿瘤细胞活性影响的探讨被引量：8: 2006年; 目的试探讨m iRNA对肿瘤细胞活性的影响。方法利用脂质体介导法将5种m iRNA的反义寡核苷酸(AMR)转染至不同的肿瘤细胞,以不相关序列为对照,37℃35%CO2孵箱培养72 h后,用MTT法检测细胞活性。结果不同的m iRNA对肿瘤细胞活性的影响是不同的,既便同一种m iRNA对不同肿瘤细胞活性的影响也有可能是不相同的。结论不同的m icroRNA对肿瘤细胞活性的影响是不同的,同一种m icroRNA对不同肿瘤细胞活性的影响也有可能是不相同的。; 孟颖汤华强冉刘民李欣; 关键词：细胞活性

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强冉